检索结果-内蒙古大学图书馆

携带HR-GFP报告基因的DNA损伤同源重组修复检测系统的建立及初步应用

西部医学 2013年第12期25卷 1770-1774页

作者：邓昭敏李莎李明远王欢任来峰郭连娣刘聪丁娜娜四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所四川成都610041

目的建立DNA损伤同源重组修复检测系统(Ⅰ-Sce I-HR),应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的人骨肉瘤细胞(U2OS)模型,探索细胞DNA损伤后的修复特性奠定基础。方法通过分子克隆构建携带Ⅰ-Sce I归位内切酶识别序列的真核表达载体pcDNA3-HR-G... 详细信息

目的建立DNA损伤同源重组修复检测系统(Ⅰ-Sce I-HR),应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的人骨肉瘤细胞(U2OS)模型,探索细胞DNA损伤后的修复特性奠定基础。方法通过分子克隆构建携带Ⅰ-Sce I归位内切酶识别序列的真核表达载体pcDNA3-HR-GFP,将该质粒转染入U2OS细胞中,经G418稳定筛选。随后分别瞬时转染入携带归位内切酶Ⅰ-Sce I的表达质粒pCBASCEI,以及体外经Ⅰ-Sce I线性化pcDNA3-HR-GFP。48小时后用免疫荧光方法检测DNA双链损伤效应分子-γ-H2AX,同时观察EGFP荧光信号;72小时后用Western blot检测报告蛋白EGFP的表达,评估DNA双链断裂后同源重组修复情况。结果酶切鉴定和测序证实pcDNA3-HR-GFP真核表达载体构建成功;Ⅰ-Sce I-HR系统引入U2OS细胞中后,γ-H2AX表达明显上调,荧光显微镜和Western blot均显示EGFP表达。结论 DSB细胞同源重组修复模型构建成功,Ⅰ-Sce I-HR系统能够成功地诱导U2OS细胞株产生DSB,并出现同源重组修复,为进一步研究DNA同源重组信号传导提供了有效的研究工具。

关键词：同源重组 DNA双链断裂 Ⅰ-Sce I-HR

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携带HR-GFP报告基因的DNA损伤同源重组修复检测系统的建立及初步应用

携带HR-GFP报告基因的DNA损伤同源重组修复检测系统的建立及初步...

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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：李莎王欢任来峰郭连娣刘聪丁娜娜李婉宜李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所

目的:建立DNA损伤同源重组修复检测系统(I-SceI-HR),应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的人骨肉瘤细胞(U2OS)模型,探索细胞DNA损伤后的修复特性奠定基础。方法:通过分子克隆构建携带I-Sce I归位内切酶识别序列的真核表达载体pcDNA3-HR-GFP... 详细信息

目的:建立DNA损伤同源重组修复检测系统(I-SceI-HR),应用该系统制备DNA双链断裂(DSB)的人骨肉瘤细胞(U2OS)模型,探索细胞DNA损伤后的修复特性奠定基础。方法:通过分子克隆构建携带I-Sce I归位内切酶识别序列的真核表达载体pcDNA3-HR-GFP,将该质粒转染入U2OS细胞中,经G418稳定筛选。随后分别瞬时转染入携带归位内切酶I-Sce I的表达质粒pCBASCEI,以及体外经I-Sce I线性化pcDNA3-HRGFP。48h后用免疫荧光方法检测DNA双链损伤效应分子——γ-H2AX,同时观察EGFP荧光信号;72h后用Western blot检测报告蛋白EGFP的表达,评估DNA双链断裂后同源重组修复情况。结果:酶切鉴定和测序证实pcDNA3-HR-GFP真核表达载体构建成功;I-Sce I-HR系统引入U2OS细胞中后,γ-H2AX表达明显上调,荧光显微镜和Western blot均显示EGFP表达。结论:DSB细胞同源重组修复模型构建成功,I-Sce I-HR系统能够成功地诱导U2OS细胞株产生DSB,并出现同源重组修复,为进一步研究DNA同源重组信号传导提供有效的研究工具。

关键词：同源重组 DNA双链断裂 I-SceI-HR

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甲型流感病毒核蛋白的表达与鉴定及其B细胞表位的预测

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西部医学 2013年第6期25卷 824-828页

作者：李莎刘冯欢李明远李燕张菁杨靖丁娜娜李婉宜王保宁四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 成都中医药大学医学技术学院四川成都611137

目的构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+)... 详细信息

目的构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定;预测人NP蛋白的B细胞抗原表位。方法以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+),并进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的质粒转入表达菌Rosetta-gami(2)中,用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物。按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplns-Schulz方法预测蛋白骨架区的柔韧性;用Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数。结果成功构建了流感病毒核蛋白(NP)的原核表达载体,经SDS-PAGE检测NP蛋白得到了表达,Western Blot证明表达的重组蛋白具有免疫活性。在蛋白质第6～11、79～91、241～248和319～326区段附近很可能为B细胞表位优势区域。结论流感病毒核蛋白的表达及B细胞表位的预测为流感病毒的快速诊断试剂的研发工作提供了基础。

关键词：流感病毒核蛋白 B细胞表位

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硫化氢与呼吸调节

硫化氢与呼吸调节

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第三届全国气体信号分子硫化氢研讨会

作者：郑煜陈丽周华四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都市人民南路三段17号 610041

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抗体的系统性检测方法

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四川生理科学杂志 2013年第3期35卷 121-123页

作者：杨靖孙卫兵邝玉湖北医药学院基础医学院微生物学教研室湖北十堰442000 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 湖北省十堰市西苑医院呼吸内科湖北十堰442000

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无... 详细信息

21世纪随着现代生物技术、信息技术在生物医学工程学等研究领域的不断深入,以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展,其应用已涉及医学、农业、食品、环境等众多领域。当前生物医药正在成为发展潜力无限的产业,而生物医药领域中发展最快的是抗体工程药物,在基础研究、蛋白纯化、环境与食品监测、疾病诊断预防及治疗和优生优育等方面均有不可替代的重要作用。虽然抗体的制备技术日趋完善,但用于诊断和治疗的抗体必须符合高纯度、高效价、高可用性的要求,对抗体的制备、分离和鉴定就显得尤为重要。本文简要阐述了抗体工程药物制备中对抗体成分的系统性检测方法,包括纯度检测、特异性检测、亲和力检测、效价检测等,并对抗体这种特殊蛋白的常用定量检测方法进行了比较。

关键词：抗体鉴定 ELISA Lowry法 BCA法

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慢性缺氧可通过氧化应激和细胞凋亡引起大鼠延髓呼吸中枢的损伤

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生物医学工程学杂志 2012年第4期29卷 727-731,736页

作者：侯雪飞丁艳聂政李慧唐玉红周华陈丽郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

本实验研究慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用,并探讨其损伤作用是否与氧化应激和细胞凋亡有关。健康雄性SD大鼠,随机分为两组:空气对照组和慢性缺氧组。采用尼氏染色法,观察慢性缺氧对延髓呼吸中枢神经元的损伤;采用生物化学方法,... 详细信息

本实验研究慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用,并探讨其损伤作用是否与氧化应激和细胞凋亡有关。健康雄性SD大鼠,随机分为两组:空气对照组和慢性缺氧组。采用尼氏染色法,观察慢性缺氧对延髓呼吸中枢神经元的损伤;采用生物化学方法,检测延髓丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,观察慢性缺氧对延髓氧化应激水平的影响;采用RT-PCR方法,检测延髓Bax mRNA和Bcl-2mRNA的表达,观察慢性缺氧对延髓细胞凋亡水平的影响。结果显示:与空气对照组相比,在慢性缺氧组大鼠延髓,pre-BtC、Amb、NTS、FN、12N等呼吸相关核团尼氏染色光密度值均降低(P<0.05);MDA含量增加(P<0.05),SOD活力无显著变化(P>0.05);Bcl-2mRNA水平降低(P<0.05),Bax mRNA水平无显著差异(P>0.05)。研究表明,慢性缺氧对呼吸中枢有严重损伤,这种损伤可能与其增强氧化应激和促进细胞凋亡等作用有关。

关键词：慢性缺氧呼吸中枢延髓氧化应激细胞凋亡

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特异性抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其抗菌作用研究

特异性抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其抗菌作用研究

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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：祝捷杨靖周永君潘兴杨廷敏曹随忠王保宁四川万可泰生物技术有限责任公司四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川农业大学动物医学院

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌抗原及重组Hp特异抗原IB免疫产蛋母鸡产生特异性IgY抗体(IgY-Hp、IgY-IB)的免疫程序和制备方法,测定其抑制幽门螺杆菌生长和抑制幽门螺杆菌尿素酶活性,研究其口服治疗幽门螺杆菌感染小... 详细信息

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)全菌抗原及重组Hp特异抗原IB免疫产蛋母鸡产生特异性IgY抗体(IgY-Hp、IgY-IB)的免疫程序和制备方法,测定其抑制幽门螺杆菌生长和抑制幽门螺杆菌尿素酶活性,研究其口服治疗幽门螺杆菌感染小鼠模型的效果。方法:用本课题组制备的重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)作为佐剂,间隔14天连续7次肌肉注射免疫产蛋母鸡,收集鸡蛋,水稀释-硫酸铵盐析法提纯IgY,间接ELISA法测效价。用体外抑菌实验和体外抑制尿素酶实验研究该IgY-Hp和IgY-IB对幽门螺杆菌的体外作用效果,用幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究口服IgY-Hp和IgY-IB的不同组合,研究其对幽门螺杆菌感染的治疗效果。结果:免疫产蛋母鸡49天两种抗体水平均达到1:12800;经水稀释-硫酸铵盐析提纯纯度达80%以上。体外实验发现IgY-Hp可抑制幽门螺杆菌生长及抑制幽门螺杆菌尿素酶活性;IgY-IB虽不能体外抑制幽门螺杆菌生长,但可抑制幽门螺杆菌尿素酶活性。体内试验发现IgY-Hp或IgY-IB与硫糖铝联合口服治疗幽门螺杆菌感染小鼠模型,其治愈率均可达到83.3%。结论:用本课题组建立的免疫程序,可在49天获得高效价特异性IgY抗体(1:12800),且效价持续稳定。该特异性IgY抗体口服对幽门螺杆菌感染小鼠的治愈率达到83.3%,有希望成为靶向治疗幽门螺杆菌感染的新型药物和治疗方法。

关键词：幽门螺杆菌特异IgY 抗菌作用

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蔓越莓抗菌作用研究进展

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中国抗生素杂志 2012年第8期37卷 575-578页

作者：杨晓龙黄宁四川大学华西基础医学与法医学院病理生理教研室成都610041

蔓越莓(Vaccinium macrocarpon Ait.)是北美三大水果之一。一直以来,蔓越莓因其预防泌尿道感染的功能而受到广泛关注。大量的研究表明蔓越莓具有抑菌、抗细菌黏附等作用。本综述主要涉及其化学成分、抑菌作用、抗黏附作用及其机制。

关键词：蔓越莓抑菌作用抗黏附作用

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蛋白磷酸酶2A参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用

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四川大学学报（医学版） 2012年第2期43卷 166-169页

作者：于海礼方明袁东智刘芳徐倩张金虎何亚萍岳利民四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

目的探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是否参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用,以进一步揭示孕激素作用的分子机制。方法分离培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,在细胞生长汇合时将其分为4组:以1μmol/L孕激素为... 详细信息

目的探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是否参与孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用,以进一步揭示孕激素作用的分子机制。方法分离培养原代小鼠子宫内膜上皮细胞,在细胞生长汇合时将其分为4组:以1μmol/L孕激素为对照组(P4组),其他3组分别给予1μmol/L孕激素和5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L 3种不同剂量的PP2A抑制剂冈田酸(OA)作为实验组,分别为A、B和C组。各组细胞在上述实验因素作用24h后,采用流式细胞术检测细胞周期各时相分布的细胞百分数。结果与P4组相比,A组分布在细胞周期各时相的细胞百分数差异没有统计学意义;B组处于G1期和G2/M期的细胞百分数降低,而S期的细胞百分数增加;C组处于G1期和S期的细胞百分数增加,但G2/M期细胞百分数降低(P均<0.05)。结论适当剂量PP2A抑制剂OA可明显解除孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的抑制作用,使细胞周期进程加快,从而证实PP2A参与了孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖的负调控作用。

关键词：蛋白磷酸酶2A 孕激素子宫内膜细胞周期

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Ⅰ类整合子介导大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药机制的初步研究

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中国抗生素杂志 2012年第2期37卷 132-136页

作者：刘立涛万莉红邵振俊谭显曙匡文娟周黎明四川大学华西基础医学与法医学院药理教研室成都610041

目的了解临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中I类整合子的分布情况,探讨整合子与细菌耐药之间的关系。方法琼脂平皿稀释法进行药敏试验;双纸片法筛选出产ESBLs的菌株;运用PCR扩增、DNA测序及DNA序列比对等方法对其携带的I类整合子相... 详细信息

目的了解临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中I类整合子的分布情况,探讨整合子与细菌耐药之间的关系。方法琼脂平皿稀释法进行药敏试验;双纸片法筛选出产ESBLs的菌株;运用PCR扩增、DNA测序及DNA序列比对等方法对其携带的I类整合子相关耐药基因进行分析。结果 36株大肠埃希菌与46株肺炎克雷伯菌对头孢克肟、头孢克洛、头孢氨苄、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟钠、阿莫西林纳/舒巴坦钠、氨苄西林钠/舒巴坦钠及头孢哌酮/舒巴坦钠等的耐药率分别为61%、86%、86%、50%、75%、64%、39%、47%、30%与65%、63%、78%、52%、67%、54%、48%、41%、28%;10株细菌检测出产ESBLs,其中大肠埃希菌4株,肺炎克雷伯菌6株,并全部检测出1类整合子,其整合子可变区的耐药基因排列顺序与GenBank登录号为NC010410的菌株达到100%相似,并且皆含有blaVEB-1耐药基因盒。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。

关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌 Ⅰ类整合子 ESBLs

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