目的研究亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,Hap1)基因对成纤维细胞增殖的影响。方法体外分离培养获得Hap1基因敲除(Hap1^(-/-))的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期(流式细胞术)检测验证Hap1敲除后...
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目的研究亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,Hap1)基因对成纤维细胞增殖的影响。方法体外分离培养获得Hap1基因敲除(Hap1^(-/-))的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期(流式细胞术)检测验证Hap1敲除后成纤维细胞增殖的改变;将野生型和Hap1^(-/-)成纤维细胞送转录组测序筛选增殖相关基因,实时荧光定量PCR(qPCR)验证相关基因表达水平的改变。对小鼠进行皮肤损伤造模检测Hap1敲减(Hap1^(+/-))小鼠皮肤损伤修复情况;PCNA免疫组化染色检测损伤修复过程中成纤维细胞的增殖水平。结果成功培养原代Hap1^(-/-)成纤维细胞;与野生型成纤维细胞相比,Hap1^(-/-)成纤维细胞EdU阳性比例减少,进入S期的细胞比例减少;原代成纤维细胞转录组测序筛选出Cdc25C、E2f7、E2f8和Ccl5四个差异表达的增殖相关基因,qPCR验证发现E2f7在Hap1敲除后表达增多。小鼠皮肤损伤结果显示,Hap1^(+/-)小鼠伤口面积较相同时间点野生型小鼠伤口面积大且愈合速度减慢,成纤维细胞增殖阳性密度低于野生型小鼠。结论 Hap1可能通过抑制细胞周期负性调节因子E2f7的表达对成纤维细胞增殖起正向调节作用,其缺失将抑制成纤维细胞进入S期,从而减少细胞增殖,影响伤口修复。
目的 了解一氧化氮合酶 (NOS)在背根损伤的背根节及邻近未受损之背根节中表达的变化。方法 采用部分去背根传入动物模型 ,通过免疫组织化学 ABC法 ,观察猫背根节中 n NOS及 e NOS同工酶阳性免疫产物的分布、阳性神经元的数量及变化。...
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目的 了解一氧化氮合酶 (NOS)在背根损伤的背根节及邻近未受损之背根节中表达的变化。方法 采用部分去背根传入动物模型 ,通过免疫组织化学 ABC法 ,观察猫背根节中 n NOS及 e NOS同工酶阳性免疫产物的分布、阳性神经元的数量及变化。结果 猫背根节中 n NOS阳性反应物主要分布于小神经元中 ;背根被切断的 L5背根节及邻近完好的 L6 备用背根节中 n NOS阳性小神经元数量较非术侧均有增加 ;e NOS在成年猫背根节神经元中未见表达。结论 在背根节神经元中表达的 n NOS及由 n NOS催化产生的 NO可能与神经损伤和修复的生理病理过程有关。
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