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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 417-420页

作者：周同甫董丽群张敏李谧华益民刘翰旻陶大昌李强四川大学华西第二医院小儿心脏科成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院同位素教研室四川大学华西基础医学与法医学院细胞生物学教研室

目的　探讨实验性室间隔缺损 ( VSD)动物左右心室心肌血管紧张素受体的改变。方法　建立猪实验性室间隔缺损动物模型 ,术后 1月取左右心室组织 ,通过放射性配体受体结合分析法测定每 10 6个细胞上血管紧张素受体 ( AT1 R、AT2 R)的... 详细信息

目的　探讨实验性室间隔缺损 ( VSD)动物左右心室心肌血管紧张素受体的改变。方法　建立猪实验性室间隔缺损动物模型 ,术后 1月取左右心室组织 ,通过放射性配体受体结合分析法测定每 10 6个细胞上血管紧张素受体 ( AT1 R、AT2 R)的最大结合量 ( Bmax)和平衡解离常数 ( KD)。结果　假手术组与正常组动物受体的 Bmax和KD改变无统计学意义 ,手术组动物左室 AT1 R、右室 AT1 R和 AT2 R的 Bmax值 (分别为 188.42± 13 3 .97、2 72 .14±2 3 2 .74、40 .42± 3 4.76fmol/ 10 6 ,对照组 AT1 R和 AT2 R的 Bmax值左室为 2 9.2 0± 19.5 0和 2 .90± 0 .64 ,右室为76.72± 5 1.2 1和 9.63± 1.2 7fm ol/ L )增高明显 ( P<0 .0 5 )。结论　心内左向右所引起的心室容量负荷过重 ,导致AT1 R的表达增高 ,是 VSD心室肥厚及重构的重要机制 ;AT2 R在右心室表达增高。

关键词：实验性室间隔缺损心肌血管紧张素Ⅱ受体表达心室肥厚

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流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 409-412页

作者：李虹李华林李婉宜肖丽英蒋中华李明远汪晓东张林四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院物证学教研室

目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝... 详细信息

目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带 ,PI染色流式细胞仪检测细胞 DNA含量 ,Annexin- V FITC/ PI流式细胞仪进行凋亡定量分析 ,并用生物素 -亲和素 EL ISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中 s Fas L 浓度的变化。结果　经流感病毒诱导后 ,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变 ,细胞 DNA电泳出现梯状条带 ,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高 ,且显示一定的时间效应 ;在上述过程中 ,细胞培养上清中 s Fas L 浓度有明显增高。结论　流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡 ,其发生机制可能与 Fas L

关键词：流感病毒诱导肿瘤细胞细胞凋亡 PI染色流式细胞仪

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鼻咽癌患者IL-8和IFN-γ基因多态性的研究

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四川大学学报（医学版） 2007年第5期38卷 862-865页

作者：泰淑红韦叶生王鹏周斌冉鹏杨志惠张林四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室四川大学华西基础医学与法医学院法医物证教研室

目的研究IL-8和IFN-γ基因多态性在鼻咽癌(NPC)患者中的频率分布,并分析其与NPC的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分析105例NPC患者和109例健康对照者IL-8基因-251(A/T)位点的基因多态性;应用聚合酶... 详细信息

目的研究IL-8和IFN-γ基因多态性在鼻咽癌(NPC)患者中的频率分布,并分析其与NPC的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分析105例NPC患者和109例健康对照者IL-8基因-251(A/T)位点的基因多态性;应用聚合酶链反应、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术检测两组人群中IFN-γCA短串联重复序列多态性。分析两位点多态性与NPC的关系。结果NPC组IL-8-251(A/T)位点基因型、等位基因频率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);NPC组IFN-γ(CA)n13等位基因频率低于对照组,差异具有统计学意义(χ2=5.878,P=0.015),其基因型(CA)13+/(CA)13+、(CA)13+/(CA)13-和(CA)13-/(CA)13-在两组人群中的分布也有差异(χ2=15.181,P=0.001)。结论在研究人群中未发现IL-8-251(A/T)位点多态性与NPC相关;IFN-γ(CA)n13等位基因与NPC具有相关性,提示IFN-γ重复序列基因多态性可能在决定鼻咽癌遗传易感性方面有一定意义。

关键词：鼻咽癌干扰素-γ 白细胞介素-8 基因多态性

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人脑源性神经营养素-6基因的克隆及在原核细胞中的表达

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中华医学遗传学杂志 2002年第6期19卷 476-478页

作者：张承武蔡青松庄旭翟朝阳郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ... 详细信息

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ,构建 NT- 6的表达载体。通过诱导 ,使 NT- 6基因在大肠杆菌中表达。结果　分离克隆了人脑源性 NT- 6基因 ,含该基因的大肠杆菌在异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷诱导的情况下 ,表达了特异性的蛋白质。结论　人脑源性 NT- 6基因的克隆表达为进一步研究 NT- 6的结构、功能及临床应用奠定了基础。

关键词：人神经营养素-6 克隆原核表达蛋白质

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用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2003年第1期34卷 145-147页

作者：胡火珍李丹李小玉姚玉成胡以平四川大学华西基础医学与法医学院细胞生物学教研室成都610041 上海第二军医大学细胞生物学教研室

目的　探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒 X基因转基因小鼠的可行性。方法　构建乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X;应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3- X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ... 详细信息

目的　探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒 X基因转基因小鼠的可行性。方法　构建乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X;应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3- X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用 PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源 DNA和肝组织中表达的 p X蛋白。结果　测序结果与文献报道一致 ,并且 X基因在 Hela细胞中表达 ;共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论　初步证明用精原干细胞介导法制备

关键词：乙肝病毒X基因转基因小鼠精原细胞

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免疫毒素基因DT390真核表达载体的构建及功能研究

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 299-301,305页

作者：陈文捷李虹贾怡张林吕梅励李明远蒋中华四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室四川成都610041

目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂... 详细信息

目的构建一种新型免疫毒素DT390-mIP10(白喉杆菌毒素390-小鼠γ干扰素诱导性蛋白10)基因的真核表达质粒,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR扩增mIP10基因,并插入到含有DT390基因片段的真核质粒SRα中,构建重组质粒。以PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,用免疫荧光检测重组质粒的表达;用MTT比色法测定重组免疫毒素质粒的生物学活性。结果构建了DT390-mIP10的真核表达载体SRα-DT390-mIP10,并在NIH3T3细胞中获得表达。表达的DT390-mIP10在体外能有效地杀伤活化的T细胞。结论免疫毒素基因重组真核表达载体DT390-mIP10的构建成功并在真核细胞中表达,为其在肿瘤及自身免疫性疾病治疗方面的进一步应用研究奠定了基础。

关键词：免疫毒素 mIP10 DT390 真核表达

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嗜肺军团菌m ip基因真核表达重组质粒构建与表达

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四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 773-775页

作者：王涛陈建平李虹张雷陶大昌杨春蕾四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川大学华西医院四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T ... 详细信息

目的构建嗜肺军团菌m ip基因的真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip,并研究其在细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌m ip基因,导入载体pcDNA 3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA 3.1-m ip。用脂质体法将重组质粒pcDNA 3.1-m ip转染N IH 3T 3细胞,采用免疫荧光法和W estern-b lot分别鉴定pcDNA 3.1-m ip的瞬时表达产物和稳定表达产物。结果在细胞膜和细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pcDNA 3.1-m ip成功转入N IH 3T 3细胞,并在细胞膜和细胞内获得短暂表达;用嗜肺军团菌兔血清抗体检测pcDNA 3.1-m ip稳定转染的N IH 3T 3细胞,在相对分子质量24×103处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA 3.1-m ip在细胞内表达出M ip蛋白。空质粒pcDNA 3.1(+)转染的N IH 3T 3细胞未检测到绿色荧光和杂交信号。结论成功构建m ip基因真核表达重组质粒,并在N IH 3T 3细胞中表达出相对分子质量为24×103的M ip蛋白。

关键词：嗜肺军团菌 mip基因转染体外表达

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甲型流感病毒血凝素基因HA和HA_1真核载体的构建及其表达研究

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四川大学学报（医学版） 2006年第2期37卷 176-179页

作者：张卫东曹康李明远施桥发王保宁蒋忠华李虹四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室

目的构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)血凝素基因HA和HA1真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法利用RT-PCR技术克隆流感病毒株血凝素HA和HA1基因片段并插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切、PCR和测序鉴定后用PolyFect脂质... 详细信息

目的构建甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)血凝素基因HA和HA1真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达。方法利用RT-PCR技术克隆流感病毒株血凝素HA和HA1基因片段并插入真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切、PCR和测序鉴定后用PolyFect脂质体转入HEK293细胞,通过免疫荧光技术检测其瞬时表达。结果血凝素基因HA和HA1的真核表达载体构建成功。转染后免疫荧光技术检测显示两者皆可在HEK293细胞中正确表达。结论成功构建的流感病毒HA和HA1真核表达载体为深入研究病毒的作用机制及核酸疫苗的研究奠定了基础。

关键词：流感病毒血凝素 pcDNA3.1(+) 免疫荧光技术

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抗人SOCS3单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

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南方医科大学学报 2007年第11期27卷 1778-1780,1783页

作者：陈长春李婉宜章崇杰魏大鹏邝玉四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室四川成都610041

目的制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot... 详细信息

目的制备高效价的抗人SOCS3单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以重组GST-SOCS3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力。结果筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS3单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting显示在相对分子质量为6.3×104处出现特异性反应带。杂交瘤细胞培养上清效价为1∶640,腹水效价为1∶25600,Ig亚类为IgG2a,相对亲和力达4.84×106L/mol。结论成功制备能特异性识别人SOCS3的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS3在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础。

关键词： SOCS3 单克隆抗体抗体制备杂交瘤细胞

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不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白免疫抗小鼠急性感染的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第7期26卷 635-637,641页

作者：李婉宜王保宁左凤琼曾蔚丰锋邝玉蒋中华李明远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室

目的：观察重组Hap蛋白免疫抗不可分型流感嗜血杆菌（NHTi）感染的免疫保护效果，初步探讨其保护机制。方法：用纯化的Hap重组蛋白与黏膜免疫佐剂霍乱肠毒素B亚单位（CT-B）联合鼻腔免疫C57BL／6小鼠。NHTi琼脂珠悬液对免疫小鼠进行气... 详细信息

目的：观察重组Hap蛋白免疫抗不可分型流感嗜血杆菌（NHTi）感染的免疫保护效果，初步探讨其保护机制。方法：用纯化的Hap重组蛋白与黏膜免疫佐剂霍乱肠毒素B亚单位（CT-B）联合鼻腔免疫C57BL／6小鼠。NHTi琼脂珠悬液对免疫小鼠进行气管内注射，建立小鼠NHTi急性肺部感染模型。NHTi攻击5d后，收集实验小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞计数，并取其肺组织进行肺部荷菌数检测及肺组织的病理检测。结果：Hap重组蛋白与CT—B的联合免疫能显著降低小鼠BALF中的白细胞总数、中性粒细胞渗出（P〈0．05）及感染小鼠肺组织内NTHi的荷菌数，并减轻感染小鼠支气管、细支气管周围及肺泡内的炎性浸润程度，明显改善其肺组织的病变。结论：鼻腔免疫的Hap重组蛋白在动物体内能发挥良好抗NTHi感染的免疫保护作用，为NTHi新型疫苗的研发提供了理论基础和实验依据。

关键词：重组Hap蛋白 CT—B NTHi急性肺部感染模型黏膜免疫

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