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生理学报 2007年第3期59卷 325-330页

作者：杨文星张奇兰呼海燕刘谨李永波周华郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

本文旨在探讨内源性一氧化碳(carbonmonoxide,CO)对呼吸节律的调节作用。采用新生Sprague-Dawley大鼠,制备离体延髓脑片标本,分别灌流CO、血红素氧合酶(hemeoxygenase,HO)底物高铁血红素(hemin)和HO抑制剂ZnPP-9,观察舌下神经根呼吸样... 详细信息

本文旨在探讨内源性一氧化碳(carbonmonoxide,CO)对呼吸节律的调节作用。采用新生Sprague-Dawley大鼠,制备离体延髓脑片标本,分别灌流CO、血红素氧合酶(hemeoxygenase,HO)底物高铁血红素(hemin)和HO抑制剂ZnPP-9,观察舌下神经根呼吸样传出放电节律的变化。实验分为5组:单纯人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)对照组、ZnPP-9组、外源性CO组、Hemin组和ZnPP-9+Hemin组。结果如下:在ZnPP-9组,舌下神经根节律性放电频率(discharge frequency,DF)增快(P<0.05);在外源性CO组,舌下神经根节律性DF减慢(P<0.05);在Hemin组和ZnPP-9+Hemin组,舌下神经根节律性DF增快(P<0.05)。结果表明,内源性CO对呼吸节律可能具有调节作用。

关键词：一氧化碳血红素氧合酶呼吸离体新生大鼠

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17β-雌二醇对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙的快速调节效应

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生理学报 2008年第2期60卷 169-174页

作者：王强岳利民张金虎田吉梅何亚萍四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

本文旨在研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙振荡的影响和机制,探讨E2对着床期子宫内膜基质细胞是否存在非基因组快速作用。实验的第一部分,小鼠分为6组,每组4只,即0.1%二甲基亚砜(dimethylsulfox... 详细信息

本文旨在研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对延迟着床期小鼠子宫内膜基质细胞内钙振荡的影响和机制,探讨E2对着床期子宫内膜基质细胞是否存在非基因组快速作用。实验的第一部分,小鼠分为6组,每组4只,即0.1%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)对照组、1×10-8mol/L牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)对照组、1×10-8mol/L E2组、1×10-8mol/L E2-BSA组、1×10-8mol/L E2+无钙液组、1×10-8mol/L E2+5μg/mL他莫西芬(tamoxifen)组。急性分离延迟着床小鼠孕第7天子宫内膜基质细胞,应用激光共聚焦显微镜技术实时检测各组基质细胞[Ca2+]i的变化。实验的第二部分,分离7只延迟着床小鼠孕第7天子宫内膜基质细胞,用免疫荧光法检测1×10-8mol/L E2作用前和作用后5min、15min、30min细胞内磷酸化磷脂酶C(phospholipase C,PLC)的变化。基质细胞[Ca2+]i的变化结果显示,在E2,E2-BSA和E2+无钙液组中[Ca2+]i均明显升高,15min达到高峰,随后下降回到基础值。但DMSO和BSA组中[Ca2+]i未见明显变化;加入传统雌激素胞浆受体阻断剂tamoxifen不能抑制E2引起的[Ca2+]i升高。免疫荧光结果显示,加入1×10-8mol/L E2后,PLC的磷酸化水平升高,15min达高峰(P<0.001),然后逐渐下降回到基础值。结果提示,E2对延迟着床小鼠子宫内膜基质细胞[Ca2+]i的变化具有快速调节效应,该作用可能是通过非基因组途径实现的,与磷酸化PLC信号途径有关。

关键词：雌激素磷脂酶C 钙基质细胞

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慢性缺氧可通过氧化应激和细胞凋亡引起大鼠延髓呼吸中枢的损伤

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生物医学工程学杂志 2012年第4期29卷 727-731,736页

作者：侯雪飞丁艳聂政李慧唐玉红周华陈丽郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041

本实验研究慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用,并探讨其损伤作用是否与氧化应激和细胞凋亡有关。健康雄性SD大鼠,随机分为两组:空气对照组和慢性缺氧组。采用尼氏染色法,观察慢性缺氧对延髓呼吸中枢神经元的损伤;采用生物化学方法,... 详细信息

本实验研究慢性缺氧对大鼠延髓呼吸中枢的损伤作用,并探讨其损伤作用是否与氧化应激和细胞凋亡有关。健康雄性SD大鼠,随机分为两组:空气对照组和慢性缺氧组。采用尼氏染色法,观察慢性缺氧对延髓呼吸中枢神经元的损伤;采用生物化学方法,检测延髓丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,观察慢性缺氧对延髓氧化应激水平的影响;采用RT-PCR方法,检测延髓Bax mRNA和Bcl-2mRNA的表达,观察慢性缺氧对延髓细胞凋亡水平的影响。结果显示:与空气对照组相比,在慢性缺氧组大鼠延髓,pre-BtC、Amb、NTS、FN、12N等呼吸相关核团尼氏染色光密度值均降低(P<0.05);MDA含量增加(P<0.05),SOD活力无显著变化(P>0.05);Bcl-2mRNA水平降低(P<0.05),Bax mRNA水平无显著差异(P>0.05)。研究表明,慢性缺氧对呼吸中枢有严重损伤,这种损伤可能与其增强氧化应激和促进细胞凋亡等作用有关。

关键词：慢性缺氧呼吸中枢延髓氧化应激细胞凋亡

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人参皂苷Rg1抗新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡的研究

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中国修复重建外科杂志 2010年第9期24卷 1107-1112页

作者：王德健黄源芳李巧云徐世军刘小康四川大学华西基础医学与法医学院药理教研室成都610041 成都中医药大学药学院药理学教研室

目的人参皂苷Rg1可增强神经元对缺氧缺血应激的耐受能力,在缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)中发挥一定的抗凋亡作用。观察人参皂苷Rg1对新生鼠HIBD后神经元凋亡及神经功能恢复的影响,并探讨其可能机制。方法 10天... 详细信息

目的人参皂苷Rg1可增强神经元对缺氧缺血应激的耐受能力,在缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)中发挥一定的抗凋亡作用。观察人参皂苷Rg1对新生鼠HIBD后神经元凋亡及神经功能恢复的影响,并探讨其可能机制。方法 10天龄SPF级SD大鼠54只,体重16～22g,随机分为假手术对照组(假手术组,n=6)、HIBD模型组(模型组,n=24)和人参皂苷Rg1组(Rg1组,n=24)。模型组及Rg1组大鼠采用结扎右侧颈总动脉并低氧通气制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉,不结扎,不进行低氧通气。Rg1组于术后即刻腹腔内注射0.1mL含人参皂苷Rg1(40mg/kg)的生理盐水,此后每隔24h按相同剂量注射人参皂苷Rg1;模型组和假手术组相同时间点腹腔内注射0.1mL生理盐水。术后观察大鼠一般情况,于术后4、8、24、72h采用Longa评分法行神经行为学评价后,处死大鼠取右侧脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和活化的半胱天冬氨酸酶3(cleaved caspase3,CC3)蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果术后大鼠均存活至实验完成。与假手术组比较,模型组和Rg1组大鼠均出现不同程度的神经行为学异常;两组Longa评分与假手术组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);术后72h时Rg1组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示,各组各时间点均有HIF-1α、CC3蛋白表达;模型组及Rg1组各时间点HIF-1α蛋白表达均较假手术组有明显增加(P<0.05),Rg1组均较同一时间点模型组有明显上调(P<0.05)。模型组各时间点CC3蛋白表达均较假手术组明显增加(P<0.05),Rg1组仅术后4h与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Rg1组各时间点均较模型组明显下调(P<0.05)。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC3蛋白定位主要集中在胞核及胞浆,各组各时间点蛋白表达强度与Western blot观察结果一致。TUNEL染色各组术后各时间点均见阳性细胞;模型组各时间点凋亡细胞数均较假手术组明显增加(P<0.05),Rg1组术后4、8h与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Rg1组在8、24及72h凋亡细胞数目较模型组明显减少(P<0.05)。结论 Rg1通过增强并稳定HIF-1α信号途径,从而抑制半胱天冬氨酸酶3的活化,在新生鼠HIBD中发挥抗凋亡作用。

关键词：缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡人参皂苷Rg1 缺氧诱导因子1α 活化的半胱天冬氨酸酶3 大鼠

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人脑源性神经营养素-6基因的克隆及在原核细胞中的表达

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中华医学遗传学杂志 2002年第6期19卷 476-478页

作者：张承武蔡青松庄旭翟朝阳郑煜四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ... 详细信息

目的　克隆人脑源性神经营养素 - 6 (neurotrophin- 6 ,NT- 6 )基因 ,并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法　从流产胎儿大脑皮层提取总 RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的 NT- 6基因c DNA片段 ;经酶切回收后克隆进 p BK- CMV质粒 ,构建 NT- 6的表达载体。通过诱导 ,使 NT- 6基因在大肠杆菌中表达。结果　分离克隆了人脑源性 NT- 6基因 ,含该基因的大肠杆菌在异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷诱导的情况下 ,表达了特异性的蛋白质。结论　人脑源性 NT- 6基因的克隆表达为进一步研究 NT- 6的结构、功能及临床应用奠定了基础。

关键词：人神经营养素-6 克隆原核表达蛋白质

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无电流斑电击死兔的红细胞与血管内皮的扫描电镜观察

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四川大学学报（医学版） 2007年第5期38卷 859-861页

作者：王晔刘敏李凡彭雪梅张奎彭其毅廖志钢四川大学华西基础医学与法医学院法医病理学教研室

目的探讨无电流斑电击死动物的红细胞与血管内皮细胞的形态学变化。方法建立两种无明显电流斑电击死动物模型。模型A:用220 V或110 V交流电直接电击浸湿的右前肢与左后肢致死。模型B:用220 V或110 V交流电电击水中兔致死。取电击死兔血... 详细信息

目的探讨无电流斑电击死动物的红细胞与血管内皮细胞的形态学变化。方法建立两种无明显电流斑电击死动物模型。模型A:用220 V或110 V交流电直接电击浸湿的右前肢与左后肢致死。模型B:用220 V或110 V交流电电击水中兔致死。取电击死兔血液及肺动脉与主动脉,扫描电镜观察红细胞及内皮细胞形态学变化。结果两种电击死动物模型兔的红细胞与血管内皮细胞均可见穿孔,红细胞穿孔细胞指数最高,其次为肺动脉内皮细胞,主动脉穿孔细胞穿孔指数较肺动脉内皮与红细胞稍低,而对照组则未见穿孔现象。结论细胞穿孔可以作为无明显电流斑电击死的一个诊断指标。

关键词：电击死红细胞内皮细胞扫描电镜电击穿孔

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血浆中游离还原型及氧化型谷胱甘肽的荧光测定法

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光谱学与光谱分析 2005年第11期25卷 1834-1838页

作者：王秋林王浩毅丁怡乔小蓉彭克军林霞王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室四川大学分析测试中心四川成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医病理教研室四川成都610041

文章建立了快速、可同时检测血浆中游离的还原型和氧化型谷胱甘肽(即GSH和GSSG)的方法,并评价了血浆中GSH/GSSG的氧化还原状态。利用二硫苏糖醇将GSSG还原成两分子的GSH,使GSH在pH8.0时与邻苯二甲醛(OPA)结合生成荧光产物GSH-OPA,用荧... 详细信息

文章建立了快速、可同时检测血浆中游离的还原型和氧化型谷胱甘肽(即GSH和GSSG)的方法,并评价了血浆中GSH/GSSG的氧化还原状态。利用二硫苏糖醇将GSSG还原成两分子的GSH,使GSH在pH8.0时与邻苯二甲醛(OPA)结合生成荧光产物GSH-OPA,用荧光分光光度仪测定其荧光值,从而对GSH和GSSG进行定量分析。并运用此方法测量青年健康志愿者静脉血中的游离GSH和GSSG。该法最低可检测出测定管中11.4 pmol.L-1GSH以及5.7 pmol.L-1GSSG。测量GSH批内和批间变异系数分别4.6%和3.9%,GSSG批内和批间变异系数分别为3.5%和4.1%,GSH,GSSG加标准品后的回收率分别为(99.77±5.70)%和(99.28±4.73)%。测定健康青年志愿者血浆中游离GSH,GSSG的含量分别为(16.5±2.4)***-1和(1.7±0.35)***-1。

关键词：血浆 GSH GSSG 荧光测定法

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不同还原性巯基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

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华西医科大学学报 2002年第3期33卷 372-374页

作者：杨志梅王玉芳张霁顾玲王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医医学院物证教研室

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)... 详细信息

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)不仅促进脂质过氧化 ,而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。 2谷胱甘肽(GSH)呈还原性 ,对细胞有全面的保护作用。 3Hcy的氧化性最强 ,GSH则呈现出完全的还原性 ,半胱氨酸 (Cys)可能处于二者之间。结论　同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制 ,发挥与 Cys和 GSH不同的生物学效应 ,从而导致内皮细胞出现坏死和凋亡等损伤性的改变。

关键词：同型半胱氨酸半胱氨酸谷胱甘肽内皮细胞脐静脉

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输血对受者血液基因型的影响

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四川大学学报（医学版） 2005年第3期36卷 359-361,414页

作者：韩军鸽陈国弟刘志勇余琳廖淼吴梅筠廖志钢康焰罗传新金晓东四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院法医病理学教研室成都610041 四川大学华西医院ICU科

目的　探讨输血后不同时间、不同输血量供者STRs基因型对受者STRs基因型的影响。方法　采集3例患者输血前以及输血后4 h、8h、12 h的血液和供者血液,EDTA抗凝,用Chelex- 10 0法提取DNA,选D1S5 4 9、D18S86 5、D3S175 4、D12 S391、D12 S... 详细信息

目的　探讨输血后不同时间、不同输血量供者STRs基因型对受者STRs基因型的影响。方法　采集3例患者输血前以及输血后4 h、8h、12 h的血液和供者血液,EDTA抗凝,用Chelex- 10 0法提取DNA,选D1S5 4 9、D18S86 5、D3S175 4、D12 S391、D12 S375、D6 S4 77等6个STRs基因座进行PCR扩增,扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳,银染显色分型。结果　6个STRs基因座的检测结果显示受者输血前及输血后12 h内STRs基因型一致。结论　输血量不大于12 0 0 ml的受者输血后12 h内STRs基因型未受供者血液STRs基因型的影响。

关键词：输血 STR基因座聚合酶链反应

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MicroRNA-21、PTEN基因真核及shRNA表达载体构建

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生物医学工程学杂志 2013年第2期30卷 359-364页

作者：伍怡颖张媛媛万莉红陈健周黎明汪晓东四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室成都610041 四川大学华西医院胃肠外科中心成都610041

为了构建microRNA-21、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)真核表达载体pEGFP-N1-pre-miR21、pEGFP-N1-PTEN及短发夹状RNA(shRNA)表达载体Psilencer4.1-CMV-mir21-shRNA、Psilenc-er4.1-CMV-PTEN-shRNA,我们根据microRNA-21、PTEN基因序列设计合成shRNA及PCR引物;将microRNA-21、PTEN shRNA片段退火后的DNA模板定向克隆到Psilencer4.1-CMV质粒;另采用RT-PCR技术从人结肠癌细胞HCT-116中扩增pre-miR-21及PTEN,并将PCR产物双酶切后定向克隆到pEGFP-N1质粒上,构建重组载体。经菌落筛选、双酶切及DNA测序分析检测重组载体构建是否成功。结果显示筛选出的阳性克隆经双酶切鉴定得到与载体及目的片段大小一致的两条片段。测序证实目的基因pre-miR-21、PTEN及其shRNA序列分别正确连接到pEGFP-N1及Psilencer4.1-CMV的多克隆位点。结论:成功构建microRNA-21、PTEN基因真核表达及shR-NA表达载体,为进一步研究microRNA-21及PTEN基因在结直肠癌中的作用奠定了基础。

关键词： microRNA-21 第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因 pEGFP-N1 Psilencer4 1-CMV 表达载体

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