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四川大学学报（医学版） 2007年第3期38卷 417-420页

作者：董立华王勇陆长青王凡四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外黄芪诱导分化为神经元样细胞。方法通过密度梯度离心从大鼠骨髓中分离有核细胞进行培养,观察细胞的形态和生长情况,分离纯化,传代扩增。采用含黄芪的无血清L-DMEM诱导分化为神经元样细胞,观察细... 详细信息

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外黄芪诱导分化为神经元样细胞。方法通过密度梯度离心从大鼠骨髓中分离有核细胞进行培养,观察细胞的形态和生长情况,分离纯化,传代扩增。采用含黄芪的无血清L-DMEM诱导分化为神经元样细胞,观察细胞形态变化,以免疫组织化学染色方法检测分化细胞中巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。用RT-PCR方法半定量分析相关基因neurogenin-1(Ngn-1)和Wnt-1基因在诱导过程中的表达。结果经传代后,骨髓间充质干细胞呈纤维细胞样,有较强的增殖能力。经黄芪诱导后,细胞形态发生改变,nestin、NSE和GFAP表达阳性,分化为神经元或胶质细胞样细胞。Ngn-1和Wnt-1基因在黄芪诱导后明显上调。结论大鼠骨髓间充质干细胞可以体外分离、培养,并在黄芪诱导下向神经元样细胞分化。Ngn-1和Wnt-1基因在其分化过程中起正调控作用。

关键词：骨髓间充质干细胞黄芪诱导分化

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二期骨折愈合中骨痂软骨细胞增殖变化的研究

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四川大学学报（医学版） 2003年第2期34卷 274-276页

作者：李华张晛王凡李瑞祥王松四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的　研究骨痂软骨细胞在骨折愈合中增殖变化的规律。方法　采用二期骨折愈合模型 ,骨痂组织常规 HE染色和细胞周期蛋白 (Cyclin D3,Cyclin E,Cyclin A)、5 -溴尿嘧啶核苷 (Brd U)、细胞核增殖抗原 (PCNA)免疫染色 ,观测不同时期骨痂... 详细信息

目的　研究骨痂软骨细胞在骨折愈合中增殖变化的规律。方法　采用二期骨折愈合模型 ,骨痂组织常规 HE染色和细胞周期蛋白 (Cyclin D3,Cyclin E,Cyclin A)、5 -溴尿嘧啶核苷 (Brd U)、细胞核增殖抗原 (PCNA)免疫染色 ,观测不同时期骨痂组织形态及其细胞增殖的变化。结果　组织学上可将骨痂组织分为四个区域 ,即静息区 (RZ)、增殖区 (PZ)、成熟区 (MZ)和肥大区 (HZ)。各区的界限不如发育骨生长板中的清晰 ,细胞排列较紊乱 ,规则的软骨细胞柱少见。各区的细胞增殖可因处于不同愈合时期而变化 ,骨折后第 1周以 RZ软骨细胞增殖、分化为主 ;第 2、3周 PZ软骨细胞增殖活跃 ,而此时 RZ软骨细胞已无明显增殖。第 4周时各区软骨细胞增殖活动减弱 ,细胞以成熟、肥大表现为主。结论　在二期骨折愈合模式中。

关键词：细胞增殖软骨细胞骨折愈合

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TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第4期23卷 317-319,323页

作者：郭琼王凡陆长青李丽瑛四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室四川成都610041

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表... 详细信息

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.

关键词：转化生长因子β1 转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体胚胎肺

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大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点

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四川大学学报（医学版） 2003年第4期34卷 738-741页

作者：张本斯王凡邓力顿爱社董立华李健羊惠君四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室四川大学药学院

目的　建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的方法 ,探讨其表型和功能特点。方法　用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓 MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,通过形态学观察 ,细胞化学... 详细信息

目的　建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells,MSCs)的方法 ,探讨其表型和功能特点。方法　用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓 MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,通过形态学观察 ,细胞化学及免疫细胞化学法分析大鼠骨髓 MSCs的表型和功能特点。结果　 MSCs属骨髓中单个核细胞 ,密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓 MSCs,在含 10 %小牛血清的 L - DMEM中 ,1、3、5代细胞生长曲线基本相同 ,增殖快 ,每传代一次细胞约增加 2 .2倍。细胞呈均一的成纤维细胞样 ,表达CD4 4、CD54、纤维粘连蛋白 (fibronectin,FN )、型胶原 (collagen I)。加入地塞米松 (Dex 10 - 8m ol/ L )、β-甘油磷酸钠(β- GP10 mm ol/ L)、抗坏血酸 (AA5 0 μg/ ml)可诱导 MSCs分化为成骨细胞 ,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,AL P)活性增高 ,形成矿化结节。结论　所分离、培养的细胞具有间充质干细胞的表型和功能特点 ,建立了体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓

关键词：大鼠骨髓间充质干细胞分离培养

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因意外而中止妊娠的6-8周人胚脑发育及相关因子表达的形态学研究

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四川大学学报（医学版） 2007年第1期38卷 97-100,108页

作者：袁爱花项涛李爱冬杨淑霞洪华蓉羊惠君四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041 成都医学院

目的研究人胚脑早期发育过程中细胞的增殖、分化、凋亡及相关因子的表达变化，为明确人胚脑发育过程中的细胞增殖、分化和凋亡机制提供依据。方法收集因意外而中止妊娠的6～8周人胚，采用TUNEL染色和免疫组化SABC染色。观察脑的发育、... 详细信息

目的研究人胚脑早期发育过程中细胞的增殖、分化、凋亡及相关因子的表达变化，为明确人胚脑发育过程中的细胞增殖、分化和凋亡机制提供依据。方法收集因意外而中止妊娠的6～8周人胚，采用TUNEL染色和免疫组化SABC染色。观察脑的发育、增殖和凋亡细胞的分布及相关因子的表达。结果人胚脑6周时，端脑、间脑、中脑、后脑与末脑已形成。6～8周，各脑均由生发层（GL）、中间层（IL）和边缘带（MZ）组成。6～7周时，TUNEL法标记的细胞及PCNA、Bcl-2、Bax、Fas、Fas—L、Rb和P53阳性细胞分布于各脑的GL和IL，其沉淀物出现在圆形或椭圆形细胞的胞核和胞浆中；8周时，Fas和Rb阳性细胞分布于各脑的IL，其沉淀物出现在梭形细胞的胞浆和突起中，TUNEL法标记的细胞及其它因子阳性细胞的分布同6～7周。各因子的表达与细胞增殖和凋亡的发生在时间和空间上基本一致。结论人胚脑发育过程中，神经祖细胞的增殖和凋亡同时发生，Fas、Fas-L和Bax可能介导凋亡的发生，Bcl-2则可能通过抑制细胞凋亡而维持细胞的存活，Rb与P53可能在神经祖细胞正常增殖和分化中起监控和维持作用。

关键词：人胚脑发育增殖凋亡相关因子

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碱性成纤维细胞生长因子对全脑缺血再灌注大鼠脑皮质内源性神经干细胞的影响

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生物医学工程学杂志 2014年第4期31卷 846-849页

作者：任铭新邓晓慧郭义威郑风劲冯志博新乡医学院人体解剖学教研室新乡453003 四川大学基础医学与法医学院成都610041

探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对全脑缺血再灌注大鼠脑皮质内源性神经干细胞增殖、迁移和分化的影响。本研究以"四血管法"制作全脑缺血再灌注模型,采用免疫组化方法检测BrdU和Nestin在不同组别各时间点的表达,用RT-PCR技... 详细信息

探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对全脑缺血再灌注大鼠脑皮质内源性神经干细胞增殖、迁移和分化的影响。本研究以"四血管法"制作全脑缺血再灌注模型,采用免疫组化方法检测BrdU和Nestin在不同组别各时间点的表达,用RT-PCR技术半定量检测大鼠脑皮质NSE mRNA的表达。结果显示假手术组大鼠脑皮质基本未见到BrdU和Nestin阳性细胞表达,NSE mRNA表达没有变化;模型组大鼠脑皮质的BrdU和Nestin阳性细胞在全脑缺血再灌注3d后开始增加,7d达到高峰,NSE mRNA表达无明显增加;bFGF治疗组BrdU、Nestin阳性细胞较模型组在缺血各时间点均明显增加(P<0.05),11d达到高峰,NSE mRNA表达与假手术组和模型组相比第15d表达有明显增加(P<0.05)。结果表明全脑缺血再灌注能够引起内源性神经干细胞的原位增殖,bFGF可促进全脑缺血再灌注大鼠内源性神经干细胞原位增殖,并延长增殖期,而且有明显促进内源性神经干细胞向神经元分化的作用。

关键词：全脑缺血内源性神经干细胞碱性成纤维细胞生长因子大鼠

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人食管壁内血管和神经的分布特点

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解剖学报 2014年第2期45卷 242-247页

作者：黄小勇李艳邓义波黄建朱磊陈道邦四川大学华西基础医学与法医学院解剖学教研室成都610041

目的探讨人食管壁内血管和神经的分布特点及两者之间的关系。方法幼年尸体标本14例和成人标本4例,共计18例,采用硅胶血管灌注和再改良Sihler神经染色法相结合来显示人食管壁内血管及神经。结果人食管壁内血管整体分布以胸下段及腹段较密... 详细信息

目的探讨人食管壁内血管和神经的分布特点及两者之间的关系。方法幼年尸体标本14例和成人标本4例,共计18例,采用硅胶血管灌注和再改良Sihler神经染色法相结合来显示人食管壁内血管及神经。结果人食管壁内血管整体分布以胸下段及腹段较密集,而颈段和胸上段相对较稀疏,整体前壁内血管较后壁内稀疏,壁内血管的细小分支间形成广泛的网状吻合。人食管壁内神经整体分布以腹段分布最稀疏,胸段壁内神经分布最多密集,但颈胸段壁内神经均衡分布,颈段上部可与来自于咽丛的神经分支形成吻合,食管壁内神经形成网状环路吻合。食管壁内血管与神经之间无明显的伴行关系。结论人食管壁内血管和神经分布均呈现网状吻合,但两者之间无明显伴行关系。

关键词：壁内血管壁内神经食管再改良Sihler染色硅胶血管灌注人

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葛根素对骨髓间充质细胞的诱导分化

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中国临床解剖学杂志 2008年第1期26卷 83-86页

作者：邓仪昊陈道邦徐立史凯四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的:探索葛根素体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(Bone Marrow Stromal Cells MSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性,为中药在细胞定向分化中的应用提供理论和实验依据。方法:用贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。培养传至第5代,诱导组以... 详细信息

目的:探索葛根素体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(Bone Marrow Stromal Cells MSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性,为中药在细胞定向分化中的应用提供理论和实验依据。方法:用贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。培养传至第5代,诱导组以2.5mg/ml的葛根素预诱导24h后,用17.5mg/ml的葛根素无血清培养基诱导,未诱导组加入等量培养基,24h后相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染色鉴定诱导后的细胞神经元特异性稀醇化酶(neuronspecific enolase NSE),神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)蛋白的表达情况,MTT检测不同浓度葛根素诱导后细胞的活力,流式细胞仪及RT-PCR检测诱导前后细胞中NSE、GFAP的表达情况。结果:诱导18h后BMSCs胞体收缩,有突起伸出,24h后突起增多呈网状。免疫细胞化学染色,NSE阳性表达率为(53.3±4.3)%,GFAP阳性表达为(64.5±5.2)%,流式细胞仪检测诱导24h后的细胞NSE及GFAP表达量均较未诱导组升高,RT-PCR检测诱导后细胞表达NSE、GFAP,未诱导的细胞则不表达。结论:葛根素可诱导大鼠骨髓间充质细胞在体外分化为神经元和神经胶质细胞。

关键词：骨髓间充质细胞葛根素神经元神经胶质细胞

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人直肠腺癌癌细胞核转录因子κB的表达

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华西医科大学学报 2002年第1期33卷 23-24,27页

作者：陈尧李瑞祥四川大学华西基础医学与法医学院解剖学教研室成都610041

目的　探讨癌细胞侵润转移机理。方法　取 8例人直肠腺癌的癌周组织和转移淋巴结以及 5例正常人的直肠组织和淋巴结 ,采用免疫组织化学方法检测其细胞核转录因子 κB(nuclear factorκB,NFκB)的表达。结果　癌周直肠组织中的癌细胞以... 详细信息

目的　探讨癌细胞侵润转移机理。方法　取 8例人直肠腺癌的癌周组织和转移淋巴结以及 5例正常人的直肠组织和淋巴结 ,采用免疫组织化学方法检测其细胞核转录因子 κB(nuclear factorκB,NFκB)的表达。结果　癌周直肠组织中的癌细胞以及转移淋巴结的癌细胞中均有 NFκBp6 5的表达。结论　癌细胞的侵润转移的生物学性质与

关键词：核转录因子κB 直肠腺癌细胞免疫组织化学肿瘤浸润肿瘤转移

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Heregulin-β1诱导的糖酵解对乳腺癌细胞MCF7迁移的影响

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四川大学学报（医学版） 2016年第4期47卷 463-467页

作者：蒋素芳屠凯岭周兰傅强赵玉华四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的探讨heregulin-β1(HRG-β1)对糖酵解的诱导作用及其诱导的糖酵解在乳腺癌细胞MCF7迁移中的作用。方法用PBS(对照组)或HRG-β1处理MCF7细胞12、24和48h,或HRG-β1+草氨酸盐(oxamate,OX)联用处理MCF7细胞24h,收集培养基测定葡萄糖消... 详细信息

目的探讨heregulin-β1(HRG-β1)对糖酵解的诱导作用及其诱导的糖酵解在乳腺癌细胞MCF7迁移中的作用。方法用PBS(对照组)或HRG-β1处理MCF7细胞12、24和48h,或HRG-β1+草氨酸盐(oxamate,OX)联用处理MCF7细胞24h,收集培养基测定葡萄糖消耗量和乳酸生成量,收集细胞用Western blot检测乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)蛋白的表达。用PBS(对照组)、HRG-β1或HRG-β1+OX联用处理MCF7细胞48h,划痕实验检测伤口愈合率以反映细胞的迁移能力。结果HRG-β1处理MCF7细胞12、24和48h组的葡萄糖消耗量、乳酸生成量和LDHA蛋白水平增加均在24h达最大值,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与HRG-β1诱导组比较,HRG-β1+OX联用组的葡萄糖消耗量差异无统计学意义(P>0.05),乳酸生成量降低(P<0.01),LDHA蛋白表达量减少(P<0.05);MCF7细胞划痕48h后,对照组和HRG-β1+OX联用组的伤口愈合率相当(P>0.05),均低于HRG-β1诱导组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 HRG-β1通过上调LDHA诱导糖酵解从而促进乳腺癌细胞MCF7的迁移。

关键词： Heregulin-β1 乳酸脱氢酶A 糖酵解细胞迁移

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