检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2010年第3期41卷 382-385页

作者：裴斐张彤彤张娜娟杨超杨春蕾四川大学生命科学院医学生物学和细胞生物学教研室成都610064

目的探讨靶向沉默分化抑制因子1基因(id1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒载体对食道癌细胞生物学行为的影响。方法设计针对id1基因的shRNA序列,合成序列并克隆入pGFU6/neo质粒中。重组质粒转染食道癌细胞,RT-PCR检测id1基因mRNA的表达,West... 详细信息

目的探讨靶向沉默分化抑制因子1基因(id1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒载体对食道癌细胞生物学行为的影响。方法设计针对id1基因的shRNA序列,合成序列并克隆入pGFU6/neo质粒中。重组质粒转染食道癌细胞,RT-PCR检测id1基因mRNA的表达,Western blot检测Id1、p16及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。台盼蓝染色、克隆形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞增殖以及各周期分布。结果重组质粒经酶切鉴定和测序,证实表达干扰质粒构建成功。转染重组质粒的食道癌细胞id1 mRNA和蛋白的表达明显下降(P<0.05),食道癌细胞增殖受到抑制,G0/G1期细胞比例增加,而S期的细胞比例明显下降(P<0.05)。结论构建的id1 shRNA表达质粒能有效下调id1基因的表达和抑制食道癌细胞增殖。

关键词： id1基因 RNA干扰短发夹RNA 食道癌细胞

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神经营养素-3的克隆与真核表达

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 195-200页

作者：张伶俐胡火珍李小玉郑雪莲四川大学生命科学院细胞生物学教研室成都610041

目的　构建人神经营养素 - 3(NT 3)的真核表达质粒 .方法　由于NT 3基因中无内含子 ,因此直接运用PCR技术从人基因组DNA中分离出人NT 3完整基因 ,与 pcDNA3.1(- )载体重组并测序 ,获得pcDNA NT3.用脂质体介导法将重组质粒转染人胚肾 ... 详细信息

目的　构建人神经营养素 - 3(NT 3)的真核表达质粒 .方法　由于NT 3基因中无内含子 ,因此直接运用PCR技术从人基因组DNA中分离出人NT 3完整基因 ,与 pcDNA3.1(- )载体重组并测序 ,获得pcDNA NT3.用脂质体介导法将重组质粒转染人胚肾 2 93A细胞株 ,经G4 18筛选后 ,用RT PCR和免疫荧光法在转录和翻译两个水平上检测表达产物 .结果　测序证实所获得的是正确的重组质粒 .它的转录和翻译产物均可在细胞中检测到 .结论　成功地进行了NT 3的克隆与真核表达 ,NT 3基因修饰后的胚胎细胞有可能对神经轴突的生长起指导作用 .该实验结果为深入研究NT 3的生物学作用创造了条件 ,为基因修饰细胞移植治疗神经疾病的实验研究奠定了基础 .

关键词：神经营养素-3 真核表达克隆

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大鼠胚胎神经干细胞的培养和鉴定

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 201-203页

作者：庞栋胡火珍羊惠君潘克俭郑雪莲陶大昌李小玉陈芬四川大学生命科学院细胞生物学教研室成都610041

目的　体外培养和鉴定神经干细胞 .方法　从胎鼠前脑取出脑组织 ,采用酶消化、机械吹打、对倍稀释成单个细胞 ,经无血清培养获得单细胞克隆 ,由免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞 .结果　从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆... 详细信息

目的　体外培养和鉴定神经干细胞 .方法　从胎鼠前脑取出脑组织 ,采用酶消化、机械吹打、对倍稀释成单个细胞 ,经无血清培养获得单细胞克隆 ,由免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞 .结果　从胎鼠脑中分离的细胞具有连续传代形成克隆的能力 ,表达神经干细胞蛋白 (nestin) ,并能诱导分化成神经元和神经胶质细胞 .结论　分离的细胞是神经干细胞 .

关键词：神经干细胞克隆细胞培养

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自体血清培养人脐血间充质干细胞的实验研究

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生物医学工程学杂志 2008年第5期25卷 1155-1160页

作者：张勇刚王黎明杨明理黄林胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064

本实验采集脐血并分离脐血单核细胞与血清,分别用胎牛血清与自体脐血血清培养人脐血间充质干细胞。通过检测所培养出的成纤维细胞样细胞的表面抗原标记与细胞的成骨、成脂和成心肌细胞分化能力,鉴定所培养的细胞是否为间充质干细胞。成... 详细信息

本实验采集脐血并分离脐血单核细胞与血清,分别用胎牛血清与自体脐血血清培养人脐血间充质干细胞。通过检测所培养出的成纤维细胞样细胞的表面抗原标记与细胞的成骨、成脂和成心肌细胞分化能力,鉴定所培养的细胞是否为间充质干细胞。成功采集的21例脐血中,有11例用胎牛血清和15例用自体血清培养出了间充质干细胞,表达细胞表面抗原标记CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD45,并成功地诱导成成骨细胞,脂肪细胞和心肌样细胞,说明使用自体血清培养脐血间充质干细胞较使用胎牛血清有较高的成功率,而且,自体血清培养的脐血间充质干细胞也能成功的进行多向诱导分化。

关键词：脐血间充质干细胞自体血清诱导分化

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人胚神经干细胞的体外培养

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 204-207页

作者：王兰胡火珍李小玉陶大昌陈芬四川大学生命科学院细胞生物学教研室成都610041

目的　探讨人胚神经干细胞体外培养的条件和分化情况 ,以摸索出一种切实可行的能获得较纯且多潜能人胚神经干细胞的方法 .方法　采用取 3月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF ,bFGF刺激生... 详细信息

目的　探讨人胚神经干细胞体外培养的条件和分化情况 ,以摸索出一种切实可行的能获得较纯且多潜能人胚神经干细胞的方法 .方法　采用取 3月龄人胎脑 ,用胰蛋白酶消化法分离单个细胞 ,部分冻存 ,另一部分进行细胞培养 ,加EGF ,bFGF刺激生长 ,有限稀释法获得单细胞克隆 ,血清诱导分化 ,并用免疫组化方法进行鉴定 .结果　EGF和bFGF同时存在于无血清培养基中 ,有大量神经干细胞团生成 ,含血清培养基则诱导神经干细胞分化成为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 .结论　神经干细胞的存活和分裂有赖于EGF和bFGF的共同作用 .经冻存后的胎脑细胞同样能分离培养出有活性的神经干细胞 .

关键词：人胚神经干细胞细胞培养细胞冻存 EGF bFGF

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D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞拟衰老作用的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第4期20卷 475-479页

作者：邢玉芝杨玲麟林洪胡火珍王有为四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064

目的探讨D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)衰老后的形态学及生物学变化情况。方法取3只2月龄SD大鼠MSCs分离培养至第3代,一部分置于含8g/LD-gal的培养液中继续培养至第6代作为... 详细信息

目的探讨D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)衰老后的形态学及生物学变化情况。方法取3只2月龄SD大鼠MSCs分离培养至第3代,一部分置于含8g/LD-gal的培养液中继续培养至第6代作为诱导组;另一部分在原培养液中继续培养至第6代作为对照组,并作表型鉴定。采用流式细胞仪检测对照组加入8g/LD-gal后4d内细胞周期的分布变化。两组MSCs培养7d并绘制生长曲线,在光镜和透射电镜下观察其形态和结构变化,β-半乳糖苷酶染色、单细胞凝胶电泳检测DNA损伤方法检测其衰老后的生物学行为变化。结果诱导组MSCs镜下呈典型的衰老细胞形态;对照组MSCs形态均匀,长势良好。流式细胞仪检测表明加入D-gal诱导后90%MSCs停留在G0/G1期,而S期和G2/M期MSCs趋于消失,并随诱导时间延长趋势越明显;对照组MSCs各期比例正常。MSCs生长曲线示诱导组生长速度较对照组明显减慢。诱导组约85%呈β-半乳糖苷酶阳性染色,对照组染色为阴性。单细胞凝胶电泳示诱导组MSCsDNA有拖尾现象,对照组MSCs无DNA损伤。结论D-gal对SD大鼠MSCs的老化具有诱导作用,初步推断8g/L为最适浓度,为研究MSCs衰老提供了较好的模型。

关键词： D-半乳糖骨髓间充质干细胞细胞衰老大鼠

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CTLA-4/Ig在CHO/DG44细胞中的高效表达

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四川大学学报（医学版） 2007年第3期38卷 370-373页

作者：许松梅郑立恒刘全胜四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610041

目的研究CTLA-4/Ig融合蛋白在CHO真核表达系统中的表达,并纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法将线性化的pMM-CTLA-4-IgG4/WG和pMMGR转染CHO/DG44细胞,对阳性克隆进行无血清悬浮培养,Western blot检测... 详细信息

目的研究CTLA-4/Ig融合蛋白在CHO真核表达系统中的表达,并纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白,为其功能研究和临床应用奠定基础。方法将线性化的pMM-CTLA-4-IgG4/WG和pMMGR转染CHO/DG44细胞,对阳性克隆进行无血清悬浮培养,Western blot检测细胞培养液中CTLA-4/Ig融合蛋白的表达,筛选出高效稳定表达CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞;Protein A亲和层析纯化所表达的CTLA-4/Ig融合蛋白;SDS-PAGE电泳、Western印迹等对纯化的CTLA-4/Ig融合蛋白的相对分子质量、纯度、抗原特异性进行生物学鉴定。结果筛选出了能高效稳定表达CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞;纯化后的CTLA-4/Ig融合蛋白在SDS-PAGE电泳后出现一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG-HRP抗体特异结合。结论获得了能够高效稳定表达具有生物学活性的CTLA-4/Ig融合蛋白的CHO细胞。

关键词： CTLA-4/Ig融合蛋白 pMMGR 转染共扩增地塞米松诱导高表达亲和层析纯化

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MORF4基因诱导HeLa细胞衰老

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中国老年学杂志 2012年第12期32卷 2544-2546页

作者：蔡哲石超范林洋李晓阳杨春蕾四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室四川成都610041

目的建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响。方法分别将pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株。SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化... 详细信息

目的建立MORF4基因高表达诱导HeLa细胞衰老模型,探索MORF4基因对HeLa细胞衰老的影响。方法分别将pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4和pcDNA3.1(+)空载质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株。SA-β-Gal染色检测细胞衰老,MTT法及流式细胞术检测细胞周期变化及细胞的增殖活力,两者共同确定MG-132处理的最适条件。Western印迹检测MORF4、PCNA基因的表达。结果质粒经酶切和测序鉴定,证明pcD-NA3.1(+)/Flag-MORF4质粒中含有目的基因序列;经浓度梯度1.25、2.5、5、10μmol/L MG-132处理转染细胞2、4、24、48 h后,SA-β-Gal染色和MTT检测结果显示10μmol/L MG-132处理24 h的转染细胞明显衰老,细胞活力降低;细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,增殖受到抑制;Western印迹检测结果显示MORF4蛋白在细胞中的含量明显升高,而与增殖相关基因PCNA表达下调。结论构建的pcDNA3.1(+)/Flag-MORF4质粒在HeLa细胞中表达;并在MG-132作用下,使MORF4基因的表达产物积累,从而影响PCNA蛋白的表达量,抑制HeLa细胞的增殖活性,阻滞细胞周期的进行,导致细胞进入衰老状态。

关键词：细胞衰老 MORF4基因 PCNA 细胞增殖

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差速贴壁法纯化分离GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞

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四川大学学报（医学版） 2006年第2期37卷 301-304页

作者：李甫强周鸿鹰羊惠君项涛梅妍胡火珍王廷华四川大学华西基础医学与法医学院解剖学教研室成都610041 四川大学生命科学院细胞生物学教研室

目的运用差速贴壁法分离纯化绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法分离GFP转基因小鼠骨髓细胞直接种植在培养瓶中,分别于2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、24h和48h进行首次全量换液,培养3d后按细胞类型对贴... 详细信息

目的运用差速贴壁法分离纯化绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法分离GFP转基因小鼠骨髓细胞直接种植在培养瓶中,分别于2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、24h和48h进行首次全量换液,培养3d后按细胞类型对贴壁细胞分别计数,并用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色。另外,选4h、8h、24h后换液的细胞进行传代培养,传至第5代,计算扩增倍数,用CD44、CD45、CD54进行免疫细胞化学染色。结果随着首次换液时间的延长,贴壁细胞密度增多,BMSCs的比例减少。首次换液时间在接种后2h的细胞纯度高,但细胞密度低;24h后的细胞密度高而纯度低;8h后的细胞密度大具有较高的纯度。传代后的GFP转基因小鼠BMSCs能稳定表达GFP。结论差速贴壁法能有效分离纯化GFP转基因小鼠BMSCs,首次换液时间在接种后8～10h时的传代细胞纯度高,具有扩增能力,可作为组织工程和基因治疗研究的种子细胞。

关键词：差速贴壁法分离纯化骨髓问充质干细胞 GFP转基因小鼠

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体外分离与培养SD乳鼠神经干细胞实验过程中部分方法的改进

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中国临床康复 2005年第17期9卷 38-40页

作者：杨玲麟邢玉芝胡火珍李小玉四川大学生命科学院医学生物学与细胞生物学教研室四川省成都市610041

目的:探讨体外培养与分离SD乳鼠神经干细胞的方法,以便获得大量的神经干细胞。方法:实验于2003-06/10在四川大学华西医学中心细胞生物学教研室完成。分别取出生3d的SD乳鼠侧脑室和大脑皮质,用改进后的胰蛋白酶消化法分离单个细胞,进行... 详细信息

目的:探讨体外培养与分离SD乳鼠神经干细胞的方法,以便获得大量的神经干细胞。方法:实验于2003-06/10在四川大学华西医学中心细胞生物学教研室完成。分别取出生3d的SD乳鼠侧脑室和大脑皮质,用改进后的胰蛋白酶消化法分离单个细胞,进行细胞培养,加20μg/L表皮生长因子,20μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激生长,用半定量法换培养液,用免疫细胞化学方法对神经干细胞进行鉴定,流式细胞仪分别对每天培养的神经干细胞凋亡率进行检测。结果:①所获得的克隆细胞具有抗巢蛋白免疫荧光反应阳性、具有增殖、血清诱导分化的特性,证明这些细胞为神经干细胞。②培养的侧脑室神经干细胞比大脑皮质的神经干细胞增殖快。③改进的胰蛋白酶消化法得到了1×108L-1单细胞,避免了过度消化或过度机械吹打造成的细胞碎片。④含20μg/L表皮生长因子和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基适合神经干细胞短期培养。⑤流式细胞仪定量检测细胞凋亡率呈下降趋势。结论:SD乳鼠体外培养神经干细胞取材最佳位置应该是脑室管膜或室管膜下。神经干细胞的存活和分裂有赖于表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子按一定比例的共同作用。采用改进的胰酶消化法提高有效细胞产生率,应用半定量换液法可有效减少细胞凋亡率。

关键词：干细胞神经系统大鼠,Sprague-Dawley 细胞,培养的

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