检索结果-内蒙古大学图书馆

四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 452-454页

作者：郑凌云周祖玉陶大昌蓝庭剑四川大学华西基础医学与法医学院生理学教研室成都610041 四川大学生命科学院细胞生物学教研室

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol... 详细信息

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol/ L、1.5× 10 - 4 mol/ L 三种浓度分别加入培养基中 ,预处理 2 4h后 ,再置于上述缺氧复氧环境中培养 ,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶 ( L DH)、丙二醛 ( MDA)、超氧化物歧化酶 ( SOD)含量 ,并检测各组细胞的凋亡率。结果　与正常对照组相比 ,缺血及再灌组细胞上清液中 L DH、MDA含量明显升高 ( P<0 .0 1) ,SOD活力则显著降低 ( P<0 .0 1) ,缺血组和再灌组凋亡率均升高明显 ( P<0 .0 1)。而用黄连素预处理后缺血及再灌组的 L DH、MDA显著低于用药前 ( P<0 .0 1) ,SOD则高于单纯缺血和再灌组 ( P<0 .0 1) ,上述作用在本实验黄连素浓度为 1.5× 10 - 6 m ol/ L～ 1.5× 10 - 4 mol/ L 范围内 ,随浓度升高而更加明显。特别是用黄连素 1.5× 10 - 5mol/ L 浓度预处理后 ,缺血组和再灌组的细胞凋亡率分别是 14.4%和 2 0 % ,分别与用药前 ( 17.4%和 41% )比较有显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论　黄连素对缺血再灌心肌细胞有保护作用。

关键词：黄连素缺血再灌注心肌细胞损伤保护作用细胞凋亡

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嗜肺军团菌PAL抗原基因的克隆及真核表达

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四川大学学报（医学版） 2007年第4期38卷 583-586,598页

作者：田玉陈建平杨春蕾刘明杰四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室

目的构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-PAL,并观察其在NIH3T3细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌PAL基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,将经酶切、PCR扩增及序列测定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-PAL。脂质体法将重组质粒pcDNA3... 详细信息

目的构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-PAL,并观察其在NIH3T3细胞中的表达。方法PCR扩增嗜肺军团菌PAL基因,定向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,将经酶切、PCR扩增及序列测定正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-PAL。脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-PAL转染NIH3T3细胞,经免疫荧光和RT-PCR检测其瞬时表达和稳定表达产物。结果重组质粒pcDNA3.1-PAL转染NIH3T3细胞后获得了有效表达。结论成功构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-PAL为嗜肺军团菌核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。

关键词：嗜肺军团菌 PAL 基因克隆基因表达

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人骨髓间充质干细胞对小鼠神经干细胞增殖与分化培养的影响

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四川大学学报（自然科学版） 2009年第1期46卷 211-216页

作者：陈玉吴秦洁李舍予张勇刚胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064

通过在体外培养、鉴定人的骨髓间充质干细胞与小鼠神经干细胞,用骨髓间充质干细胞条件培养基分别在增殖与分化条件下对神经干细胞进行培养。发现,间充质干细胞条件培养基在增殖条件下能加快神经球内神经干细胞的迁移,使神经球解聚,对神... 详细信息

通过在体外培养、鉴定人的骨髓间充质干细胞与小鼠神经干细胞,用骨髓间充质干细胞条件培养基分别在增殖与分化条件下对神经干细胞进行培养。发现,间充质干细胞条件培养基在增殖条件下能加快神经球内神经干细胞的迁移,使神经球解聚,对神经干细胞增殖没有影响;而间充质干细胞条件培养基在分化条件下,能增加神经干细胞向少突胶质细胞分化的能力,降低向星型胶质细胞的分化能力,对向神经元分化能力没有影响,间充质干细胞可能是通过促进神经干细胞迁移、分化而加快神经损伤的修复的。

关键词：骨髓间充质干细胞神经干细胞神经损伤修复

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成年大鼠急性脊髓全横断损伤后差异表达蛋白的蛋白组学研究

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四川大学学报（自然科学版） 2008年第2期45卷 419-425页

作者：谢玲林胡火珍杨明理刘新宇四川大学生命科学学院医学生物学与细胞生物学教研室成都610041

为进一步阐明脊髓损伤(SCI)的修复机制,对SD成年大鼠进行急性全横断损伤,将损伤前后的大鼠脊髓总蛋白质进行固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE),经考马斯亮蓝染色后,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串... 详细信息

为进一步阐明脊髓损伤(SCI)的修复机制,对SD成年大鼠进行急性全横断损伤,将损伤前后的大鼠脊髓总蛋白质进行固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE),经考马斯亮蓝染色后,借助PDQuest软件从中找出差异表达蛋白质点.应用基质辅助激光解吸电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定,成功鉴定出38种蛋白质.其中表达上调的蛋白质有电压依赖的阴离子选择通道蛋白1、α-烯醇酶、硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶3、生长因子受体结合蛋白2等,表达下调的蛋白质有谷氨酰胺合成酶、14-3-3 epsilon、磷脂酰乙醇胺结合蛋白1、血红蛋白-β1等.鉴定出的差异蛋白多数涉及到神经细胞的增殖、凋亡、应激反应等过程.

关键词：急性脊髓损伤双向电泳差异表达蛋白质质谱

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用精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

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四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 208-211页

作者：钟立武李丹胡火珍李小玉邓候富四川大学生命科学院细胞生物学教研室成都610041 四川大学华西医院成都610041

目的　探讨精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性 .方法　构建乙肝病毒X基因表达载体 pcDNA3 X ;应用微量注射针将脂质体包裹的 pcDNA3 X表达载体直接注入C5 7BL/ 6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与... 详细信息

目的　探讨精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性 .方法　构建乙肝病毒X基因表达载体 pcDNA3 X ;应用微量注射针将脂质体包裹的 pcDNA3 X表达载体直接注入C5 7BL/ 6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的 pX蛋白 .结果　共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %.结论　初步明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的 .

关键词：乙肝病毒X基因转基因小鼠精原干细胞

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皮质神经元缺氧缺血后缺氧诱导因子1α表达与细胞外调节蛋白激酶信号通路的关系

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中国修复重建外科杂志 2009年第8期23卷 954-958页

作者：张莉屈艺张筱岚杨春蕾毛萌母得志四川大学华西第二医院儿科成都610041 四川大学生命科学学院医学细胞生物学教研室

目的探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)及细胞外调节蛋白激酶1/2(extra-cellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)在体外培养的胎鼠大脑皮质神经元缺氧缺血再灌注后变化的趋势及其相互关系。方法取15只16～18d孕龄SD大鼠的大脑皮层,进行皮质神经元原代培养,取培养5d的原代神经元建立氧糖剥离(oxygen and glucose deprivation,OGD)模型。实验分为实验组1:OGD模型制备后,更换培养液为含葡萄糖的神经元完全培养基,以形成再灌注;取再灌注0、2、4、8、12、24h观察;对照组1:正常培养液孵育的神经元;实验组2:U0126预处理神经元后制备OGD模型,于再灌注后4、8h观察;对照组2:DMSO预处理神经元后制备OGD模型,余同实验组2。应用Westernblot定量测定各组HIF-1α、VEGF蛋白及ERK1/2、p-ERK1/2的表达变化,SABC免疫细胞化学法检测p-ERK1/2、HIF-1α蛋白表达及分布情况。结果培养5d的皮质神经元突起间互相连接成网状。实验组1HIF-1α、VEGF蛋白表达逐渐升高,8h表达量最高,12h后逐渐下降,与对照组1比较差异有统计学意义(P<0.05)。各时间点实验组1与对照组1ERK1/2蛋白表达无明显差异(P>0.05)。实验组1p-ERK1/2蛋白表达在2h时开始增加,4h达高峰,8h开始下降,与对照组1比较差异有统计学意义(P<0.01);实验组2p-ERK1/2蛋白表达下降,HIF-1α及VEGF蛋白表达也随之下调,与对照组2比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各时间点实验组2和对照组2ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫细胞化学染色显示神经元黄棕色着色减弱,p-ERK1/2、HIF-1α表达下降。结论HIF-1α及其靶基因VEGF蛋白在OGD再灌注后的皮质神经元表达具有一定时间规律性,抑制ERK1/2信号通路后这两个蛋白表达均下降,提示该通路在神经元OGD后诱导HIF-1α及VEGF的调控中起重要作用。

关键词：神经元缺氧缺血缺氧诱导因子1α 细胞外调节蛋白激酶胎鼠

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刺五加对大鼠脑缺血损伤修复作用的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2006年第1期43卷 217-221页

作者：林洪王有为邢玉芝杨玲麟胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064

采用双侧颈总动脉结扎制作SD大鼠暂时性全脑缺血模型,手术后尾静脉分别注射药物刺五加注射液或生理盐水进行观察和神经行为学评分,制片作常规HE染色和Nestin免疫组化染色检测缺血损伤后的修复情况.神经行为学评分显示刺五加组神经功能... 详细信息

采用双侧颈总动脉结扎制作SD大鼠暂时性全脑缺血模型,手术后尾静脉分别注射药物刺五加注射液或生理盐水进行观察和神经行为学评分,制片作常规HE染色和Nestin免疫组化染色检测缺血损伤后的修复情况.神经行为学评分显示刺五加组神经功能恢复明显好于生理盐水组.脑缺血再灌注后3d时海马、室管膜和室管膜下区神经干细胞有少量Nestin阳性表达;脑缺血再灌注后5d和7d时海马、室管膜、室管膜下区和缺血区神经干细胞阳性Nestin阳性细胞数明显增加,尤其在缺血区,刺五加组Nestin阳性表达细胞数显著多于生理盐水对照组.结果表明刺五加有促进脑缺血脑组织神经干细胞的增殖,对大鼠脑缺血损伤有一定修复作用.

关键词：刺五加脑缺血神经干细胞巢蛋白

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人神经营养素-4基因的原核表达与纯化

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四川大学学报（自然科学版） 2005年第3期42卷 588-591页

作者：孙元田肖冰徐洁杰潘克俭陈平胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室成都610064

以人外周血淋巴细胞基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出神经营养素4基因(NT 4)成熟蛋白的DNA序列,并将其克隆到表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基βD 半乳糖苷(Isopropyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后高效特... 详细信息

以人外周血淋巴细胞基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出神经营养素4基因(NT 4)成熟蛋白的DNA序列,并将其克隆到表达载体pET32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基βD 半乳糖苷(Isopropyl beta D thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后高效特异表达了分子量约为35kD的蛋白,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中,经Ni2+ NTA树脂亲和层析纯化,得到了纯度达94%的NT 4成熟蛋白的融合蛋白为进一步研究NT

关键词：人神经营养素-4 原核表达融合蛋白分离纯化

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可溶性人干细胞因子的原核表达和纯化

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四川大学学报（自然科学版） 2005年第3期42卷 584-587页

作者：肖冰孙元田徐洁杰潘克俭胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室四川成都610064

用Trizol提取人骨髓总RNA,通过RT PCR扩增人干细胞因子DNA,克隆到pMD18 T载体中并测序将其定向连入原核表达载体pET32a(+),获得了重组表达载体pET32a(+)/hSCF,其cDNA长度为504bp,测序结果与已知序列吻合然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导... 详细信息

用Trizol提取人骨髓总RNA,通过RT PCR扩增人干细胞因子DNA,克隆到pMD18 T载体中并测序将其定向连入原核表达载体pET32a(+),获得了重组表达载体pET32a(+)/hSCF,其cDNA长度为504bp,测序结果与已知序列吻合然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,获得37kD的融合蛋白,约占菌体总蛋白量的30% 经Ni2+

关键词：人干细胞因子原核表达纯化

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嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 818-823页

作者：王涛陈建平郅克谦陶大昌杨春蕾张雷四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 西安交通大学口腔医学院颌面外科西安710004 四川大学华西医院成都610041 四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室成都610041 大理学院微生物学教研室大理671000

PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和... 详细信息

PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物,结果发现:重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达,稳定转染细胞分别在 2 4ku和 35ku处检测到阳性杂交信号.将pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN γ产生水平、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标,评价疫苗的免疫原性.结果发现:各实验组均检测到免疫原性,pcDNA3 1 mip/ctxB免疫组的免疫原性高于pcDNA3 1 mip免疫组,有显著性差异(P <0 0 1).

关键词：嗜肺军团菌霍乱弧菌 mip/ctxB融合基因体外表达免疫原性

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