检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2020年第6期40卷 765-770页

作者：周凡琦冯文新谭普文马艳妮王栋余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 河南地矿职业学院河南郑州450000 南方医科大学基础学院生物信息系广东广州510000

目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)中RNA细胞核和细胞质内分布信息。方法分离hESCs细胞质与细胞核后提取RNA并测序,生物信息学分析核和质中RNA定位特点,并使用RT-qPCR实验技术验证RNA的定位。结果 hESCs细胞质中RNA种类及其特异定位的RNA均... 详细信息

目的探讨人胚胎干细胞(hESCs)中RNA细胞核和细胞质内分布信息。方法分离hESCs细胞质与细胞核后提取RNA并测序,生物信息学分析核和质中RNA定位特点,并使用RT-qPCR实验技术验证RNA的定位。结果 hESCs细胞质中RNA种类及其特异定位的RNA均多于细胞核,其中特异性定位在细胞质中的RNA有2 952个,细胞核中634个。结论描绘hESCs中RNA细胞核和细胞质定位图谱,鉴定了多个特异定位在细胞核与细胞质的RNA。

关键词：人胚胎干细胞 RNA定位

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汉族肥厚型心肌病患者中Fabry病的基因突变鉴定和家系研究

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中国分子心脏病学杂志 2020年第3期20卷 3356-3360页

作者：肖嫣孙洋张莹田涛赵然旭张迪孟旭范鹏刘亚欣王林平卢超霞周宪梁中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心内科北京市100037 中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院病理科北京市100037 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

目的探讨基因检测在汉族肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者中Fabry病的基因突变情况及家系筛查中的应用,并分析基因型与表型的关系。方法应用半导体靶向二代测序平台筛查在阜外医院诊断为HCM的217例患者,应用Sanger测... 详细信息

目的探讨基因检测在汉族肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者中Fabry病的基因突变情况及家系筛查中的应用,并分析基因型与表型的关系。方法应用半导体靶向二代测序平台筛查在阜外医院诊断为HCM的217例患者,应用Sanger测序验证先证者和家系内成员的GLA基因突变位点,收集GLA突变携带者的临床资料并进行基因型与表型关联分析。结果发现2例男性Fabry病先证者(在HCM中占比0.93%)。1例携带GLA基因错义突变c.887T>C(p.M296T),表现为迟发心脏型Fabry病;对其一家四代中的25个家庭成员进行家系突变筛查,结果发现有4个女性杂合突变携带者,其中1个确诊为HCM。另1例携带GLA基因错义突变c.758T>C(p.I253T),表现为经典型Fabry病,累及肾和神经系统。对其一家四代中的32个家系成员进行家系调查,发现2个女性杂合突变携带者和2个男性早发心脏性猝死。两例先证者经室间隔心肌切除术后梗阻解除,后者应用分子伴侣药物Migalastat治疗后肾功能稳定于31 ml/min。结论首次发现Fabry病在汉族HCM中并不少见,基因检测有助于早期鉴别诊断及筛查家系内突变携带者。GLA c.758T>C为恶性基因型,男性突变携带者猝死风险高危,室间隔心肌切除术和Migalastat有助于改善预后。

关键词： Fabry病肥厚型心肌病 GLA 基因检测 Migalastat

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shRNA干扰eIF4A1基因对胶质瘤细胞体内外生物学特征的影响

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中国科学：生命科学 2019年第8期49卷 987-995页

作者：张俊文范文华方胜陈虹黄秉仁刘福生北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心首都医科大学附属北京天坛医院北京100050 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质... 详细信息

胶质瘤是颅内常见的肿瘤,其中恶性脑胶质瘤成弥漫性生长,尽管给予手术、放疗或化疗等综合治疗,仍极易复发,迫切需要探索新的治疗方法.但是胶质瘤的治疗靶点匮乏,因此探索有效的靶点对其治疗具有重要的意义.本研究中首先利用中国脑胶质瘤基因组图谱计划数据库(Chinese glioma genome altas,CGGA)分析了真核生物翻译起始因子中eIF4A1与脑胶质瘤的关系.生物信息学分析显示,eIF4A与胶质瘤病理分级相关并且在胶质瘤细胞中高表达.eIF4A1的抑制剂Silvestrol明显抑制胶质瘤细胞的增殖能力.利用慢病毒感染胶质瘤细胞建立shRNA干扰eIF4A1基因的胶质瘤细胞株,进行了一系列体内外生物学特征的实验,研究结果发现,shRNA干扰eIF4A1基因后能够有效抑制胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、细胞侵袭和迁移.因此,本实验研究证实eIF4A1是胶质瘤治疗的有效靶点,为胶质瘤的临床治疗提供可靠的理论基础.

关键词：胶质瘤 eIF4A1 增殖克隆形成侵袭迁移

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CRISPR质粒和同源重组模板的共转染可降低CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 1048-1054页

作者：林琼张祝琴刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法。方法用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率,Cas9 RNA和DNA水平的差异;RT-q... 详细信息

目的探讨CRISPR质粒和同源重组模板的共转染对CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率的影响以及可行的解决办法。方法用T7E1内切酶实验和RT-qPCR检测只转染CRISPR质粒组和质粒和模板共转染组细胞内Cas9的切割效率,Cas9 RNA和DNA水平的差异;RT-qPCR检测降低共转染的模板DNA的数量时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平的变化;RT-qPCR和T7E1内切酶实验检测先转染CRISPR质粒后转染同源重组模板时,细胞内Cas9 DNA和RNA水平以及切割效率的变化。结果与只转染CRISPR质粒组相比,CRISPR质粒和同源重组模板的共转染显著降低了CRISPR质粒的转染效率(P<0.001)和Cas9的切割效率(P<0.001)。而先转染质粒后转染同源重组模板组和只转染质粒组在CRISPR质粒的转染效率和Cas9的切割效率差别无统计学意义。结论CRISPR质粒和同源重组模板的共转染降低了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率,而先转染质粒后转染同源重组模板可以解决这一问题。

关键词： CRISPR/Cas9系统共转染分开转染同源重组模板

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胱硫醚β合成酶通过ATG5巯基化促进自噬缓解阿尔茨海默病

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 983-988页

作者：杜亚云刘晓丽朱席琳伍晓盼刘英中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探究胱硫醚β合成酶(CBS)对阿尔茨海默病的影响及其作用机制。方法用Western blot检测CBS的过表达效果及其对淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响,检测CBS对自噬标志物LC3的影响;用ELISA检测CBS对细胞上清中Aβ1-42的影响;用亚甲基蓝法检... 详细信息

目的探究胱硫醚β合成酶(CBS)对阿尔茨海默病的影响及其作用机制。方法用Western blot检测CBS的过表达效果及其对淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响,检测CBS对自噬标志物LC3的影响;用ELISA检测CBS对细胞上清中Aβ1-42的影响;用亚甲基蓝法检测H2S的生成;用生物素转换及Western blot实验验证H2S对自噬相关蛋白5(ATG5)的巯基化作用。用侧脑室注射质粒的方法在小鼠体内过表达CBS;用Y迷宫实验验证CBS对小鼠学习记忆能力的影响。结果CBS降低了细胞上清中Aβ1-42的水平(P<0.05);抑制了APP的表达(P<0.05);CBS促进了H2S的生成(P<0.01),CBS促进了ATG5的巯基化;CBS促进了自噬标志物LC3的表达,抑制了P62的表达,促进了自噬水平;CBS促进阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力(P<0.05)。结论CBS通过促进硫化氢生成促进了ATG5第19位半胱氨酸发生巯基化,进而促进自噬,缓解了阿尔茨海默病的病理进程。

关键词：胱硫醚β合成酶自噬相关蛋白5 巯基化细胞自噬阿尔茨海默病

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甲基转移酶样3通过调控MYC的N6-甲基腺苷水平促进急性髓系白血病细胞的增殖

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中国医学科学院学报 2018年第3期40卷 308-314页

作者：王小爽何金蓉于姗余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在急性髓系白血病(AML)细胞增殖中的功能和调控机制。方法通过基因表达汇编数据集检索METTL3在AML患者中的表达情况及METTL3在成体造血干/祖细胞髓系分化中的表达情况;在MOLM13细胞中利用慢病毒转导的方... 详细信息

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在急性髓系白血病(AML)细胞增殖中的功能和调控机制。方法通过基因表达汇编数据集检索METTL3在AML患者中的表达情况及METTL3在成体造血干/祖细胞髓系分化中的表达情况;在MOLM13细胞中利用慢病毒转导的方式抑制METTL3的内源表达,检测细胞增殖情况,总mRNA的N6-甲基腺苷(m6A)水平,采用基因特异的m6A RNA免疫共沉淀检测MYC mRNA上的m6A水平,并进一步检测MYC mRNA和蛋白的表达水平。结果与正常对照相比,METTL3在AML-M5型患者中有上调趋势;幼稚细胞中的METTL3相对表达量显著高于成熟的单核细胞(t=4.504,P=0.0098)。抑制内源METTL3的表达后,MOLM13细胞增殖减缓(P<0.001),MOLM13细胞总mRNA的m6A水平降低(t=3.606,P=0.042),MYC上特异的m6A水平显著降低(P<0.01),MYC的表达显著减少(P<0.01)。结论 METTL3在MOLM13细胞中可通过增加MYC的表达水平而发挥原癌基因的功能。

关键词：甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷急性髓系白血病增殖 MYC

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一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化

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基础医学与临床 2019年第5期39卷 738-744页

作者：胡小青肖广原张鹏陈厚早刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测... 详细信息

目的优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率。方法分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式;将质粒转染哺乳动物细胞,使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平。结果低温进行质粒提取能够显著提高质粒提取效率(P<0.05),并显著提高其在哺乳动物细胞中的表达效率(P<0.01)。质粒提取的3个步骤:细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感,从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率。结论成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法。

关键词：质粒提取质粒构型低温转染效率

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骨骼肌的再生

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中国细胞生物学学报 2019年第9期41卷 1690-1702页

作者：傅鑫李虎杨雯隽韩婉虹张勇胡苹中国科学院分子细胞卓越创新中心/生物化学与细胞生物学研究所细胞生物学国家重点实验室上海200031 中国科学院干细胞与再生创新研究院北京100101 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

骨骼肌是体内最大的器官,对呼吸、代谢、体温保持、运动等基本生命活动有重要的调控作用。运动、疾病、创伤以及其他因素会导致骨骼肌的损伤,骨骼肌能够通过再生对于这些损伤进行程度不同的修复。骨骼肌再生主要通过骨骼肌干细胞进行。... 详细信息

骨骼肌是体内最大的器官,对呼吸、代谢、体温保持、运动等基本生命活动有重要的调控作用。运动、疾病、创伤以及其他因素会导致骨骼肌的损伤,骨骼肌能够通过再生对于这些损伤进行程度不同的修复。骨骼肌再生主要通过骨骼肌干细胞进行。骨骼肌再生涉及到多种细胞类型的协同作用,受到复杂、精细的调控,以保证再生过程的有序进行。该文对骨骼肌再生的最新进展进行简略综述。

关键词：骨骼肌骨骼肌损伤骨骼肌再生骨骼肌干细胞骨骼肌再生调控

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三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 949-953页

作者：林群刘丽铭代辉张艳君张业中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。方法在MDA-MB-231细胞中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1,在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量;ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子... 详细信息

目的研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。方法在MDA-MB-231细胞中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1,在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量;ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子的结合能力;荧光素酶双报告基因检测PRMT1和C/EBPα对c-myc启动子的调控作用。结果过表达C/EBPα、敲低PRMT1后,c-myc表达明显下降;C/EBPα蛋白3个甲基化位点35位、156位和165位精氨酸突变为苯丙氨酸后(3RF),C/EBPα对c-myc启动子的转录抑制明显减弱。而3个位点同时突变成赖氨酸后(3RK),PRMT1对c-myc的调控作用消失。结论在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,PRMT1通过甲基化C/EBPα调控c-myc的转录。

关键词： PRMT1 C/EBPα c-myc 精氨酸甲基化

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抑郁症患者中升高的前列腺素E1与抑郁样行为相关

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基础医学与临床 2019年第4期39卷 483-488页

作者：马铭婕许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家医学分子生物学重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的研究在抑郁症(MDD)患者队列外周血及慢性不可预知温和型应激(CUMS)小鼠模型大脑组织中前列腺素E1(PGE1)浓度及其代谢通路上的关键基因(PLA2、PTGS1、PTGS2和PTGES)表达量的改变,以明确PGE1的改变与MDD疾病间的关系。方法用高效液相... 详细信息

目的研究在抑郁症(MDD)患者队列外周血及慢性不可预知温和型应激(CUMS)小鼠模型大脑组织中前列腺素E1(PGE1)浓度及其代谢通路上的关键基因(PLA2、PTGS1、PTGS2和PTGES)表达量的改变,以明确PGE1的改变与MDD疾病间的关系。方法用高效液相色谱(HPLC)检测受试者外周血浆和CUMS小鼠脑组织中PGE1和PGE2的浓度;用RT-qPCR检测PLA2、PTGS1、PTGS2和PTGES的mRNA表达水平。结果在MDD患者中,血浆PGE1浓度和PTGS1的表达水平均显著上升(P<0.05)。这一结果在CUMS小鼠外周血和大脑杏仁核组织中得到了有效验证。结论 PGE1在MDD中的上升,可能与前列腺素合成通路的功能亢进有关。

关键词：抑郁症 PGE1 PTGS1

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