检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2016年第2期36卷 218-221页

作者：张静刘彦山赵秀丽张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定和产前基因诊断。方法酚-氯仿法提取外周全血或妊娠13周胎儿绒毛组织基因组DNA;利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析;针对先证者携... 详细信息

目的在一个肝豆状核变性(WD)家系中进行致病突变鉴定和产前基因诊断。方法酚-氯仿法提取外周全血或妊娠13周胎儿绒毛组织基因组DNA;利用PCR-Sanger测序技术对先证者ATP7B基因外显子及外显子/内含子衔接区序列进行突变分析;针对先证者携带的突变位点,应用聚合酶链反应(PCR)-高分辨熔解曲线(HRM)方法对先证者家系4名成员进行突变鉴定,并在此基础上为患儿母亲提供产前基因诊断。结果先证者ATP7B基因第8外显子存在纯合致病突变c.2333G>T(p.R778L);该家系5名成员和4名群体正常样本分属于3种不同熔解曲线。HRM分析结果与测序结果一致,即:患儿本人为R778L的纯合子,其父母、姐姐和母亲产前诊断的胎儿均为突变杂合子,4名群体正常对照为纯合野生型。结论在一个WD家系中检测到ATP7B基因热点突变c.2333G>T(p.R778L),并针对该突变建立了一种基于PCR-HRM技术的快速突变鉴定方法,成功为家系提供产前基因诊断。

关键词：肝豆状核变性 ATP7B基因聚合酶链反应高分辨熔解曲线分析产前基因诊断

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人MutS同源蛋白2(hMSH2)过表达的肺癌细胞模型的构建

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基础医学与临床 2017年第7期37卷 929-934页

作者：陆必超沈青丽李文利李娟陈慧代玉梅何维中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家分子生物学重点实验室北京100005 广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心临床检验部/妇产科广东广州510623 广州医科大学附属肿瘤医院检验科广东广州510000

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过... 详细信息

目的构建人Mut S同源蛋白2(h MSH2)过表达的肺癌细胞模型,探究h MSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的效应。方法 PCR扩增h MSH2编码序列,同源重组法构建h MSH2-EGFP融合蛋白过表达载体;转染肺癌细胞系NCI-H520细胞以构建h MSH2分子过表达的NCI-H520细胞模型;Western blot检测细胞中h MSH2分子表达,流式细胞计量术检测细胞膜上h MSH2分子表达,体外扩增人外周血单个核细胞中的γδT细胞,乳酸脱氢酶释放法检测γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率。结果获得h MSH2编码序列(2 805 bp),构建Fugw-h MSH2重组载体,酶切鉴定结果与预期目的条带大小相符;h MSH2-EGFP融合蛋白在NCI-H520细胞中得到表达,过表达h MSH2的NCI-H520细胞表面的h MSH2分子水平显著升高(P<0.001);γδT细胞对过表达h MSH2的NCI-H520细胞的杀伤效率较野生型NCI-H520细胞显著升高(P<0.05)。结论成功构建h MSH2分子过表达的肺癌细胞模型;细胞膜上表达水平上调的h MSH2分子增强了γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用。

关键词：人Mut S同源蛋白2 γδT细胞 NCI-H520细胞

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单染色体靶向富集方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第9期32卷 1060-1066页

作者：谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 聊城大学生命科学学院聊城25200

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍... 详细信息

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。

关键词：多重退火环形扩增高通量测序靶向富集单染色体流式分选

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过表达TRIM69抑制细胞内源c-Jun蛋白的表达

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基础医学与临床 2016年第6期36卷 767-771页

作者：王任先李凯姚荣彦缪时英王琳芳宋伟北京积水潭医院北京市创伤骨科研究所骨组织工程研究室北京100035 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索TRIM69负调控AP1信号通路及抑制内源c-Jun蛋白表达的分子机制。方法在子宫颈癌细胞He La细胞或人胚肾细胞HEK293T细胞共转染荧光素酶报告基因质粒和空载体或TRIM69,共转空载体组作为对照,通过双荧光素酶报告基因实验检测了TRIM6... 详细信息

目的探索TRIM69负调控AP1信号通路及抑制内源c-Jun蛋白表达的分子机制。方法在子宫颈癌细胞He La细胞或人胚肾细胞HEK293T细胞共转染荧光素酶报告基因质粒和空载体或TRIM69,共转空载体组作为对照,通过双荧光素酶报告基因实验检测了TRIM69对8条关键信号通路的影响;在HEK293T细胞过表达TRIM69全长及各个结构域的截短体,通过Western blot实验检测了TRIM69抑制细胞内源c-Jun蛋白表达的关键结构域;在HEK293T细胞过表达TRIM69,利用cycloheximide(CHX)、MG132或chloroquine分别处理细胞,通过蛋白稳定性实验探讨了TRIM69负调控内源c-Jun蛋白表达的分子机制。结果 TRIM69可以特异负调控AP1信号通路(P<0.05),并且TRIM69对内源c-Jun蛋白表达的抑制作用依赖于其RBCC结构域(P<0.05),进一步研究发现TRIM69通过蛋白酶体途径影响内源c-Jun蛋白的稳定性(P<0.05)。结论 TRIM69负调控AP1信号通路并通过蛋白酶体途径影响内源c-Jun蛋白的降解。

关键词： TRIM69 AP1信号通路转录因子c-Jun

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利用CRISPR／Cas9技术敲除HeLa细胞中YAF2基因

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医学研究杂志 2016年第11期45卷 22-27页

作者：丛晓杰马晓骊陈虹黄秉仁陈等中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系、医学分子生物学国家重点实验室 100005

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-g... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9技术建立YAF2(YY1 associated factor 2)基因敲除的宫颈癌He La细胞株,用于YAF2基因在宫颈癌细胞中分子功能的研究。方法首先利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计两对靶向YAF2基因第2外显子不同位点的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)。化学合成sgRNA寡核苷酸序列,分别克隆至质粒p X335中,测序确认插入片段正确的克隆。先用一对重组载体转染He La细胞,7天后,再用另一对转染He La细胞,第2对转染3天后,取培养细胞的2/3提取基因组DNA,对敲除位点附近的片段进行PCR扩增后通过DNA测序对敲除效率进行分析,剩余细胞在96孔平板上通过有限稀释法筛选YAF2敲除的细胞株。用蛋白质免疫印迹实验初步鉴定YAF2蛋白质表达缺失的细胞克隆,提取其基因组DNA,对敲除位点附近的序列进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p GEM-T easy载体,通过DNA测序确认YAF2基因纯合敲除的细胞株。结果成功构建两对针对人YAF2基因第二外显子的p X335-sgRNA质粒;PCR产物测序证明两对重组载体均有YAF2基因敲除活性;得到2株YAF2敲除的He La细胞株。结论利用CRISPR/Cas9技术在He La细胞中成功敲除YAF2基因,为在He La细胞中研究YAF2的分子功能奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 YAF2 HeLa

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应用Ion Torrent PGM测序平台进行遗传病panel测序研究

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国际遗传学杂志 2016年第6期39卷 295-299+305页

作者：周剑柳青刘芳卢超霞司锘王蓉蓉张学中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

目的使用Ion AmliSeq多重PCR定制序列捕获系统及Ion Torrent PGM高通量测序平台对散发肌张力障碍患者进行肌张力障碍致病基因变异检测,以优化检测流程,探讨应用靶序列捕获结合高通量测序进行遗传病遗传诊断辅助临床干预的可能性。方法... 详细信息

目的使用Ion AmliSeq多重PCR定制序列捕获系统及Ion Torrent PGM高通量测序平台对散发肌张力障碍患者进行肌张力障碍致病基因变异检测,以优化检测流程,探讨应用靶序列捕获结合高通量测序进行遗传病遗传诊断辅助临床干预的可能性。方法对95例确诊的肌张力障碍患者的外周血白细胞DNA使用Ion AmliSeq多重PCR进行靶序列捕获,Ion Torrent PGM平台进行高通量测序,并对所得结果进行Sanger测序验证。结果本研究使用芯片12张,测序深度为134±44,覆盖度96.12%±0.71%。单张芯片测序周期为6小时(上机测序),单张芯片最高通量可达到900bib以上。在95例肌张力患者中检出罕见变异71个,经Sanger验证准确率为41.04%,假阳性率58.96%。影响测序筛查质量主要原因在于DNA特殊序列如序列中存在同聚物。结论 Ion Torrent PGM高通量测序平台的使用,具有测序通量高,操作简便,速度快,成本低的优点,可以提高基因突变筛查水平,在合理范围内扩增基因筛选数目,可以协助临床对肌张力障碍的鉴别诊断提供指导作用。

关键词：高通量测序 PGM测序平台 panel测序

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天然反义转录物及其在神经胶质瘤中的功能

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中国生化药物杂志 2016年第5期36卷 1-4,221页

作者：朱丽媛彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系/医学分子生物学国家重点实验室北京100005

天然反义转录物(natural antisense transcripts,NATs)被定义为在自然状态下生物体内产生的内源性RNA,其通常是通过与靶分子进行序列互补而形成天然的正义-反义转录物配对的双链RNA。NATs普遍存在于原核和真核生物中,可以在转录水平、... 详细信息

天然反义转录物(natural antisense transcripts,NATs)被定义为在自然状态下生物体内产生的内源性RNA,其通常是通过与靶分子进行序列互补而形成天然的正义-反义转录物配对的双链RNA。NATs普遍存在于原核和真核生物中,可以在转录水平、转录后水平、翻译水平等多个层次经由不同机制调节基因的表达。此外,NATs也与恶性肿瘤的发生发展密切相关,一些NATs在正常组织与神经胶质瘤组织中的表达存在显著差异。NATs可能成为神经胶质瘤诊断、预后以及治疗效果的一种新的标志物,同时NATs也是潜在的新的胶质瘤基因治疗的靶点。本文对NATs的分类及其在神经胶质瘤中的功能及可能的机制做具体阐述。

关键词：天然反义转录物(NATs) 神经胶质瘤癌症

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血管紧张素Ⅱ对行择期经皮冠状动脉介入治疗患者院内预后的预测作用

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协和医学杂志 2016年第1期7卷 13-17页

作者：邓庆媛叶益聪钟颖盛苗苗黄凤鸣蒋澄宇张抒扬中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院心内科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨血浆血管紧张素Ⅱ水平对行择期经皮冠状动脉介入治疗患者院内预后的预测作用。方法连续纳入2012年7月至2013年7月在北京协和医院心内科住院行择期经皮冠状动脉介入治疗的患者645例,测定其血浆血管紧张素Ⅱ水平并记录其发生院内... 详细信息

目的探讨血浆血管紧张素Ⅱ水平对行择期经皮冠状动脉介入治疗患者院内预后的预测作用。方法连续纳入2012年7月至2013年7月在北京协和医院心内科住院行择期经皮冠状动脉介入治疗的患者645例,测定其血浆血管紧张素Ⅱ水平并记录其发生院内主要心血管不良事件情况。院内主要心血管不良事件定义：全因死亡、非致死性心肌梗死、新发非致死性卒中（缺血性及出血性）、非计划再次血管重建。分析血管紧张素Ⅱ水平与院内心血管不良事件的相关性。结果 645例患者中共有68例（10.54%）发生院内心血管不良事件,发生院内心血管不良事件者血浆血管紧张素Ⅱ水平显著高于未发生院内心血管不良事件者[41.42（28.73,57.07）ng/L比35.66（22.84,48.22）ng/L,P=0.009]。多因素Logistic回归分析显示血管紧张素Ⅱ为院内心血管不良事件的独立危险因素（比值比1.018,95%CI：1.004-1.032,P=0.012）。结论血浆血管张素Ⅱ水平与择期经皮冠状动脉介入治疗患者的院内不良预后相关,具有重要的预测价值。

关键词：血管紧张素Ⅱ 经皮冠状动脉介入治疗预后

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长链非编码RNA在结直肠癌中的研究进展

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中国生化药物杂志 2016年第5期36卷 5-7页

作者：武丽娜彭小忠鲁重美中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化内科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100730

DNA元件百科全书计划揭示了人类基因组只有不到2%的基因是蛋白编码基因,其他都是非蛋白编码基因。根据核苷酸数目,非蛋白编码RNA可分为长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和小编码RNA。lncRNA是指核苷酸长度大于200nt的非编码RN... 详细信息

DNA元件百科全书计划揭示了人类基因组只有不到2%的基因是蛋白编码基因,其他都是非蛋白编码基因。根据核苷酸数目,非蛋白编码RNA可分为长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和小编码RNA。lncRNA是指核苷酸长度大于200nt的非编码RNA。一些肿瘤发病机制与肿瘤相关基因座位上的lncRNA有关,lncRNA的差异表达能够影响肿瘤的发生发展。结直肠癌是最常见的肿瘤之一,其发病率和死亡率较高,在我国所有肿瘤中列第五位。一些癌基因和肿瘤抑制基因参与结直肠癌的发生发展过程,lncRNA也在其中起重要作用。

关键词：长链非编码RNA 结直肠癌

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系统生物医学与抗衰老

系统生物医学与抗衰老

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中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议

作者：刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

全球老龄化及心血管疾病等衰老相关疾病给人类社会带来严重负担,因此急需对衰老进行深入研究。目前已经提出诸多衰老机制理论,包括适应不良的慢性炎症反应、氧化应激、细胞衰老和基因组不稳定性理论等。这些研究多是将衰老的多种表现视... 详细信息

全球老龄化及心血管疾病等衰老相关疾病给人类社会带来严重负担,因此急需对衰老进行深入研究。目前已经提出诸多衰老机制理论,包括适应不良的慢性炎症反应、氧化应激、细胞衰老和基因组不稳定性理论等。这些研究多是将衰老的多种表现视为互不相关的过程而忽视其内在联系。因为衰老与衰老相关疾病是复杂的系统性问题,所以需要系统性科学研究。系统生物医学全方位、立

关键词：系统生物医学抗衰老延缓衰老

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