检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2022年第2期36卷 136-140页

作者：袁航吴雅彬任皎赵莉豆亚美田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 恺佧生物科技有限公司上海201114

目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细... 详细信息

目的对非复制型痘苗病毒NTV感染人源细胞后的细胞形态变化及相关分子机制进行研究,为NTV载体的进一步优化改造和应用提供科学依据。方法用复制型痘苗病毒天坛株VTT和非复制型痘苗病毒NTV感染HeLa细胞,观察细胞的形态学变化。然后收获细胞,电泳检测rRNA断裂水平和Western blot检测凋亡相关分子信号,初步确定NTV诱导的早期细胞凋亡的通路与机制。结果在细胞形态学方面观察到被NTV感染的细胞,与VTT相比,能够在较早时间出现细胞变圆、皱缩等病变现象。DAPI染色观察到被NTV感染的细胞核在早期会出现染色质高度凝聚、边缘化的现象并随着时间的增加而崩解。rRNA断裂水平检测结果说明被NTV感染16 h后的rRNA已发生断裂和降解。Western blot检测结果说明在NTV感染HeLa细胞中能够检测到比正常细胞中更强的PARP、caspase-3及caspasee-9的分子信号,但caspasee-8并没有明显增加,而VTT的结果则与NTV相反。结论NTV在早期能够诱导细胞凋亡,为痘苗病毒载体改造提供理论依据。

关键词：痘苗病毒复制缺陷细胞凋亡病毒载体

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不同食物中诺如病毒检测方法的优化与评估

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病毒学报 2019年第3期35卷 505-511页

作者：王宏盖婧璇靳淼李慧莹段招军王飞苟丽霞国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 华北理工大学生命科学学院唐山063200

近年来,由病毒引起的食源性疾病越来越多,其中诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是全球急性胃肠炎暴发的主要致病原。污染的食品是NoVs主要的传播途径之一。本文对不同食品中NoVs检测方法进行优化和评估,为我国NoVs引起的食源性病毒病的应对... 详细信息

近年来,由病毒引起的食源性疾病越来越多,其中诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是全球急性胃肠炎暴发的主要致病原。污染的食品是NoVs主要的传播途径之一。本文对不同食品中NoVs检测方法进行优化和评估,为我国NoVs引起的食源性病毒病的应对提供实验室检测技术支撑。以鼠诺如病毒(Murine norovirus-1,MNV-1)为模式病毒和过程对照病毒,优化和评估洗脱-浓缩法和直接RNA提取法,考察Trallk洗液、NaPP洗液、TGBE洗液和TPB洗液对新鲜果蔬食品(包括草莓、葡萄、洋葱和生菜)中MNV-1的洗脱效果,以及不同浓缩方法(PEG沉淀法和超滤法)对病毒洗脱液中MNV-1的浓缩效果;比较洗脱-浓缩法和直接RNA提取法对蛋白、脂肪类食品(蛋糕和午餐肉)中MNV-1的检测效果;评估优化后的方法对新鲜果蔬食品和蛋白、脂肪类食品中NoVs GII的检测效果。结果表明草莓、葡萄、生菜、洋葱中MNV-1的最优洗脱-浓缩方法分别是TGBE洗液-PEG沉淀组合、TGBE洗液-超滤组合、Trallk洗液-PEG沉淀组合和Trallk洗液-超滤组合。草莓和生菜中NoVs GII的检测限可达103基因拷贝数/10g,而葡萄和洋葱中NoVs GII的检测限为10~4基因拷贝数/10g。洗脱-浓缩法和直接RNA提取法回收蛋糕和午餐肉中MNV-1后的效果显示,前者没有回收到MNV-1,后者却成功回收到MNV-1,但是NoVs GII的检测限高于其他种类食品,分别为10~6基因拷贝数/2g和10~4基因拷贝数/2g。本研究建立了新鲜果蔬食品和蛋白脂肪类食品中NoVs GII的检测方法,从而优化和完善了我国食品中NoVs检测体系。

关键词：诺如病毒(NoVs) 新鲜果蔬食品蛋白脂肪类食品富集方法

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2014年湖南省C亚属人腺病毒1株临床分离株的全基因组特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2021年第1期35卷 49-56页

作者：马若群向星宇张红李芳彩黄超洋崔爱利张燕许文波毛乃颖朱贞中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 湖南省疾病预防控制中心长沙410005

目的了解2014年湖南省C亚属人腺病毒(HAdV-C)分离株的基因特征。方法2014年从湖南省长沙市严重急性呼吸道感染儿童病例咽拭子标本中分离到一株HAdV-C病毒株(Hunan2014-s024),分段扩增目的基因片段,拼接后获得全基因组序列,同时下载GenB... 详细信息

目的了解2014年湖南省C亚属人腺病毒(HAdV-C)分离株的基因特征。方法2014年从湖南省长沙市严重急性呼吸道感染儿童病例咽拭子标本中分离到一株HAdV-C病毒株(Hunan2014-s024),分段扩增目的基因片段,拼接后获得全基因组序列,同时下载GenBank数据库中国内外流行的HAdV-C代表株全基因组序列构建HAdV-C数据库,使用生物信息学软件进行全基因组序列特征分析。结果Hunan2014-s024株与2006年山西省健康儿童粪便标本中分离到的HAdV-C病毒株(MK041244-CHN-2006)的同源性最高,并以该病毒基因组元件为主要骨架,在penton base基因上交换了2012年湖南省急性下呼吸道感染患儿分离株(MK041246-CHN-2012)的基因片段。结论2014湖南株(Hunan2014-s024)为2006年山西省病毒株(MK041244-CHN-2006)与2012年湖南株(MK041246-CHN-2012)的重组病毒,由于其致病性可能发生了改变,因此有必要加强HAdV-C的分子流行病学监测,以了解其潜在疾病负担和公共卫生意义。

关键词：湖南省 C亚属人腺病毒基因特征

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重组病毒蛋白纳米颗粒治疗肺腺癌作用

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第4期38卷 402-408页

作者：周文亭邹烨宁沈立萍毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙... 详细信息

目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙肝核心蛋白(hepatitis B core protein,HBc)的主要免疫显性区域(Major Immunodominant region,MIR),利用大肠杆菌进行表达纯化后,得到重组蛋白纳米颗粒HBc-HER2。将此重组蛋白纳米颗粒免疫小鼠肺腺癌皮下瘤模型,通过检测其血清中HER-2抗体水平及抗体型别,评价此纳米颗粒免疫原性。通过小鼠皮下瘤大小变化评价肿瘤治疗效果。结果得到了纯度较高的HBc-HER2重组蛋白,且电镜观察显示其形成了HBc-HER2纳米颗粒,动物实验表明免疫原性强,能够诱导机体产生高滴度的针对HER-2的抗体,并有良好的肿瘤治疗作用。结论基因重组的HBc-HER2在小鼠肺腺癌皮下瘤模型中有明显的抑制肿瘤作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供了依据。

关键词：人类上皮细胞生长因子受体-2 乙肝核心蛋白病毒样颗粒肿瘤免疫治疗

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肉及肉制品中6种致病菌的GeXP多重PCR检测

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食品研究与开发 2021年第13期42卷 168-173页

作者：杨梦婕徐玲丽马学军武桂珍国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 上海爱博才思分析仪器贸易有限公司上海200335

利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反... 详细信息

利用多重基因表达(GenomeLabTM eXpress Profiling,GeXP)遗传分析系统建立一种可单管一次同时检测大肠杆菌O157∶H7、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌和沙门氏菌6种肉及肉制品中致病菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。评价此方法特异性和灵敏性,并初步应用于市场随机购买的肉类样品的检测。结果显示,该方法可在短时间内实现同时对上述6种致病菌进行检测,且检测灵敏度低至103 CFU/mL,为食源性致病菌高通量快速有效检测提供新的方法技术支持,具有较强的实际应用价值。

关键词：食品安全肉及肉制品 GeXP多重聚合酶链式反应致病菌快速检测

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3个非复制型痘苗病毒基因修饰株细胞生物学特性及小鼠体内毒力比较

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中华实验和临床病毒学杂志 2023年第2期37卷 146-151页

作者：豆亚美任皎赵莉袁航孟昕田厚文王文玲谭文杰中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京102206 北京生物制品研究所有限责任公司北京101100

目的通过对三个非复制型痘苗病毒修饰株的细胞生物学特性及小鼠体内毒力对比研究,为天花/猴痘疫苗替代产品的研制提供参考依据。方法在BHK-21/CEF中对复制型痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)和复制缺陷型痘苗天坛株(n... 详细信息

目的通过对三个非复制型痘苗病毒修饰株的细胞生物学特性及小鼠体内毒力对比研究,为天花/猴痘疫苗替代产品的研制提供参考依据。方法在BHK-21/CEF中对复制型痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)和复制缺陷型痘苗天坛株(non-replicating Tiantan Vaccinia virus strain,NTV)及其修饰株NTV-C7L、NTV-△F1L-C7L、NTV-K1L进行扩增纯化及Western blot鉴定后,采用免疫噬斑实验对各病毒株在细胞中的毒力和扩散能力进行评价;通过复制动力学曲线比较各毒株之间的复制差异,采用小鼠滴鼻实验进行体重变化观察,比较病毒的毒力水平。结果Western blot结果证明扩增纯化的痘苗病毒各毒株均正确。免疫噬斑及复制动力学曲线表明三株NTV基因修饰株在CEF中的复制能力与NTV相近;在Vero细胞间的扩散能力和复制能力均有所提高,但复制倍数都小于100倍;在MRC-5中复制水平与NTV相比得到明显增强,其中NTV-C7L的复制倍数达20000倍以上;小鼠体内毒力结果显示三个NTV基因修饰株与NTV相比体重变化无统计学意义。结论三个NTV基因修饰株在人源性细胞MRC-5中恢复了复制能力,但在小鼠中的毒力与NTV相近,具备了作为天花/猴痘疫苗换代产品候选株的初步条件。

关键词：痘苗病毒复制缺陷天花/猴痘毒力疫苗

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通用引物高通量测序扩增GⅡ.4 Sydney[P31]型诺如病毒基因组及进化分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第1期36卷 15-20页

作者：朱曦王鹏飞闫玉晓章青李慧莹靳淼段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 上海吉玛制药技术有限公司上海201203 兰州大学第一临床医学院上海730000

目的分析2017至2020年我国诺如病毒流行株GⅡ.4 Sydney[P31]基因型的基因组以及变异情况。方法利用通用引物初步建立GⅡ组诺如病毒基因组扩增方法,扩增GⅡ.4 Sydney[P31]株基因组,并应用高通量测序技术对其基因组测序,对GⅡ.4 Sydney[P... 详细信息

目的分析2017至2020年我国诺如病毒流行株GⅡ.4 Sydney[P31]基因型的基因组以及变异情况。方法利用通用引物初步建立GⅡ组诺如病毒基因组扩增方法,扩增GⅡ.4 Sydney[P31]株基因组,并应用高通量测序技术对其基因组测序,对GⅡ.4 Sydney[P31]株进行系统进化分析和关键位点分析。结果利用初步建立的GⅡ组基因组扩增方法,8株GⅡ.4 Sydney[P31]株中,6株扩增成功并获得基因组序列。通过系统进化分析表明,本研究获得的自2017—2020年6株毒株和2015—2019年的GⅡ.4 Sydney[P31]参考株划为一簇,2013年我国毒株GZ20133135株与2012—2014年GⅡ.4 Sydney[P31]参考株划为一簇。血型抗原受体结合位点(HBGAs)分析表明2014年以后的毒株在SiteⅡ发生了氨基酸突变Asp372Asn。通过抗原表位分析,2017年以后的毒株,在A表位(297、372和373)、B表位(333)、E表位(414)和H表位(309、310)都发生了变化;2020年的毒株20HN261和20HN253株在A表位(368)和G表位(355)较之前的毒株出现了新变化。结论本研究确定了我国流行株GⅡ.4 Sydney[P31]基因组关键位点变异情况,跟踪新毒株的出现提供了科学依据,为针对我国流行株疫苗研发设计提供了基础数据。

关键词：诺如病毒基因组系统进化分析

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人呼吸道合胞病毒F-Fc蛋白不同免疫方案对小鼠免疫效果的比较

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病毒学报 2023年第3期39卷 681-690页

作者：任虎李海曹蕾张燕胡宏俏黄星湖李海鑫张丽许文波刘宏图国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 安徽理工大学医学院淮南232001 山东第一医科大学泰安271000

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,hRSV)是全球婴幼儿和老年人严重呼吸道疾病的主要原因。hRSV感染主要局限于呼吸道,当鼻黏膜中特异性IgA抗体滴度较低时容易引起hRSV反复感染,理想的hRSV疫苗应诱导全身免疫应答,尤... 详细信息

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,hRSV)是全球婴幼儿和老年人严重呼吸道疾病的主要原因。hRSV感染主要局限于呼吸道,当鼻黏膜中特异性IgA抗体滴度较低时容易引起hRSV反复感染,理想的hRSV疫苗应诱导全身免疫应答,尤其是黏膜免疫。本研究应用CHO细胞表达融合蛋白F-Fc(含有hRSV F蛋白和人IgG1抗体的Fc片段),F-Fc蛋白结合CpG佐剂两次免疫小鼠,比较滴鼻免疫(Intranasal,in)和肌肉注射(Intramuscular,im)免疫安全性和有效性的差异。与佐剂对照组(CpG)相比,四种免疫方式(CpG+F-Fc/in+im,CpG+F-Fc/im+in,CpG+F-Fc/im+im和CpG+F-Fc/in+in)均能诱导高滴度中和抗体,高水平及Th1偏向的细胞免疫应答,减少肺脏病毒的滴度,但是两次滴鼻免疫组小鼠效果是最好的。同时,两次滴鼻免疫组小鼠诱导的IgA抗体最多,小鼠体重恢复速度最快,并且可以显著降低肺脏病理损伤。综上所述,在以上四种免疫方案中,两次滴鼻免疫诱导产生的免疫效果最优。

关键词：人呼吸道合胞病毒免疫途径安全性有效性

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柯萨奇病毒A10型对利巴韦林耐药性的初步研究

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病毒学报 2024年第2期40卷 337-345页

作者：孙甜甜宗彦君王蕊李冀琛刘莹李晓亮韩振志于力恒刘志军孙强张勇潍坊医学院潍坊261053 传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 国家脊髓灰质炎实验室国家卫生健康委员会实验室生物安全重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 山东第一医科大学济南250117 首都儿科研究所病毒学研究室儿童病毒病病原学北京市重点实验室北京100020

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CV... 详细信息

近年来,全国范围内手足口病(Hand, foot, and mouth disease,HFMD)的感染率逐渐上升,其中柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)是主要病原体之一,利巴韦林是临床上治疗儿童手足口病的常用药物之一。为了评价利巴韦林在体外对CVA10的抑制效果,本研究中,我们随机选取了19条2009-2021年的不同地区和不同年代的有代表性的中国内地优势流行基因型C基因型的CVA10毒株,通过细胞毒性实验(Cell counting kit-8,CCK8)来检测利巴韦林在RD细胞上对CVA10的抑制率。将抑制率大于85%的CVA10定义为对利巴韦林敏感组,抑制率小于15%的CVA10定义为对利巴韦林耐药组。结果显示利巴韦林在0.78mmol/L浓度下可以对CVA10产生较好的抑制作用并且对细胞的毒性较低。19株CVA10中有4株表现出对利巴韦林耐药性,2株表现出对利巴韦林敏感性,剩余13株的敏感性在85%~15%之间。通过7日龄ICR乳鼠感染实验比较对利巴韦林敏感组和耐药组毒株的致病力差异,通过观察乳鼠临床评分、生存率、体重及组织取材的滴度测定结果均表明对利巴韦林敏感组CVA10在小鼠上的致病力比耐药组强。进一步使用MEGA 7.0软件对影响CVA10复制和翻译的2C区氨基酸序列进行差异性分析,以分析可能的耐药位点。结果显示对利巴韦林耐药组和敏感组CVA10的2C区的327位和328位氨基酸位点存在差异。本研究发现当前国内流行的CVA10存在广泛对利巴韦林耐药现象,其中部分CVA10对利巴韦林完全耐药。因此,有必要加强对CVA10耐药株的监测,以便更好地指导临床医生正确地选择抗病毒药物,为个体化的治疗提供理论依据。

关键词：柯萨奇病毒A10型利巴韦林耐药性 2C区差异位点

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新型冠状病毒T细胞表位多肽不同免疫途径及佐剂对免疫应答的影响及长效免疫研究

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病毒学报 2023年第3期39卷 631-643页

作者：宋洋胡宏俏郭宏时雨晴黄星湖赵建楠江洁曹蕾张勇张燕许文波国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206

很多研究表明T细胞免疫在抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染和预防重症死亡中起到关键作用。T细胞识别由抗原递呈细胞(Antigen-Presenting Cell,APC)递呈的与主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)结合的短肽,因此... 详细信息

很多研究表明T细胞免疫在抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染和预防重症死亡中起到关键作用。T细胞识别由抗原递呈细胞(Antigen-Presenting Cell,APC)递呈的与主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)结合的短肽,因此新冠T细胞多肽疫苗成为研究重点之一。本研究利用三条C57BL/6J小鼠MHC II类分子限制性的新冠T细胞表位多肽分别结合目前已经在临床上市使用的佐剂:铝佐剂,5’cytosine-phosphateguanine 3’oligonucleotide(CpG-OND,以下简称CpG)佐剂以及铝加CpG佐剂制备成小鼠新冠T细胞多肽疫苗,通过皮下、肌肉、滴鼻(CpG佐剂组别)三种给药方式两次免疫C57BL/6J小鼠,在二免后14 d和6个月(CpG佐剂组别)后利用荧光免疫斑点实验(FluoroSpot)评价疫苗刺激小鼠脾脏淋巴细胞产生的辅助型T细胞1(T helper 1 cell,Th1)应答细胞因子—干扰素γ(Interferon-γ, IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor α, TNF-α)和白细胞介素2(Interleukin 2, IL-2)以及Th2应答细胞因子—IL-4、IL-10和IL-5的水平情况。实验结果显示,不管使用哪种佐剂,皮下免疫产生了更好的效果;皮下和肌肉免疫使用CpG佐剂产生的细胞因子水平良好但应答水平较AL加CpG佐剂比更向Th1极化,而滴鼻免疫的Th1/Th2应答水平更为平衡。结合AL加CpG佐剂的皮下免疫组小鼠分泌了高水平且Th1/2平衡的细胞因子。结合CpG佐剂的小鼠二免后6个月IFN-γ分泌水平降低,但仍能产生较多的斑点,且滴鼻免疫组小鼠IFN-γ并没有出现显著降低。本研究结果提示T细胞多肽疫苗结合AL加CpG佐剂通过皮下免疫途径产生更好的细胞免疫应答,结合单独CpG佐剂的滴鼻免疫方式同样产生了较好的T细胞免疫应答和长效T细胞免疫,二者同时也维持了良好的Th1/Th2应答平衡。本研究对新冠T细胞多肽进行了免疫途径和佐剂的条件摸索,具有一定参考价值。

关键词：新型冠状病毒细胞免疫多肽免疫途径 CpG佐剂长效免疫

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