检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2022年第4期36卷 397-401页

作者：麻粉莲雒晓艺王超宋敬东谢志萍丛姗姗黄益曼郑丽舒中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室北京100052 中国医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室沈阳110122

目的利用HIV慢病毒包装系统构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)原始株614D和突变株614G假病毒,并初步研究其生物学特性。方法将重组表达质粒pCDNA3.1-614D和pCDNA3.1-614G分别与慢病毒质粒psPAX2和pLenti CMV Puro LUC瞬时共转染293T细胞,72 h后收集上清,进行20%蔗糖垫层超速离心,检测假病毒的滴度、形态、S蛋白表达和中和活性。结果间接免疫荧光检测可见S蛋白特异性荧光,Western blot分析可见2019-nCoV 614D和614G假病毒S蛋白表达,透射电镜下可见假病毒颗粒具有明显刺突。614D和614G假病毒的滴度分别为1.12×10^(4)和2.52×10^(4) TCID_(50)/ml,均能够中和S蛋白兔多克隆抗体,表明假病毒具有特异性。结论本研究成功构建了2019-nCoV 614D和614G假病毒,为建立基于假病毒的体外中和抗体检测平台奠定基础。

关键词：新型冠状病毒假病毒中和活性

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人呼吸道合胞病毒F蛋白在大肠杆菌中的表达与免疫效果研究

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病毒学报 2020年第4期36卷 634-642页

作者：李海曹蕾任虎张燕许文波国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206 中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430000

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,hRSV)是婴幼儿和老年人发生严重呼吸道疾病的主要病因,自上世纪50年代hRSV被发现以来,科学家对hRSV疫苗进行了大量的实验探索,但至今没有上市的疫苗。本研究应用pET32a质粒在大肠杆... 详细信息

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,hRSV)是婴幼儿和老年人发生严重呼吸道疾病的主要病因,自上世纪50年代hRSV被发现以来,科学家对hRSV疫苗进行了大量的实验探索,但至今没有上市的疫苗。本研究应用pET32a质粒在大肠杆菌BL21中表达并纯化了hRSV F蛋白(RBF),透射电镜下RBF以三聚体的形式存在(长约20 nm的棒状结构),与5C4抗体(识别抗原表位Ø)亲和常数为1.26×10−9。混合铝佐剂肌肉注射免疫BALB/c小鼠,不同剂量(2.5μg、5μg和10μg)的RBF蛋白免疫效果无显著差异(P>0.05),均能诱导小鼠产生高滴度的中和抗体(滴度可达27),并且可以显著降低肺脏病毒滴度,减少肺脏的病理损伤(P<0.001)。与福尔马林灭活疫苗(FI-RSV)相比,RBF诱导产生偏向Th1类的细胞和体液免疫应答。RBF在动物实验中显示出良好的保护效果,同时原核表达系统具有产量和成本上的优势,因此可以作为预防人感染hRSV的潜在候选疫苗。

关键词：人呼吸道合胞病毒(hRSV) 大肠杆菌 F蛋白免疫效果

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2018年中国麻疹风疹疑似病例的实验室检测和监测

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病毒学报 2020年第1期36卷 20-25页

作者：胡满丽张燕王慧玲朱贞毛乃颖崔爱利许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206 中国科学院生物安全大科学研究中心武汉430071

2018年中国麻疹发病达到历史最低,多个省份已经达到<1/100万临近消除状态。为评估在麻疹低发病情况下,中国麻疹风疹实验室网络(Measles/rubella laboratory network,MRLN)检测的敏感性、准确性和及时性,本文对2018年中国麻疹监测系统... 详细信息

2018年中国麻疹发病达到历史最低,多个省份已经达到<1/100万临近消除状态。为评估在麻疹低发病情况下,中国麻疹风疹实验室网络(Measles/rubella laboratory network,MRLN)检测的敏感性、准确性和及时性,本文对2018年中国麻疹监测系统(Measles surveillance system,MSS)中的检测和监测数据和国家麻疹风疹实验室(National measles/rubella laboratory,NMRL)病毒学监测数据库进行了分析。结果显示,2018年全国麻疹风疹监测共报告38 634例病例,其中散发病例36 340例,散发病例的血清和病原学标本采集率分别为98.75%、58.53%。麻疹、风疹IgM检测阳性率分别为10.51%(3892/37036)、8.85%(3243/36653)。麻疹、风疹病毒核酸检测阳性率分别为7.55%(1444/19116)、7.82%(1478/18905)。NMRL病毒学监测数据库显示:2018年共从23个省分离到301株麻疹病毒,其中13株为D8基因型,3株为B3基因型,14株为A基因型,271株H1基因型;从14个省共分离358株风疹病毒,其中1E基因型265株,2B基因型93株。2018年NMRL和省级地市级实验室分别接受了WHO和国家实验室针对血清学和分子检测的盲样考核,各实验室均顺利通过了考核。综上表明,2018年中国MRLN维持高水平运转,为麻疹、风疹消除提供有效的实验室科技支撑。

关键词：麻疹风疹实验室网络(MRLN) 麻疹监测系统(MSS) 病毒学监测血清学检测核酸检测质量控制

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中国脊髓灰质炎实验室网络开展细胞系支原体检测及现状分析

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中国疫苗和免疫 2017年第1期23卷 8-12页

作者：王东艳祝双利张勇严冬梅朱晖李晓嫘宋洋黄克强许文波中国疾病控制中心病毒病预防控制所国家卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206

目的通过对中国脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(China Polio Laboratory Network,CPLN)开展细胞系支原体检测(Cell mycoplasma detection,CMD),评价CMD在细胞质量控制中的作用,探讨其与脊灰病毒分离率的联系。方法采用巢式聚合酶链反应(Nes... 详细信息

目的通过对中国脊髓灰质炎(脊灰)实验室网络(China Polio Laboratory Network,CPLN)开展细胞系支原体检测(Cell mycoplasma detection,CMD),评价CMD在细胞质量控制中的作用,探讨其与脊灰病毒分离率的联系。方法采用巢式聚合酶链反应(Nested polymerase chain reaction,n PCR)法对CPLN常规使用的RD、L20B细胞系进行支原体检测。结果 2013年8月至2016年8月,在CPLN中除西藏外的30个省级脊灰实验室已正式开展CMD,并按时向国家脊灰实验室上报结果。CMD结果显示,30个省级脊灰实验室所用的每个批次的L20 B和RD细胞,支原体检测结果均为阴性。结论三年间CPLN 30个省级脊灰实验室用于脊灰病毒分离的细胞系均未出现支原体污染,细胞系质量正常且稳定;CMD作为CPLN细胞质量控制的重要组成部分,为CPLN运转质量提供可靠的数据支撑。

关键词：脊髓灰质炎实验室网络细胞系支原体检测细胞质量控制

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人星状病毒、肠道腺病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

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病毒学报 2020年第5期36卷 855-864页

作者：毛彤瑶刘诗琪裴银辉王萌璇章青王宏孔翔羽李慧莹张佳艳段招军李丹地华北理工大学基础医学院唐山063210 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 广西科技大学鹿山学院柳州545616

人星状病毒(Human astrovirus,HAstV)、肠道腺病毒(Enteric adenovirus,EAdV)是引起急性胃肠炎的两种常见病原体,目前尚未实现这两种病原体荧光定量RT-PCR的单管双重检测。为建立一种灵敏特异的双重荧光定量RT-PCR检测方法并应用于实验... 详细信息

人星状病毒(Human astrovirus,HAstV)、肠道腺病毒(Enteric adenovirus,EAdV)是引起急性胃肠炎的两种常见病原体,目前尚未实现这两种病原体荧光定量RT-PCR的单管双重检测。为建立一种灵敏特异的双重荧光定量RT-PCR检测方法并应用于实验室样本检测,本研究选择HAstV、EAdV特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并对该方法的灵敏性、特异性和稳定性进行评价。结果显示,该方法针对HAstV和EAdV的检出限分别可以达到522拷贝/μL和53.5拷贝/μL;与多种常见和罕见的人腹泻病毒没有交叉反应;批内和批间等重复性实验变异系数均小于5%;灵敏度高于常规PCR。本研究提示,建立的HAstV、EAdV双重荧光定量RT-PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,可用于实验室HAstV和EAdV的快速筛查。

关键词：人星状病毒(HAstV) 肠道腺病毒(EAdV) 急性胃肠炎荧光定量RT-PCR

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天津首例输入性人感染H7N9禽流感病例病原特征分析

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中华预防医学杂志 2017年第7期51卷 647-649页

作者：李晓燕李希妍孔梅徐文体郭丽茹邹明苏旭董晓春周鹏辉天津市疾病预防控制中心病原生物实验室 300011 中国疾病预防控制中心病毒病所国家流感中心卫生和计划生育委员会医学病毒和病毒病重点实验室

2013年3月,上海、安徽发生了急性下呼吸道感染,标本经中国疾病预防控制中心鉴定,确认病原为新型H7N9禽流感病毒[1].截至2016年12月11日,共报告人感染H7N9禽流感实验室确诊病例810例,死亡324例,病死率为40%[2],大部分病例发生于我国华南... 详细信息

2013年3月,上海、安徽发生了急性下呼吸道感染,标本经中国疾病预防控制中心鉴定,确认病原为新型H7N9禽流感病毒[1].截至2016年12月11日,共报告人感染H7N9禽流感实验室确诊病例810例,死亡324例,病死率为40%[2],大部分病例发生于我国华南及华东,以及台湾、香港等地区.天津位于我国华北地区,截至2016年6月11日,未报道过人感染H7N9禽流感病例.本研究对天津首例输入性人感染H7N9禽流感病例病原特征进行了分析,以期为疫情防控提供依据.

关键词：禽流感基因组,病毒突变

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轮状病毒感染患者外周血单个核细胞的转录组学分析

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病毒学报 2022年第1期38卷 139-148页

作者：李伯阳赵艳玲田玉玲李慧莹章青李丹地孙利伟庞立丽裴银辉段招军华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 长春市儿童医院长春130021 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1619个DEGs;重症患者PBMC中有2816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。

关键词：轮状病毒(RV) 外周血单个核细胞(PBMC) RNA-Seq 差异表达基因(DEGs) 免疫反应

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2001-2017年中国流行性腮腺炎病毒学监测及基因特征分析

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中国疫苗和免疫 2018年第3期24卷 249-255页

作者：崔爱利朱贞张燕邱琪毛乃颖许松涛姬奕昕王慧玲许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生和计划生育委员会医学病毒学和病毒病重点实验室世界卫生组织西太平洋区麻疹/风疹参比实验室

目的阐明中国大陆地区流行性腮腺炎（流腮）病毒学监测进展及腮腺炎病毒（MuV）基因特征。方法依托全国麻疹/风疹实验室网络,自2001年起在全国范围内开展流腮病毒学监测。通过病毒分离、Real-time RT-PCR和RT-PCR等方法对MuV进行实验室... 详细信息

目的阐明中国大陆地区流行性腮腺炎（流腮）病毒学监测进展及腮腺炎病毒（MuV）基因特征。方法依托全国麻疹/风疹实验室网络,自2001年起在全国范围内开展流腮病毒学监测。通过病毒分离、Real-time RT-PCR和RT-PCR等方法对MuV进行实验室检测和病毒基因型别鉴定;依据SH靶基因316个核苷酸序列,分析中国大陆地区MuV基因型别及其分布特征。结果 2001-2017年从中国22个省份共获得MuV SH基因序列451条,通过MuV基因型鉴定,439条（97.33%）为F基因型,12条（2.67%）为G基因型;2001-2017年有多个MuV F基因型分支共循环;G基因型于2011-2016年在局部地区流行。结论中国大陆地区MuV优势流行株为F基因型,G基因型呈局部流行;需加强流腮的持续性病毒学监测。

关键词：腮腺炎病毒病毒学监测基因型

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人B组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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病毒学报 2020年第6期36卷 1092-1100页

作者：毛彤瑶李金松王萌璇刘诗琪孙晓曼庞立丽张佳艳裴银辉段招军李丹地华北理工大学基础医学院唐山063210 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 广西科技大学鹿山学院柳州545616

人B组轮状病毒曾在我国发生过散发和暴发流行,近年来在世界多个国家也均有报道。为建立一种灵敏和特异的人B组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对人B组轮状病毒NSP3片段保守区设计和筛选特异性引物和探针,优化反应体系和反应条... 详细信息

人B组轮状病毒曾在我国发生过散发和暴发流行,近年来在世界多个国家也均有报道。为建立一种灵敏和特异的人B组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对人B组轮状病毒NSP3片段保守区设计和筛选特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并对该方法的灵敏性、特异性、稳定性进行评价。结果显示,该方法针对人B组轮状病毒检出限可以达到6.28拷贝/μL;与多种常见和罕见的人腹泻病毒没有交叉反应;批内和批间等重复性试验变异系数均小于5%。本研究建立的人B组轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、稳定性好、检出率高,可作为一种新的技术手段应用于人B组轮状病毒的快速筛查与诊断。

关键词：人B组轮状病毒荧光定量RT-PCR 疾病防控

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利用反向遗传技术产生表达外源基因的重组SA11轮状病毒

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中国人兽共患病学报 2024年第2期40卷 140-146页

作者：柴萨萨蔡昊刘夏飞赵静宋敬东李金松裴银辉李利利段招军华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山063000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增... 详细信息

目的利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体。方法本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因,采用已建立的“12质粒”轮状病毒反向遗传系统拯救NSP1基因插入和表达EGFP的重组SA11轮状病毒。通过观察细胞病变效应和插入基因(EGFP)的荧光表达初步确定重组病毒的成功拯救,再结合电镜的形态学观察、RT-PCR的测序结果及病毒基因组的检测结果,进一步证明重组轮状病毒的成功拯救和传代扩增。利用TCID 50法和qRT-PCR法,测定了rSA11和rSA11/NSP1-EGFP的病毒滴度并绘制了基因组复制动力曲线。结果基于“12质粒系统”成功拯救了重组轮状病毒rSA11/NSP1-EGFP,证明NSP1片段截短并插入外源基因后病毒仍可正常复制,且具有良好的遗传稳定性,但病毒滴度低于其亲本株。结论基于NSP1基因插入和表达EGFP的重组轮状病毒能够实现稳定遗传,为利用反向遗传学构建表达外源基因的轮状病毒载体的深入探索提供了基础。

关键词： A组轮状病毒反向遗传外源基因 NSP1基因

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