检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2025年第2期41卷 437-445页

作者：李润茁程莉侯文哲郭小娟黄文荣鲁茁壮中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 中国人民解放军总医院第五医学中心血液病医学部北京100039

第三代腺病毒载体较第一、第二代具有优势,本研究拟建立一种第三代腺病毒载体靶向性改造的技术方案。扩增纯化辅助病毒H14,制备其基因组DNA;PCR扩增含有质粒骨架的DNA片段,二者通过Gibson组装得到含有H14基因组的质粒pKH14。再利用前期... 详细信息

第三代腺病毒载体较第一、第二代具有优势,本研究拟建立一种第三代腺病毒载体靶向性改造的技术方案。扩增纯化辅助病毒H14,制备其基因组DNA;PCR扩增含有质粒骨架的DNA片段,二者通过Gibson组装得到含有H14基因组的质粒pKH14。再利用前期建立的限制性酶切-组装(Restriction-assembly)方法,将pKH14质粒中的人5型腺病毒(HAdV-5)fiber knob编码序列替换为禽1型腺病毒CELO的fiber1对应序列,得到腺病毒质粒pKH14-CF1K。PacI酶切线性化pKH14-CF1K,转染293细胞,拯救、扩增并纯化新的辅助病毒H14-CF1K。PacI酶切线性化第三代腺病毒载体质粒pK4HSU-GFP,转染293Cre4细胞,在转染后5 h,添加H14-CF1K辅助病毒,拯救获得第三代腺病毒载体CF1K-GFP。利用H14-CF1K辅助病毒和293Cre4包装细胞,传代扩增CF1K-GFP,采用氯化铯密度梯度离心法进行纯化。对纯化的CF1K-GFP进行了鉴定,并检测了其对禽LMH细胞和人293细胞的基因转导能力。本研究建立了第三代腺病毒载体靶向性改造的技术平台,并获得能够有效转导禽LMH细胞的第三代腺病毒载体。

关键词：第三代腺病毒载体 Gibson DNA组装病毒拯救

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人呼吸道合胞病毒感染性克隆构建及其验证

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病毒学报 2023年第2期39卷 334-343页

作者：宋晶晶毛乃颖李海朱武洋许文波张燕国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋地区麻疹/风疹参比实验室北京102206

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起全球婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体。本研究旨在建立HRSV原型株Long毒株的反向遗传操作系统。通过利用细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)为... 详细信息

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起全球婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原体。本研究旨在建立HRSV原型株Long毒株的反向遗传操作系统。通过利用细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)为载体骨架构建HRSV的Long毒株全长质粒(Long-BAC),以pcDNA3.1为载体构建分别表达HRSV N、P、M2-1和L蛋白(pcDNA3.1-N,pcDNA3.1-P,pcDNA3.1-M2-1和pcDNA3.1-L)的四个辅助质粒,将五个质粒共转染于表达T7 RNA聚合酶的BSR T7/9细胞系进行病毒拯救。采用间接免疫荧光(Immune fluorescence assay,IFA)和测序方法对拯救的病毒进行鉴定,并评价其在细胞和动物水平的生物学特征。本研究首次成功构建以BAC载体为骨架的HRSV原型株Long感染性克隆,拯救的病毒在不同代数测序结果显示无突变,能够稳定传代,病毒滴度为3×106 PFU/mL;与实验室保存野生型Long株(Long-WT)相比具有相似的细胞生长动力学特性,在12~36h病毒呈指数增长,在36h复制达到最高峰;在感染小鼠后能引起明显的肺部病理变化以及炎性相关细胞因子升高。本研究建立了高效、稳定的HRSV反向遗传学系统,为我国HRSV致病机制研究、疫苗和抗体药物研发提供技术平台。

关键词：人呼吸道合胞病毒反向遗传学负链RNA病毒

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免疫芯片检测技术应用研究进展

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病毒学报 2024年第4期40卷 869-876页

作者：向钰洁马学军申辛欣中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室.国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

免疫芯片(Immune chips)是一种特殊的蛋白质芯片,该技术本质上是将抗原-抗体结合反应的特异性与电子芯片高密度集成的原理相结合,形成了一种新型的生物检测技术,具有高灵敏度、操作简便、反应速度快等优势。随着科学技术的进步和创新,... 详细信息

免疫芯片(Immune chips)是一种特殊的蛋白质芯片,该技术本质上是将抗原-抗体结合反应的特异性与电子芯片高密度集成的原理相结合,形成了一种新型的生物检测技术,具有高灵敏度、操作简便、反应速度快等优势。随着科学技术的进步和创新,免疫芯片技术正在不断突破原有的局限,向着更高的灵敏度、更宽的检测范围、更快的检测速度和更低的成本方向发展,成为检测领域强有力的工具。本文综述了几类免疫芯片的基本原理和技术特点,主要分析了其在病毒、细菌、疾病标志物、真菌、寄生虫等检测中的应用。

关键词：免疫芯片微流控液相芯片非核酸物质即时检测

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重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 497-505页

作者：石艺柴鹏弟段招军章青孔翔羽王宏庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守... 详细信息

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。

关键词：腺病毒载体呼吸道合胞病毒 G蛋白中央保守域疫苗

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2011—2021年云南省风疹病毒分子流行病学研究

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中华预防医学杂志 2023年第8期57卷 1194-1198页

作者：李立群李江嵘余文张杰何丽芳龚琼宇周榕溶朱贞云南省疾病预防控制中心昆明650022 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的了解云南省流行风疹病毒(RuV)基因型分布及传播模式。方法采集云南省2011—2021年9个州/地级市的风疹暴发和散发病例的咽拭子标本,对RuV阳性标本进行病毒分离、靶基因的扩增和序列测定,并与基因型和亚型参考株进行比对确定基因型别... 详细信息

目的了解云南省流行风疹病毒(RuV)基因型分布及传播模式。方法采集云南省2011—2021年9个州/地级市的风疹暴发和散发病例的咽拭子标本,对RuV阳性标本进行病毒分离、靶基因的扩增和序列测定,并与基因型和亚型参考株进行比对确定基因型别,同时与同期我国其他省份流行的RuV病毒株进行系统发育分析。结果2011—2021年间在云南省流行的RuV呈现明显的基因多样性,监测到1E-L1、2B-L1和1E-L2三种基因亚型;发现RuV发生两次基因亚型转换,包括2012—2013年间1E-L1至2B-L1基因亚型流行的转换,以及2018年后2B-L1至1E-L2基因亚型的替换,两次基因亚型转换的时间与云南省2012年以及2018—2019年间风疹暴发流行的时间基本吻合;RuV病毒株氨基酸序列水平高度保守,重要功能区域均未发生改变。结论云南省RuV的传播模式与全国各省流行趋势基本一致。

关键词：风疹病毒分子流行病学基因亚型更替

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引起2017年兰州市一起疱疹性咽峡炎暴发疫情的CV-A2的基因特征分析

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病毒学报 2024年第3期40卷 574-579页

作者：陈建华于德山武海卓赵哲赵晓虹张勇张晓曙甘肃省疾病预防控制中心甘肃省传染病病原学重点实验室兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室国家卫生健康委员会医学病毒学和病毒病重点实验室北京102206

为了解引起2017年10月甘肃省兰州市一起疱疹性咽峡炎(Herpangina,HA)暴发疫情的致病病原体及其病原学特征,对采集的患儿的37份咽拭子样本开展病毒分离培养,然后对分离到的毒株采取一代测序获取VP1区全长核苷酸序列,根据分子定型的方法... 详细信息

为了解引起2017年10月甘肃省兰州市一起疱疹性咽峡炎(Herpangina,HA)暴发疫情的致病病原体及其病原学特征,对采集的患儿的37份咽拭子样本开展病毒分离培养,然后对分离到的毒株采取一代测序获取VP1区全长核苷酸序列,根据分子定型的方法进行肠道病毒型别鉴定。根据VP1区核苷酸差异选择3个毒株进行二代测序,获取全基因组序列。使用MEGA软件(版本号11.0)进行病毒的核苷酸,氨基酸相似性分析,VP1区的氨基酸突变位点分析,并构建系统发育树,使用Simplot(版本号3.5.1)软件进行病毒重组分析。本次疫情中分离到的毒株鉴定为柯萨奇病毒A2型(Coxsackievirus A 2, CV-A2),分子分型显示属于D基因型,且VP1区第102位氨基酸发生了丙氨酸到甘氨酸(A102G)的突变,与省内2014-2015年分离到的两株CV-A2毒株在该位置的突变不同。重组分析发现,病毒在P2区和P3区发生了以CV-A4为主的重组事件。本次疫情的致病病原体CV-A2存在着VP1区氨基酸A102G的特征性变异及P2区和P3区的重组,需要加强对肠道病毒的变异和重组的监测和研究,以提升预警能力。

关键词：疱疹性咽峡炎柯萨奇病毒A2型基因组特征性突变重组变异分子流行病学

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优化SARS-CoV-2 S-EABR在293T细胞中的分泌性表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第5期38卷 489-496页

作者：姜苏芮毛彤瑶张鹏段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子... 详细信息

目的通过优化启动子、终止子、信号肽及胞内序列末端氨基酸来增加SARS-CoV-2 S-EABR蛋白在293T细胞系中的分泌性表达。方法首先构建四种含有不同元件(启动子和终止子)组合的PCDNA3.1(-)真核载体质粒(Mb、MS、Ab、AS),插入按照人密码子优化的S-EABR-1目的序列,瞬时转染293T细胞,48 h后收取细胞培养上清液和细胞裂解液,通过Western Blot和ELISA检测上清S蛋白的表达水平。然后选择表达最好的元件组合载体,插入S-EABR-1和S-EABR-2(于S-EABR-1尾部添加4个氨基酸——HSLP)目的序列,比较上清S蛋白的表达水平。最后基于上述表达效果最好的元件组合载体及插入目的序列,构建替换SARS-CoV-2 S蛋白原始信号肽的5种载体质粒(tPA,AZ,IFNα2,HSA,GLUC),比较上清S蛋白表达水平。同时利用计算机模拟SRP54亚基与信号肽核酸序列的分子对接,将对接分值(Docking Score)作为对接评价标准,预测两者的结合情况。结果在293T细胞中,Ab组合的载体分泌表达S-EABR水平最高,产量相较于Mb增加了125%。基于Ab组合载体,S-EABR-2序列表达分泌S-EABR的水平较S-EABR-1增加了约50%,进一步替换成HSA信号肽后的S-EABR表达分泌水平较S蛋白原始信号肽增加了约83%。此外,计算机模拟结果显示HSA与SRP54亚基的对接分值最高,为1505.861。结论通过真核表达元件(启动子、终止子和信号肽)及胞内序列的优化可进一步提高经密码子优化后的S-EABR在293T细胞中的分泌性表达。信号肽与SRP54亚基亲和力的计算模拟对接分值与S-EABR分泌表达水平基本吻合的结果也为后续提高目的基因分泌性表达的信号肽筛选提供了一种设计思路和筛选策略。

关键词：新型冠状病毒 S-EABR 启动子终止子信号肽信号识别颗粒

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人H组轮状病毒VP7蛋白表达及其多克隆抗体制备

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第6期38卷 702-708页

作者：刘晓钰赵颖张璐琦欧阳瑄泽章青李丹地李金松李利利孙晓曼段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH ... 详细信息

目的表达和纯化人H组轮状病毒(group H rotavirus,RVH)J19株的VP7蛋白,制备VP7的多克隆抗体(多抗)并对其多抗功能进行鉴定。方法通过杆状病毒系统表达RVH J19株的VP7蛋白,通过亲和层析和凝胶过滤层析方法进行蛋白纯化。将纯化得到的RVH J19株的VP7蛋白免疫兔子以制备VP7多抗血清,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)、免疫荧光荧光试验(Immunofluorescence,IF)等对VP7多抗血清进行鉴定。结果纯化得到可溶的J19 VP7蛋白;制备获得J19株VP7兔多抗;ELISA显示VP7多抗具有较好的结合效价,在稀释2048000倍时与人RVH VP7蛋白仍有结合;WB表明多抗能够结合J19 VP7蛋白;IF显示VP7多抗可以特异识别人H组轮状病毒J19株。结论本研究成功得到了人H组轮状病毒J19 VP7蛋白,制备的VP7多抗可以特异性识别人H组轮状病毒,为人H组轮状病毒的检测及病毒衣壳结构功能研究提供了基础。

关键词：人H组轮状病毒杆状病毒表达系统 VP7蛋白多克隆抗体

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重组病毒蛋白纳米颗粒治疗肺腺癌作用

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第4期38卷 402-408页

作者：周文亭邹烨宁沈立萍毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙... 详细信息

目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙肝核心蛋白(hepatitis B core protein,HBc)的主要免疫显性区域(Major Immunodominant region,MIR),利用大肠杆菌进行表达纯化后,得到重组蛋白纳米颗粒HBc-HER2。将此重组蛋白纳米颗粒免疫小鼠肺腺癌皮下瘤模型,通过检测其血清中HER-2抗体水平及抗体型别,评价此纳米颗粒免疫原性。通过小鼠皮下瘤大小变化评价肿瘤治疗效果。结果得到了纯度较高的HBc-HER2重组蛋白,且电镜观察显示其形成了HBc-HER2纳米颗粒,动物实验表明免疫原性强,能够诱导机体产生高滴度的针对HER-2的抗体,并有良好的肿瘤治疗作用。结论基因重组的HBc-HER2在小鼠肺腺癌皮下瘤模型中有明显的抑制肿瘤作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供了依据。

关键词：人类上皮细胞生长因子受体-2 乙肝核心蛋白病毒样颗粒肿瘤免疫治疗

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2011-2019年我国腹泻住院患儿中G1P型A组轮状病毒的流行病学和临床特征分析

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病毒学报 2023年第3期39卷 729-734页

作者：魏宇航孙晓曼彭蕊王萌璇李静欣庞立丽范佳欣李丹地段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

了解2011-2019年G1P[8]型A组轮状病毒(Group A rotavirus,RVA)在我国腹泻住院患儿中的流行病学和临床特征。收集2011年1月-2019年12月我国病毒性腹泻监测网络数据。监测网数据的采集和整理采用EpiData 3.0软件和Excel 2010,应用SPSS 26.... 详细信息

了解2011-2019年G1P[8]型A组轮状病毒(Group A rotavirus,RVA)在我国腹泻住院患儿中的流行病学和临床特征。收集2011年1月-2019年12月我国病毒性腹泻监测网络数据。监测网数据的采集和整理采用EpiData 3.0软件和Excel 2010,应用SPSS 26.0软件进行数据分析。2011-2019年共采集到我国5岁以下急性胃肠炎住院患儿标本共计47 386份,结果显示G1P[8]型RVA阳性率为1.98%(938/47 386),G1P[8]型RVA感染不具有明显的性别分布特征。G1P[8]型RVA的流行季节为秋冬季,夏季该基因型有小暴发的情况发生。G1P[8]型RVA住院患儿在腹泻严重程度(χ^(2)=0.177,P=0.915,P>0.05)与非G1P[8]型RVA住院患儿无明显差异,G1P[8]型RVA相对于非G1P[8]型RVA患儿在发热(χ^(2)=22.572,P=0,P<0.05)、皮疹、肺炎、败血症等并发症(χ^(2)=12.921,P=0,P<0.05)少且轻。2011-2019年我国G1P[8]型RVA流行趋势逐渐下降,季节高峰为秋冬季,夏季偶有暴发,G1P[8]型RVA发热等并发症较非G1P[8]型RVA轻。本研究为RVA疫苗候选毒株选择提供数据参考,为G1P[8]型RVA防控和治疗提供基础数据支持。

关键词： A组轮状病毒流行病学腹泻 G1P[8]

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