检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2024年第2期44卷 69-75页

作者：樊宇钦黎智康梁至轩赵紫涵谢秋玲暨南大学生命科学技术学院广州510632 基因工程药物国家工程研究中心广州510632

目的:酪氨酸羟化酶(TH)是多巴胺合成的限速酶,其对于帕金森病发生有着重要意义。外泌体是由细胞分泌的直径30~200 nm的微囊泡,被认为是可通过血脑屏障的潜在药物载体。拟利用古菌核糖体蛋白L7Ae和Kt环的结合特性,获得高效包载酪氨酸羟化... 详细信息

目的:酪氨酸羟化酶(TH)是多巴胺合成的限速酶,其对于帕金森病发生有着重要意义。外泌体是由细胞分泌的直径30~200 nm的微囊泡,被认为是可通过血脑屏障的潜在药物载体。拟利用古菌核糖体蛋白L7Ae和Kt环的结合特性,获得高效包载酪氨酸羟化酶mRNA的外泌体(TH-Kt-Exo),以实现mRNA药物穿越血脑屏障的递送。方法:通过构建带有Kt环的TH mRNA重组质粒,以及外泌体膜蛋白CD63和L7Ae融合表达的重组质粒pCMV-CD63-L7Ae-His,共转染HEK293F细胞,通过超速离心方法收取细胞分泌的外泌体,通过qPCR检测外泌体中TH mRNA的含量并转染受体细胞。结果:与单一酪氨酸羟化酶质粒转染得到的外泌体TH-Exo相比,利用该方法获得的外泌体TH-Kt-Exo在TH mRNA的装载水平上有显著提高。此外,该外泌体能够将其装载的mRNA转运至受体细胞中。结论:通过L7Ae和Kt环的特异性结合,可以有效提高目的mRNA在外泌体中的包载。

关键词：酪氨酸羟化酶外泌体古菌核糖体蛋白 Kt环

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表达外源蛋白的CHO-DG44细胞株的蛋白质组学研究

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华南理工大学学报（自然科学版） 2022年第11期50卷 74-81页

作者：谢秋玲谭楚敏王亚玉陈子鑫熊盛暨南大学生命科学技术学院广东广州510632 基因工程药物国家工程研究中心广东广州510632

为给细胞株基因工程改造提供背景条件,文中以TNFR-Fc为模式蛋白,比较两株不同来源的CHO-DG44细胞在生长代谢以及外源蛋白TNFR-Fc表达方面的差异,采用i TRAQ结合2D LC-MS/MS技术,比较CHO-DG44(A)/TNFR-Fc和CHO-DG44(B)/TNFR-Fc细胞株的... 详细信息

为给细胞株基因工程改造提供背景条件,文中以TNFR-Fc为模式蛋白,比较两株不同来源的CHO-DG44细胞在生长代谢以及外源蛋白TNFR-Fc表达方面的差异,采用i TRAQ结合2D LC-MS/MS技术,比较CHO-DG44(A)/TNFR-Fc和CHO-DG44(B)/TNFR-Fc细胞株的蛋白表达谱,并对差异蛋白进行了蛋白类型分析、差异基因GO富集分析和差异基因KEGG富集分析。结果表明:两株CHO细胞在生长代谢及外源蛋白表达方面存在一定的差异;通过对比蛋白表达谱发现的192种差异表达蛋白中,上调蛋白104个、下调蛋白88个;就蛋白类型而言,酶类所占的比例最多,达到38.02%;差异蛋白主要富集在包括蛋白质折叠、谷胱甘肽代谢过程、碳水化合物代谢过程、细胞内蛋白质转运、蛋白质稳定化等生物过程;差异蛋白主要涉及氨基酸的生物合成、碳代谢、糖酵解/糖异生、三羧酸循环等信号通路。不同CHO细胞株在氨基酸的生物合成、碳代谢、糖酵解/糖异生等方面的蛋白差异,可能是引起两株细胞生长代谢以及外源蛋白表达方面的差异的原因。

关键词： CHO细胞外源蛋白重组表达生长代谢蛋白质组学

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MFG-E8作为外泌体载体蛋白的作用与功能

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生物技术通报 2022年第4期38卷 288-294页

作者：黎智康刘晨雪璇谭楚敏熊盛谢秋玲暨南大学生命科学技术学院广州510632 基因工程药物国家工程研究中心广州510632

构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组... 详细信息

构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组质粒。之后PEI介导瞬转HEK293F细胞进行表达,利用EGFP的荧光,通过Western blot和激光共聚焦显微镜检测蛋白表达情况及其在胞内的位置。同时提取转染细胞分泌的外泌体,通过Western blot和电镜检测重组蛋白在外泌体中的情况。最后将含有重组蛋白的外泌体转染293T细胞,荧光显微镜观察外泌体将重组蛋白带入受体细胞中的情况。结果表明,成功构建MFG-E8全长及截短体重组质粒并在HEK293F细胞中表达,各重组蛋白在胞内均有表达,其中EGF-L表达量最高,C2最低,细胞上清中只能检测到EGF-L、C1、EC1的表达。转染细胞分泌的外泌体只检测到MFG-E8、EC1和C1C2三种蛋白。含有这3种蛋白的外泌体转染HEK293T细胞,3组细胞均有荧光,其中MFG-E8-EGFP的外泌体效果最好。MFG-E8能够作为蛋白载体将目的蛋白带到外泌体膜上,其C1、C2结构域对该过程至关重要,EGF-L的存在可以促进蛋白表达。

关键词：乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8) 截短体外泌体载体蛋白结构域功能

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主动靶向近红外二区诊疗一体化纳米颗粒用于三阴性乳腺癌的研究

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分析化学 2022年第6期50卷 912-923页

作者：邹志凤高晶来旖徐志爱华东师范大学化学与分子工程学院中国科学院上海药物研究所药物研究国家重点实验室/药物研究中心

供体-受体-供体（D-A-D）型荧光探针通常具有优异的光学稳定性和生物相容性。通过分子设计，D-A-D型分子的荧光发射可以到达近红外二区（NIR-Ⅱ），同时还具有光热转换性质，因此具有生物成像和光热治疗的潜力。但是，D-A-D型分子的分... 详细信息

供体-受体-供体（D-A-D）型荧光探针通常具有优异的光学稳定性和生物相容性。通过分子设计，D-A-D型分子的荧光发射可以到达近红外二区（NIR-Ⅱ），同时还具有光热转换性质，因此具有生物成像和光热治疗的潜力。但是，D-A-D型分子的分子量较大，水溶性差，严重限制了其在生物诊疗领域的应用。本研究设计了具有肿瘤主动靶向性的高分子聚合物（CRGDK-PEG-b-PLGA）用于负载D-A-D型荧光探针（TQTCD），从而提高了TQTCD探针的水溶性、肿瘤特异性和光热治疗效果，并实现了诊疗一体化。CRGDK-PEG-b-PLGA与TQTCD探针在水溶液中可自组装形成均一稳定的纳米颗粒（RPP@TQTCD），并且非共价负载不影响TQTCD探针的荧光特性和光热效应。在CRGDK靶向肽的作用下，RPP@TQTCD纳米颗粒可特异性蓄积于肿瘤部位，并作用于肿瘤细胞表面高表达的神经纤毛蛋白-1(NRP-1)受体，通过受体介导的途径促进肿瘤细胞对纳米颗粒的摄取，随后在808 nm激光照射下可有效杀伤肿瘤细胞。本研究通过对疏水性探针的靶向递送，为三阴性乳腺癌（TNBC）的诊断及光热治疗提供了一种有效的策略。

关键词：主动靶向近红外二区荧光光热治疗诊疗一体化三阴性乳腺癌

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一株海绵共附生青霉Penicillium sp.的次级代谢产物研究

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中草药 2024年第10期55卷 3223-3229页

作者：谢冬冬李嘉欣李培海尚如意刘可春林厚文焦伟华癌基因与相关基因国家重点实验室海洋药物研究中心上海交通大学医学院附属仁济医院上海200127 山东省斑马鱼人类疾病模型与药物筛选工程技术研究中心齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东济南250103

目的研究海绵共附生青霉Penicillium ***5975的化学成分。方法采用减压硅胶柱色谱、十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物通过高分辨-电喷雾-质谱(HRESI-MS)、核磁共振波谱... 详细信息

目的研究海绵共附生青霉Penicillium ***5975的化学成分。方法采用减压硅胶柱色谱、十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物通过高分辨-电喷雾-质谱(HRESI-MS)、核磁共振波谱(NMR)以及与文献比对等方法进行鉴定。对分离得到的化合物进行斑马鱼促血管生成活性评价。结果从Penicillium ***5975中分离纯化出9个生物碱类化合物,包括1个新的化合物,命名为青霉吲哚碱甲(1);以及8个已知化合物,分别为17-羟基短密青霉酰胺N(2)、苯并玛尔维碱A(3)、苯并玛尔维碱B(4)、苯并玛尔维碱C(5)、苯并玛尔维碱D(6)、苯并玛尔维碱E(7)、(−)-苯并玛尔维碱E(8)和N-甲基诺喔苯并玛尔维碱A(9)。化合物2和7在50µg/mL质量浓度下对斑马鱼节间血管的生长有促进作用。结论化合物1为新化合物,化合物2和9为青霉属内首分化合物,化合物2和7具有一定的促血管生成活性。

关键词：青霉生物碱青霉吲哚碱甲海洋天然产物促血管生成活性 17-羟基短密青霉酰胺N 苯并玛尔维碱E

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高光谱结合哈里斯鹰优化核极限学习机鉴别化橘红胎切片年份

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光谱学与光谱分析 2024年第5期44卷 1494-1500页

作者：谢百亨马晋芳周泳欣韩雪勤陈嘉泽朱思祁杨懋勋黄富荣暨南大学光电工程系广东广州510632 广东医科大学药学院广东天然药物研究与开发重点实验室广东东莞523808 国家中药现代化工程技术研究中心海洋中药分中心广东湛江524023

化橘红胎是药用历史悠久的广东省道地中药材,由于其制品收藏年份越久远价格越高,市面上常有以次充好的现象。为此,采用高光谱成像技术,结合哈里斯鹰优化核极限学习机对四组不同年份的化橘红胎切片样品进行鉴别。采集四个年份共193个化... 详细信息

化橘红胎是药用历史悠久的广东省道地中药材,由于其制品收藏年份越久远价格越高,市面上常有以次充好的现象。为此,采用高光谱成像技术,结合哈里斯鹰优化核极限学习机对四组不同年份的化橘红胎切片样品进行鉴别。采集四个年份共193个化橘红胎切片样本400~1000 nm的高光谱图像。首先采用主成分分析法(PCA)分析化橘红胎切片的原始反射光谱,然后分别采用Savitzky-Golay平滑(S-G平滑)、多元散射校正(MSC)、标准正态变量交换(SNV)对样本光谱进行预处理并建立核极限学习机(KELM)模型;发现经SNV处理的样本光谱的判别准确率最高,训练集达到99.24%,测试集95.56%;进一步用竞争性自适应重加权算法(CARS)、蒙特卡洛无信息变量消除法(MCUVE)对样本光谱进行特征波长的选择;最后,采用KELM建立判别模型,同时使用哈里斯鹰算法(HHO)优化KELM参数选择并比较建模效果。结果表明:基于HHO-KELM的判别效果相较KELM有0.76%~4.44%的提升,通过MCUVE筛选所得特征波段信息冗余明显减少且精度提升,训练集和测试集最佳准确率均可达100%,故采用高光谱成像技术可以实现对不同年份的化橘红胎切片进行无损鉴别。

关键词：化橘红胎高光谱成像特征波长核极限学习机

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新型温敏性重组人釉原蛋白载体与传统丙二醇藻酸酯载体的体外测试效外测试效果比较

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南方医科大学学报 2022年第9期42卷 1418-1425页

作者：江文豪钱垂文暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632 广东省基因工程药物重点实验室广东广州510632 基因药物国家工程研究中心广东广州510632

目的评价新型温敏性重组人釉原蛋白(rhAm)载体和传统丙二醇藻酸酯(PGA)载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm,2%的壳聚糖(CS)和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液(... 详细信息

目的评价新型温敏性重组人釉原蛋白(rhAm)载体和传统丙二醇藻酸酯(PGA)载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm,2%的壳聚糖(CS)和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液(βGP)作为交联剂制备CS-βGP-rhAm凝胶;表征通过检测黏度、凝固时间、pH值、溶胀率、体外生物降解率和缓释性能来评估;通过观察金黄色葡萄球菌生长状况比较材料的抗菌效果;生物相容性评估是在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)上利用CCK8检测各组细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-qPCR检测成骨基因mRNA表达,Westernblot检测蛋白的表达水平,碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化情况。结果PGA-rhAm具有黏度值3.262±0.055 Pa.s,CS-βGP-rhAm在37℃下具有6 min凝固成型能力、接近口腔环境的pH值、约90%的溶胀率,同时缓释rhAm可维持2周以上,自身降解时间维持3周以上。CS-βGP负载rhAm相比PGA负载rhAm更有效抑制金黄色葡萄球菌生长(P<0.001)。细胞水平上,CS-βGP是否负载rhAm都可促进细胞增殖(P<0.001),PGA促进细胞增殖效果不显著。划痕实验显示,CS-βGP和PGA负载rhAm后均可促进细胞迁移(P<0.01)。RT-qPCR和Westernblot结果显示,CS-βGP负载rhAm能促进RUNX2、OCN mRNA水平(P<0.001),上调Ki67(P<0.001)、RUNX2(P<0.001)、CollagenⅠ(P<0.01)、β-catenin(P<0.05)蛋白表达。PGA负载rhAm促进RUNX2(P<0.05)、OCN(P<0.01)mRNA水平表达,蛋白水平变化无统计学意义。CS-βGP组ALP染色蓝紫色颗粒数增加,PGA组无明显变化。结论CS-βGP具有能缓释rhAm的性能,同时相比传统的PGA载体,CS-βGP具有温度成型的特点、抑制金黄色葡萄球菌生长的性能、显著提高hPDLFs的生物活性并且负载rhAm后不影响其生物活性。

关键词：重组人釉原蛋白壳聚糖丙二醇藻酸酯人牙周膜成纤维细胞

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海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus 162432次级代谢产物研究

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中草药 2023年第13期54卷 4104-4110页

作者：陈瑞强罗祥超林厚文焦伟华上海海洋大学食品学院上海201306 癌基因与相关基因国家重点实验室海洋药物研究中心上海交通大学医学院附属仁济医院上海200127

目的研究海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus162432的化学成分。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物采用HR-ESI-MS、NMR以及文献比对等方法进行鉴定,新化合... 详细信息

目的研究海绵共附生链霉菌Streptomyces parvulus162432的化学成分。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物采用HR-ESI-MS、NMR以及文献比对等方法进行鉴定,新化合物的绝对构型通过计算NMR和圆二色谱(ECD)确定。结果从菌株Streptomyces parvulus 162432中分离纯化了9个环二肽类化合物,包括1个新化合物链霉菌二肽A(1)和8个已知化合物:环-(D-顺式-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸)(2)、环-(D-脯氨酸-D-苯丙氨酸)(3)、环-(L-羟脯氨酸-L-亮氨酸)(4)、环-(L-羟脯氨酸-D-亮氨酸)(5)、环-(D-脯氨酸-L-亮氨酸)(6)、环-(L-脯氨酸-D-亮氨酸)(7)、环-(D-脯氨酸-L-异亮氨酸)(8)、环-(L-亮氨酸-D-缬氨酸)(9)。对分离得到的化合物1~9进行肿瘤细胞增殖细胞毒和抗菌活性评价,活性结果显示,化合物1~9在10μg/mL下对肿瘤细胞增殖均未显示出明显的细胞毒活性;化合物9对苏云金芽孢杆菌显示抑菌活性,最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为25μg/mL。结论化合物1为新化合物,化合物2和4~9为首次从链霉菌Streptomyces parvulus中分离得到,化合物9具有一定的抗菌活性。

关键词：海绵链霉菌Streptomyces parvulus 162432 链霉菌二肽A 环-(L-亮氨酸-D-缬氨酸) 海洋天然产物抗菌活性

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烟草生物碱性状的QTL定位

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作物学报 2024年第1期50卷 42-54页

作者：刘颖超方敦煌徐海明童治军肖炳光浙江大学农业与生物技术学院作物科学研究所浙江杭州310058 云南省烟草农业科学研究院国家烟草基因工程研究中心云南昆明650021

生物碱是烟草的重要化学成分。为明确烟草生物碱的遗传结构,发掘控制相关性状的主效位点,以烟草品种Y3、K326为亲本,构建大小为271的重组自交系群体。分别于2018、2019和2020年在云南省昆明市石林、玉溪市研和种植群体材料,检测总植物碱... 详细信息

生物碱是烟草的重要化学成分。为明确烟草生物碱的遗传结构,发掘控制相关性状的主效位点,以烟草品种Y3、K326为亲本,构建大小为271的重组自交系群体。分别于2018、2019和2020年在云南省昆明市石林、玉溪市研和种植群体材料,检测总植物碱(TPA)、烟碱(NIC)、降烟碱(NOR)、假木贼碱(ANAB)和新烟草碱(ANAT)5种生物碱表型。对群体进行基因组测序,构建包含46,129个标记的遗传连锁图谱。利用基于混合线性模型的QTL定位方法及软件QTLNetwork2.0,进行QTL定位分析。共定位15个具有显著加性效应的QTL,加性效应对表型贡献率为0.58%~11.57%。其中4个主效QTL即控制总植物碱的qTPA14、烟碱的qNIC14、假木贼碱的qANAB14和新烟草碱的qANAT14,均可以解释相应性状10%以上的表型变异,且均位于14号连锁群上。6个QTL具有显著的加性与环境互作效应,对表型贡献率为0.80%~1.81%。5对QTL具有显著加性-加性上位性效应,对表型的贡献率为0.15%~2.31%。2对QTL具有显著的上位性与环境互作效应,对表型的贡献率为0.81%~1.16%。研究结果为进一步分离候选基因、解析遗传机理和促进烟草生物碱性状分子改良奠定了基础。

关键词：烟草重组自交系生物碱复杂性状基因与环境互作

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烟草SnRK2基因家族的克隆及表达分析

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分子植物育种 2024年第12期22卷 3877-3884页

作者：白戈杨大海费明亮谢贺云南省烟草农业科学研究院烟草生物技术重点实验室国家烟草基因工程研究中心昆明650021

农作物生产过程中会面临多种非生物胁迫的影响,会极大地影响作物的产量以及品质。非生物胁迫形式多种多样,干旱胁迫是其中一种主要形式。烟草是重要的经济作物,主要在中国西南地区种植,但经常会遭受极端干旱胁迫。Sn RK2基因家族参与植... 详细信息

农作物生产过程中会面临多种非生物胁迫的影响,会极大地影响作物的产量以及品质。非生物胁迫形式多种多样,干旱胁迫是其中一种主要形式。烟草是重要的经济作物,主要在中国西南地区种植,但经常会遭受极端干旱胁迫。Sn RK2基因家族参与植物抗旱过程,能够受逆境胁迫诱导表达,这种表达是SnRK2基因家族功能的重要体现。为了进一步研究烟草SnRK2家族基因的功能,本研究克隆了烟草SnRK2基因家族GroupⅠ的基因,并检测了烟草SnRK2基因家族的组织表达特异性及诱导表达特异性。结果表明,烟草SnRK2基因中Ntab0922420基因的表达量最高,同时烟草SnRK2基因家族成员更容易在茎与叶中表达。烟草经过低温、盐、干旱胁迫以及ABA处理后,部分SnRK2基因成员表现出受胁迫诱导,其中ID为Ntab0894060的基因受干旱显著诱导。这些工作将为研究烟草SnRK2基因家族功能鉴定基础,并为培育抗逆烟草品种提供遗传资源。

关键词：烟草 SnRK2 表达分析

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