检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学会第十五次全国学术大会

作者：孙娜王陈黄晏周文霞张永祥军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室

目的研究芳香烃受体(AhR)对皮质酮所致长时程增强(LTP)损伤的影响。方法将体质量18～22 g雄性BALB/c小鼠分为对照组,模型组以及AhR激动剂及拮抗剂处理组,每组5只,应用在体LTP实验记录海马前穿通纤维-齿状回通路的LTP,以观察神经突触可... 详细信息

目的研究芳香烃受体(AhR)对皮质酮所致长时程增强(LTP)损伤的影响。方法将体质量18～22 g雄性BALB/c小鼠分为对照组,模型组以及AhR激动剂及拮抗剂处理组,每组5只,应用在体LTP实验记录海马前穿通纤维-齿状回通路的LTP,以观察神经突触可塑性的变化。其中模型组为皮下注射皮质酮(50 mg·kg-1),给药1 h后开始LTP实验,AhR激动剂及拮抗剂处理在给予皮质酮处理前30 min腹腔注射(50μg·kg-1)给药。结果与正常小鼠相比,模型组小鼠LTP显著降低(P<0.001),单独给予AhR激动剂或拮抗剂对小鼠海马LTP无影响;与模型小鼠相比,AhR激动剂组能使海马LTP显著升高(P<0.05),而AhR拮抗剂组则出现小鼠死亡的毒性反应。结论激动AhR对皮质酮所致的LTP损伤具有保护作用,而抑制AhR则会加重皮质酮导致的LTP损伤。

关键词： AhR 皮质酮 LTP

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万古霉素联合多黏菌素B用药对肾小管上皮细胞的作用

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临床药物治疗杂志 2021年第1期19卷 39-44页

作者：杜海燕卢静王基平谭莉刘文芳石秀锦林佰弟赵莉敏庄笑梅韩美灵林阳首都医科大学附属北京安贞医院药事部北京100029 莫纳什大学微生物学系生物医学发现研究所克雷顿维多利亚3800澳大利亚首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的研究万古霉素和多黏菌素B联合用药对肾小管上皮细胞(HK2)活力的影响。方法搭建并验证多黏菌素B的人体生理药代动力学(PBPK)模型。基于模型预测万古霉素、多黏菌素B在人体肾脏、肾小管中的组织分布特征。四唑氮氢氧化物法(XTT)检测... 详细信息

目的研究万古霉素和多黏菌素B联合用药对肾小管上皮细胞(HK2)活力的影响。方法搭建并验证多黏菌素B的人体生理药代动力学(PBPK)模型。基于模型预测万古霉素、多黏菌素B在人体肾脏、肾小管中的组织分布特征。四唑氮氢氧化物法(XTT)检测万古霉素低剂量组(0.5 mg/mL)、万古霉素高剂量组(2.0mg/mL)、多黏菌素组(50 mg/mL)、万古霉素低剂量+多黏菌素组、万古霉素高剂量+多黏菌素组分别对HK2细胞活力及细胞线粒体超氧化物生成的影响。结果建立并验证多黏菌素B PBPK模型,建立及验证的模型所预测的PK参数值与实测PK参数比值均在0.81.2之间。预测多黏菌素B静脉滴注给药后肾脏和肾小管浓度均高于血浆浓度,肾小管药物浓度约为血浆的10倍。肾脏、肾小管药物达峰时间明显滞后,其中肾小管浓度达峰时间为5.3 h,浓度高于50μg/mL的持续时间为8.5 h。细胞活力实验结果显示,8和24 h后万古霉素低剂量组、万古霉素高剂量组、多黏菌素B组、万古霉素低剂量+多黏菌素B组、万古霉素高剂量+多黏菌素B组细胞增殖抑制率分别为1.73%、4.77%、10.34%、10.54%和11.76%及1.95%、7.46%、11.27%、11.55%和16.49%。其中,只有万古霉素高剂量+多黏菌素B组的HK2细胞8 h后产生有统计学意义的线粒体超氧化物。结论万古霉素与多黏菌素B的联合使用可增加肾小管毒性,特别是高剂量万古霉素合用多黏菌素B促使细胞产生线粒体超氧化物。

关键词：生理药代动力学模型万古霉素多黏菌素B 组织分布肾毒性

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小分子药物非线性药代动力学特征、机制与预测评估研究进展

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国际药学研究杂志 2018年第11期45卷 805-812页

作者：张志伟李正庄笑梅军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

非线性药代动力学(PK)泛指药物体内暴露与给药剂量之间存在不与剂量相关的PK行为。非线性PK由于其药代特征与给药剂量之间的不可预测性,可导致难以预测的药理作用以致出现毒性效应。考虑到大分子生物药物一般都存在非线性PK的非线性PK... 详细信息

非线性药代动力学(PK)泛指药物体内暴露与给药剂量之间存在不与剂量相关的PK行为。非线性PK由于其药代特征与给药剂量之间的不可预测性,可导致难以预测的药理作用以致出现毒性效应。考虑到大分子生物药物一般都存在非线性PK的非线性PK案例的基础上,对非线性PK特征、主要机制及非线性PK的评价预测方法进行综述,从而有助于全面理解非线性PK的特点,提高新药发现和开发的成功率。

关键词：非线性药代动力学新药安全性

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基于PBPK跨种属障碍预测新药人体处置暴露特征

基于PBPK跨种属障碍预测新药人体处置暴露特征

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2019中国中西医结合学会临床药理与毒理专业委员会第三届学术研讨会

作者：庄笑梅李正高尤张文鹏军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室

目的:传统新药研发过程从实验室到临床,动物和人的物种差异以及体外试验体系和人体内环境的差异是主要挑战之一。在新药发现和临床前开发阶段,应用体外试验体系和动物进行药效学和安全性评价时,尽管应用人源化材料模型并尽可能选择与人... 详细信息

目的:传统新药研发过程从实验室到临床,动物和人的物种差异以及体外试验体系和人体内环境的差异是主要挑战之一。在新药发现和临床前开发阶段,应用体外试验体系和动物进行药效学和安全性评价时,尽管应用人源化材料模型并尽可能选择与人接近的动物,但体外和动物试验结果与临床仍然存在差别,不能满足人体药效和安全性预测的要求。随着生物大数据、计算机技术、机器学习等新兴技术的不断发展,逐渐使应用模型模拟技术研究生物体复杂过程成为可能。本文的目的在于结合本课题组的案例探讨如何应用基于生理的药代动力学模型(PBPK)进行新药的体外和动物研究与人体处置特征之间的桥接。方法:建立PBPK技术体系,结合应用"bottom-up"、"top-down"以及"middle-out"等方法探索新药(ATI)临床前药动学到临床药动学的预测、万古霉素毒性靶器官分布特征预测、以及药物-药物相互作用等预测。结果:新药(ATI)的非线性药动学特征是导致安全性的潜在问题,应用PBPK进行临床前到临床的外推,发现种属之间有明显的差异;万古霉素的肾毒性与肾小管药物浓度密切相关,应用PBPK模型可以预测不同剂量与肾小管的药物浓度;不同人群基于药物代谢酶抑制的药物相互作用有一定的差异等。结论:PBPK模型比传统的房室模型具有明显的优势,是"基于机理"的模型,可进行体外到体内、动物到人体以及普通人群到特殊人群的更合理外推,实现跨种属跨人群障碍的药动学模拟,为新药的临床安全应用提供支持。

关键词：万古霉素暴露特征

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热休克蛋白抑制剂抗甲型流感病毒研究概况

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中国新药杂志 2018年第8期27卷 882-886页

作者：孟镇锴王洪宝董延生吴纯启肖军海李云峰钟武王全军军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

甲型流行性感冒是一种人群易感、症状明显、死亡率高的疾病。目前主要抗病毒药物治疗效果并不理想。热休克蛋白是机体中一类氨基酸序列高度保守,具有分子伴侣、抗凋亡、调节免疫等多种保护性功能的应激蛋白。研究发现热休克蛋白在甲型... 详细信息

甲型流行性感冒是一种人群易感、症状明显、死亡率高的疾病。目前主要抗病毒药物治疗效果并不理想。热休克蛋白是机体中一类氨基酸序列高度保守,具有分子伴侣、抗凋亡、调节免疫等多种保护性功能的应激蛋白。研究发现热休克蛋白在甲型流感病毒的生命循环中起着激活病毒复制活性、稳定病毒客户蛋白等至关重要的作用。这一机制的发现为以热休克蛋白为靶点研发抗病毒药物提供了新的思路。以格尔德霉素为代表的热休克蛋白抑制剂作为重点候选药物成为了研究热点。

关键词：流行性感冒病毒(甲型) 热休克蛋白抑制剂格尔德霉素

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蓖麻毒素活性的MALDI-TOF/TOF-MSMS评价测定新方法

蓖麻毒素活性的MALDI-TOF/TOF-MSMS评价测定新方法

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中国毒理学会第九次全国毒理学大会

作者：杨捷威徐斌罗黎王凯郭磊军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室

目的蓖麻毒素是一种高毒性的Ⅱ型核糖体失活蛋白（RIPⅡ）,是唯一列于《国际禁止化学武器公约》和《国际禁止生物及毒素武器公约》的蛋白质毒素。其原料易得、制备简单,但灭活后的蓖麻毒素不再具有毒性。蓖麻毒素的准确分析鉴定一直是... 详细信息

目的蓖麻毒素是一种高毒性的Ⅱ型核糖体失活蛋白（RIPⅡ）,是唯一列于《国际禁止化学武器公约》和《国际禁止生物及毒素武器公约》的蛋白质毒素。其原料易得、制备简单,但灭活后的蓖麻毒素不再具有毒性。蓖麻毒素的准确分析鉴定一直是研究热点之一。目前,其分析检测技术主要归属于生物化学分析范畴,以免疫分析、质谱分析为主要分支,其中,如何区分失活和活性毒素具有重要意义。方法以发挥RIPⅡ的N-糖苷酶活性为核心,建立了一种基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF/TOFMSMS）新方法,在AutoflexⅢ型MALDI质谱仪上,选择使用MTP 400/384 AnchorChip靶板,负离子反射模式,针对所设计的寡核苷酸（ODN）底物,利用蓖麻毒素发挥N-糖苷酶活性后,可有效剪切下ODN底物特定位点的腺嘌呤这一特性,通过底物/产物比,从而实现蓖麻毒素活性的准确测定与评价。结果 ODN分子因其寡核苷酸特性,易与碱金属发生加合,产生系列Na+、K+离子的加合峰,严重干扰MALDI-MS测定结果。如何得到结晶均匀,且利于获取高强度谱峰、抑制碱金属加合峰的适宜MALDI基质是本方法的重要基础。我们针对常见的ODN基质(3-羟基吡啶甲酸（3-HPA）、2′,4′,6′-三羟基苯乙酮)、以及挥发性铵盐添加剂(柠檬酸铵、柠檬酸氢二铵（DHC）、碳酸氢铵)等,优化得到了3-HPA:DHC=7:1（w/w）的基质组成,且较之脱除碱金属的一些措施,发现基质纯度对谱峰质量更为主要。综合考察反应体系组成、反应时间、温度、pH值等因素,及对MALDI-MS基质结晶状态、谱峰响应的影响,最终优化得到了最适宜蓖麻毒素发挥N-糖苷酶活性的体外反应体系,为DHC（1 g/L）+EDTA（0.3 g/L）,pH 4.1,55℃,1-4 h。较之DNA底物,RNA底物和杂化RNA底物更适宜用于本测定,RNA12dA灵敏度最高且无假阳性现象。在此基础上,确定了上述不同ODN底物体系（DNA、RNA、杂化RNA）的酶动力学参数。结论本研究建立了一种蓖麻毒素活性测定的MALDI-MS新方法,将蓖麻毒素活性测定转化为ODN底物与去除腺嘌呤后的产物比例测定。所优化使用的MALDI基质,有效抑制了碱金属加合峰的干扰。体外反应体系可快速实现N-糖苷酶的活性发挥,更确定出杂化RNA底物在本活性测定的良好价值。不同底物酶动力学参数的差异,为更好理解蓖麻毒素的生化活性反应机制提供了数据支持。本方法可望对包括蓖麻毒素、相思子毒素等在内的RIPⅡ蛋白的毒性测定、活性与失活蛋白的区分、以及洗消评价提供新的技术思路。

关键词： MALDI-TOF/TOF-MSMS RNA RIP TOF

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药物非临床安全性评价数据完整性的管理现状及探讨

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中国药理学与毒理学杂志 2018年第12期32卷 973-978页

作者：许赫雷李红吴纯启王建京马华智董延生王全军军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

随着计算机化系统的日益成熟与应用,国际间药物非临床研究质量管理规范(GLP)相互认证,以及药品数据管理法规的逐步实施,国内GLP行业数据完整性和一致性规范显得尤为重要。GLP研究作为药物研发的重要环节,其数据结果的完整与否不仅关系... 详细信息

随着计算机化系统的日益成熟与应用,国际间药物非临床研究质量管理规范(GLP)相互认证,以及药品数据管理法规的逐步实施,国内GLP行业数据完整性和一致性规范显得尤为重要。GLP研究作为药物研发的重要环节,其数据结果的完整与否不仅关系到企业研发成本,而且严重威胁着公众的生命安全。因此,需要分析和借鉴国内外对药品数据完整管理的相关法规,结合国内已有法规或草案,探讨标准操作规范、人员职责与资质和计算机化系统管理重要方面,确保研究数据资料的真实、规范、一致和完整。

关键词：非临床安全性评价数据管理数据完整性

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一种UPLC-HRMS/MS分析鉴定新方法及在蛇毒毒液疑似样品中的应用

一种UPLC-HRMS/MS分析鉴定新方法及在蛇毒毒液疑似样品中的应用

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中国毒理学会第九次全国毒理学大会

作者：李泽华李克新陈佳徐斌杨捷威郭磊军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室

目的蛇毒是毒蛇从毒腺中分泌出来的复杂混合物,毒理学分类可分为神经毒素、抗凝血毒素、及促凝血毒素等各种毒素蛋白/酶,主要成分为蛋白质。目前针对蛇毒相关蛋白质的分析鉴定方法主要针对分子量及组分丰度/分布、(C-或N-端)氨基酸序列... 详细信息

目的蛇毒是毒蛇从毒腺中分泌出来的复杂混合物,毒理学分类可分为神经毒素、抗凝血毒素、及促凝血毒素等各种毒素蛋白/酶,主要成分为蛋白质。目前针对蛇毒相关蛋白质的分析鉴定方法主要针对分子量及组分丰度/分布、(C-或N-端)氨基酸序列、氨基酸组成、活性等展开。质谱分析因其高灵敏、高准确、高通量特性,在蛇毒结构鉴定方面应用广泛。我们建立了一种胰蛋白酶酶切结合超高效液相色谱-高分辨串联质谱(UPLC-HRMS/MS)的分析检测方法,以胶内酶切和溶液酶切互为比对,并针对2019年6月某地公安局在火车站安检管控中查获的某乘客携带疑似蛇毒毒液的可疑样品进行了分析鉴定。方法以CCK-8法检测样品对人肺成纤维细胞(HLF)的增殖抑制作用以明确其毒性;采用BCA法检测可疑样品是否为蛋白质并测定样品中的蛋白质浓度;以SDS-PAGE分析蛋白质分子量及丰度分布;样品经胰蛋白酶进行溶液酶切或胶内酶切后,在LC-Q-OrbitrapMS/MS的Full MS/dd-MS2模式下进行数据采集;随后,将采集的肽质量指纹图谱(PMF)+二级质谱(MS/MS)数据信息导入Proteome Discover 2.1软件,利用SequestHT搜索引擎,在Swissprot 20181122蛋白质数据库中搜寻匹配相关蛋白质并给出匹配的蛋白质和肽段、肽段覆盖率、Sequest HT评分以及与数据库相匹配的y、b离子等信息。为验证上述搜库结果,采用LC-Q-Orbitrap MS/MS的平行反应监测(PRM)模式靶向筛查肽段覆盖率和SequestHT评分排名均靠前的蛋白质,完成确证鉴定。结果该样品对HLF细胞的IC50值为32.75±1.24μg蛋白/mL;其蛋白质浓度为10.5 g/L;SDS-PAGE电泳结果显示,该蛇毒的分子量范围约为6.4-175 kDa。经胰蛋白酶酶切处理及LC-Q-Orbitrap MS/MS分析后,以SequestHT为搜索引擎,在Swissprot 20181122蛋白质数据库中,以PMF+MS/MS模式搜库,可匹配到15种蛇毒蛋白,UniProt在线数据库查询可知其物种来源主要为中华眼镜蛇(Najaatra)。PRM模式中,除Q98960、P80958、P00760、P84805外的11种蛋白质(P86543、P82885、P07525、P0CH80、P59275、P01442、P60304、P49123、Q9PST3、P62375、P60770),每种蛋白质均满足下述确证鉴定需求:即可提取出至少两条具备丰富y、b离子的特征肽段,且响应较高。结论本研究建立的UPLC-HRMS/MS的分析检测方法,以胶内酶切和溶液酶切互为比对,通过PMF+MS/MS搜索及PRM确证分析,成功鉴定出某疑似样品为中华眼镜蛇蛇毒毒液。该方法的建立可为蛇毒中毒的司法案件鉴定、临床中毒救治提供有效技术支持。

关键词： UPLC-HRMS/MS PRM 分析鉴定

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孕鼠乳汁采集方法的建立与应用

孕鼠乳汁采集方法的建立与应用

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中国毒理学会中药与天然药物毒理与安全性评价第四次（2019年）学术年会

作者：石富江魏曼莉闫小娇廖沙刘爱燕吴纯启王全军军事医学研究院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室

目的建立大鼠孕鼠乳汁采集方法和标准操作规程,为新药出生前和出生后生殖发育毒性试验中确认受试化合物经乳汁转运的数量与情况,提供采样方法学基础,为上市新药标签中母乳喂养相关知识提供依据。方法通过文献检索查询和前期的预习,建立... 详细信息

目的建立大鼠孕鼠乳汁采集方法和标准操作规程,为新药出生前和出生后生殖发育毒性试验中确认受试化合物经乳汁转运的数量与情况,提供采样方法学基础,为上市新药标签中母乳喂养相关知识提供依据。方法通过文献检索查询和前期的预习,建立初步的孕鼠乳汁采集程序,确定采集乳汁的最佳哺乳日期,确认影响乳汁采集的关键步骤和注意事项,最终建立孕鼠乳汁采集SOP;并在某一新药出生前和出生后生殖发育毒性试验中乳汁中供试品分析方法学的建立、确证和试样分析中全面应用。结果最终的乳汁采集法SOP要点如下:于PND14天左右,高、中、低给药组每组取3或4窝母鼠,以乳头揉捏法在异氟烷麻醉下采集各窝母鼠乳汁(采乳汁前隔离母子鼠4-5小时,以便母鼠备乳)约0.25mL,合并放置于离心管内(冰浴),4℃,-40℃保存备测;乳汁采集完毕后,尽快将母鼠放回窝内,准备给仔鼠喂乳。大鼠母鼠的所有乳头均可采集到乳汁,但最好从胸部的两个乳头开始采集,其后可采集上腹部、下腹部、上胸部的各对乳头的乳汁。挤出的乳汁可直接经毛细作用转移至巴氏吸管内。虽然文献中报道腹腔注射催产素可提高乳汁产量,但是此种操作处理明显不同于正常的母乳喂养。外源性催产素刺激采乳在某些条件下可能对母鼠产生不良效应:如改变乳汁的成分和含量,影响母鼠的生理学和行为。另外,使用采乳机采乳的经费投入较大,操作繁琐,应用于小动物采乳并不适当。供试品分析方法学的建立、确证中,所用的空白乳汁量多达30 mL,应尽可能地从最少的母鼠中采乳,进而减少本底误差。结论建立了一种适合于新药出生前和出生后生殖发育毒性试验中确认受试化合物经乳汁转运的大鼠母乳采集方法,该方法操作简便、成本较低,对动物无侵害性,且可以采集到足够多的乳汁。并全面应用于某一新药出生前和出生后生殖发育毒性试验中乳汁中供试品分析方法学的建立、确证和试样分析中。

关键词：出生后采集方法建立与应用

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细胞色素P450酶基因多态性及对药物代谢影响的研究进展

细胞色素P450酶基因多态性及对药物代谢影响的研究进展

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中国毒理学会药物毒理与安全性评价学术大会（2019年）暨粤港澳大湾区生物医药产业第一届高峰论坛

作者：梁峰王全军董延生关勇彪廖沙刘爱燕吴春燕军事医学研究院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室

药物代谢是药物在体内消除的主要决定因素。药物在体内代谢向两个方向发展:代谢解毒和代谢活化,其中大部分药物的代谢在肝脏进行。细胞色素(CYP450)酶系是肝脏中主要的代谢酶之一,是机体内最重要的I相药物代谢酶系,广泛参与外源性药物... 详细信息

药物代谢是药物在体内消除的主要决定因素。药物在体内代谢向两个方向发展:代谢解毒和代谢活化,其中大部分药物的代谢在肝脏进行。细胞色素(CYP450)酶系是肝脏中主要的代谢酶之一,是机体内最重要的I相药物代谢酶系,广泛参与外源性药物、环境毒物或致癌物、内源性激素等的代谢过程。该酶活性存在明显个体差异,对不同个体的药物治疗作用、药物不良反应及药物毒性均产生重要影响。人体的药物代谢主要由以下6种同工酶催化:CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4。CYP2C9酶是人类第一个得到结晶和分析反应底物的CYP450。CYP2D6是第一个被发现具有遗传多态性的CYP450药物代谢酶基因。CYP3A4参与50%左右药物的体内代谢,是人体内含量最丰富的药物代谢酶。人类许多药物代谢CYP450酶具有遗传变异。自20世纪80年代以来,有关CYP450基因多态性与药物不良反应或疾病发生的相关性研究,成为遗传药理学研究的热点内容。目前己知具有多态性等位基因的CYP450酶系包括CYP1A1,CYP1A2,CYP1B1,CYP2A6,CYP2A13,CYP2B6,CYP2C8,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1,CTP2J2,CYP2R1,CYP2S1,CYP3A4,CYP3A5,CYP3A7,CYP3A43,CYP4B1,CYP5A1,CYP8A1和CYP21A2。同时,这些药物代谢CYP450酶的遗传多态性具有明显种族和地域差异。在对药物代谢酶多态性的研究中,已相继建立了多种采用CYP450酶某种亚型的代谢底物作为特异性探针药物,通过考察该探针药物的原型药及代谢物在体内浓度消长的比值,对CYP450酶代谢活性表型进行定量评价的方法。目前底物酶较为清楚的探针药物分别为咖啡因(CYP1A2)、氯沙坦(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、异喹胍(CYP2D6)及咪达唑仑(CYP3A4)。本文对CYP450酶中几个重要的代谢酶亚型CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4多态性的分子调控、种族差异及基因多态性对药物代谢作用的影响等方面的研究进展做一综述。为适应环境,人类通过突变来改造药物代谢酶类基因,用相应环境的酶蛋白适应外来化合物的变化。基因变化可通过遗传留给后代,逐渐造成人类药物代谢酶的多态性。CYP450酶的多态性是引起药物个体差异的重要因素。随着研究的不断深入,对CYP450酶家族的功能、调控及其表达的进一步认识和了解,将有助于认识药物代谢的个体间差异,为指导临床合理用药和临床疾病检测提供科学借鉴。

关键词：细胞色素P450氧化酶药物代谢分子机制多态性

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