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2014中国(宁夏)民族医药国际论坛

作者：吴皓郁红礼葛秀允潘耀宗金羊平张倩南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023

天南星科的半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit.)、掌叶半夏(Pinellia pedatisecta Schott.)、天南星(Arisaemaamurense Maxim)、白附子(Typhonium giganteum Engl.)是常用有毒中药.因其有毒,故在临床应用前需要把它们浸泡在白矾溶液中来炮制减毒.毒针晶和凝集素被认为天南星科有毒中药中共性的毒性物质,两者均具有显著的致炎作用.本文研究了白矾溶液降低毒性成分毒性的炮制机理.采用整体动物腹腔致炎模型和家兔眼结膜刺激模型研究白矾炮制对针晶、凝集素蛋白的刺激性及致炎毒性的影响;采用电镜扫描观察针晶在炮制过程中的晶型变化;采用HPLC法研究针晶的溶解、锈蚀是与白矾溶液中何种离子相关;以27Al-NMR技术研究草酸铝络合物的形成与针晶溶解、锈蚀之间的关系;采用蛋白Shotgun质谱分析技术研究白矾溶液浸泡前后凝集素蛋白肽序列变化.结果显示毒针晶及凝集素蛋白腹腔注射导致的小鼠腹腔渗出液中PGE2及蛋白含量升高,白矾溶液炮制炮制后其致炎作用显著降低.电镜扫描显示毒针晶在炮制过程中针晶溶解、锈蚀,晶型结构被破坏;HPLC法测定显示以白矾溶液浸泡毒针晶可使毒针晶中草酸含量明显下降,这与白矾中的Al3+相关;27Al-NMR分析显示白矾中的Al3+可与针晶中的C2042-形成稳定的络合物,促使毒针晶的草酸钙溶解;SDS凝胶电泳和LC-MS/MS蛋白肽序列分析结果表明,毒针晶经白矾溶液浸泡后,毒针晶带有的凝集素蛋白溶解并降解,凝集素蛋白序列变化,蛋白结构破坏.结论:天南星科有毒中药采用白矾炮制解毒的共性机制:白矾溶液中的Al3+与毒针晶中草酸钙的草酸根形成络合物,促使草酸钙溶解,毒针晶特殊晶型的刚性结构被破坏,机械刺激破坏;同时白矾溶液浸泡使毒针晶上带有的凝集素蛋白溶解并降解,破坏了毒蛋白的结构,使致炎效应显著降低.双重作用导致天南星科有毒中药的毒性显著下降.

关键词：天南星科有毒中药毒针晶凝集素白矾溶液炮制工艺减毒作用

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多指标正交优选大腹皮饮片切制工艺

多指标正交优选大腹皮饮片切制工艺

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2014中国(宁夏)民族医药国际论坛

作者：郁红礼汤丽娟吴皓王奎龙毛善虎殷云芝南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210023 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的:优选大腹皮饮片切制工艺.方法:采用正交试验法,以4种生物碱(槟榔次碱、去甲槟榔次碱、槟榔碱、去甲槟榔碱)含量及水溶性煎出物得率为指标,采用相关系数综合评分法,选择切制宽度、烘干温度和烘干时间为考察因素,优化大腹皮饮片的炮... 详细信息

目的:优选大腹皮饮片切制工艺.方法:采用正交试验法,以4种生物碱(槟榔次碱、去甲槟榔次碱、槟榔碱、去甲槟榔碱)含量及水溶性煎出物得率为指标,采用相关系数综合评分法,选择切制宽度、烘干温度和烘干时间为考察因素,优化大腹皮饮片的炮制工艺.结果:优选出的炮制工艺为:大腹皮药材抢水洗后,润透,纵切1cm段,50℃,烘2.5h.结论:优选出的大腹皮炮制工艺稳定可行,重现性好.

关键词：大腹皮炮制工艺正交设计生物碱水溶性煎出物得率

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商陆提取物醋制前后毒性作用的比较研究

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中国中药杂志 2013年第10期38卷 1610-1613页

作者：宫乐吴皓郁红礼赵腾斐徐秋香南京中医药大学药学院江苏南京210029 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210029 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210029

目的:提取分离获得商陆的毒性成分,并比较其醋制前后毒性的变化。方法:采用黏膜刺激性反应、小鼠腹腔炎症模型及离体巨噬细胞释放NO模型,比较商陆毒性成分醋制前后的致炎毒性变化。结果:商陆毒性成分具有显著的致炎毒性,可导致家兔眼结... 详细信息

目的:提取分离获得商陆的毒性成分,并比较其醋制前后毒性的变化。方法:采用黏膜刺激性反应、小鼠腹腔炎症模型及离体巨噬细胞释放NO模型,比较商陆毒性成分醋制前后的致炎毒性变化。结果:商陆毒性成分具有显著的致炎毒性,可导致家兔眼结膜水肿、小鼠腹腔渗出液中PGE2含量升高以及巨噬细胞释放NO含量升高;经醋制后,对家兔眼结膜刺激性减弱,使小鼠腹腔渗出液中PGE2含量降低、巨噬细胞释放NO含量降低。结论:醋制法能够降低商陆毒性成分的毒性作用。

关键词：商陆毒性成分黏膜刺激性炎症

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掌叶半夏(虎掌南星)矾制前后致炎毒性比较研究

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中国中药杂志 2013年第22期38卷 3893-3897页

作者：郁红礼张倩吴皓邵丞赵腾斐李卓南京中医药大学药学院江苏南京210029 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210029 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210029

目的:探索掌叶半夏致炎毒性及白矾炮制对其致炎作用的影响。方法:自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及掌叶半夏凝集素蛋白;采用整体动物及细胞水平模型,以炎症介质为指标,考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白的致炎效应,及矾制对致炎作用... 详细信息

目的:探索掌叶半夏致炎毒性及白矾炮制对其致炎作用的影响。方法:自掌叶半夏鲜品中分离毒针晶及掌叶半夏凝集素蛋白;采用整体动物及细胞水平模型,以炎症介质为指标,考察掌叶半夏毒性成分毒针晶和凝集素蛋白的致炎效应,及矾制对致炎作用的影响。结果:腹腔注射掌叶半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔渗出液中炎症介质PGE2,NO含量显著增加,矾制后生品及毒针晶诱导的PGE2,NO释放显著下降;掌叶半夏凝集素蛋白刺激小鼠巨噬细胞后,在一定时间内可导致剂量依赖性的炎症因子TNF-α及IL-6含量显著增加。矾制后凝集素蛋白诱导的小鼠腹腔渗出液中PGE2含量显著下降。结论:掌叶半夏的刺激性毒性在机体表现为炎症反应,其所含的毒针晶及凝集素蛋白是其毒性成分,均可导致显著的炎症介质释放。矾制可显著降低掌叶半夏毒性成分的致炎毒性。

关键词：掌叶半夏毒针晶凝集素蛋白致炎作用白矾炮制

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LC-MS测定大鼠血浆中五味子的3个木脂素成分及其药动学研究

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中国药理学通报 2013年第9期29卷 1313-1317页

作者：李惠连季德毛春芹陆兔林胡俊扬王菊国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心、国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室、江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210046 南京中医药大学药学院江苏南京210046

目的建立测定大鼠血浆中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素浓度的LC-MS法，并探讨其在大鼠体内的药代动力学过程。方法SD大鼠6只，按5mg·g^-1。剂量ig给予五味子醇提液，以睾丸酮为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，采用LC—MS... 详细信息

目的建立测定大鼠血浆中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素浓度的LC-MS法，并探讨其在大鼠体内的药代动力学过程。方法SD大鼠6只，按5mg·g^-1。剂量ig给予五味子醇提液，以睾丸酮为内标，血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，采用LC—MS法测定不同时间点大鼠血浆中的五味子醇甲、五味子甲素、五昧子乙素的浓度，对其血药浓度-时间采用DAS1．0软件拟合，计算其药动学参数。结果大鼠血浆样品中，五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的线性范围分别为0．114～3．66mg·L^-1（r=0．9994）、0．0299～0．995mg·L^-1（r=0．9992）和0．0251—0．803mg·L^-1（r=0．9991），提取回收率为83．12％～103．48％，日内与日间精密度均≤14．00％，Cmax分别为（0．54±0．07）、（0．23±0．07）和（0．40±0．04）mg·L^-1，Tmax分别为（4．67±0．26）、（4．33±0．26）和（4．08±0．20）h，q分别为（1．95±0．26）、（8．30±3．36）和（6．46±3．82）h。结论本法专属性强，灵敏度高，快速准确，可作为大鼠血浆中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的同时检测及其药动学研究。

关键词：五味子醇甲五味子甲素五味子乙素大鼠血药浓度 LC—MS 药代动力学

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藏药镰形棘豆总黄酮对SMMC-7721肝癌细胞凋亡及Bcl-2，Bax蛋白表达的影响

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中国药学杂志 2013年第24期48卷 2113-2116页

作者：杨光明燕珂顾青李俊松潘扬蔡宝昌南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210023 南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所南京210023

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法镰形棘豆总黄酮不同剂量作用于SMMC-7721细胞后,Annexin V-FITC/PI双染法检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白质印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的... 详细信息

目的研究藏药镰形棘豆对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法镰形棘豆总黄酮不同剂量作用于SMMC-7721细胞后,Annexin V-FITC/PI双染法检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白质印迹法检测对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。结果镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到凋亡细胞的比例明显升高;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达与对照组相比虽有所降低,但Bcl-2/Bax比值显著减小。结论镰形棘豆总黄酮可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2基因表达和降低Bcl-2/Bax的比值有关。

关键词：镰形棘豆 SMMC-7721 凋亡蛋白表达抗肿瘤

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马钱子碱血药浓度测定方法的优化与应用

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中国中药杂志 2013年第7期38卷 1075-1078页

作者：王冬月陈军蔡宝昌南京中医药大学药学院江苏南京210046 江苏省中药炮制重点实验室南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心国家中医药管理局中药炮制标准重点研究实验室江苏南京210046 南京海昌中药集团江苏南京210061

借助考察萃取溶剂、萃取次数、萃取剂体积对马钱子碱提取回收率的影响,马钱子碱血药浓度的HPLC测定方法得到了优化。筛选得到最优的血浆处理方法,即用氨水碱化后,用4mL的萃取剂正己烷-二氯甲烷-异丙醇65:30:5萃取2次。将马钱子碱血药浓... 详细信息

借助考察萃取溶剂、萃取次数、萃取剂体积对马钱子碱提取回收率的影响,马钱子碱血药浓度的HPLC测定方法得到了优化。筛选得到最优的血浆处理方法,即用氨水碱化后,用4mL的萃取剂正己烷-二氯甲烷-异丙醇65:30:5萃取2次。将马钱子碱血药浓度的测定方法应用于药动学研究,比较了静脉注射5mg·kg-1与经皮给药40mg·kg-1马钱子碱溶液后的药动学性质,结果得到马钱子碱静脉注射和经皮给药后的药动学均符合二室模型,经皮给药后的绝对生物利用度为18.72%。可见优化后的血药浓度分析方法可以满足马钱子碱药动学研究的需要。

关键词：马钱子碱 HPLC 药动学

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半夏毒针晶的致炎效应与巨噬细胞的相关性研究

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中国中药杂志 2013年第7期38卷 1041-1045页

作者：赵腾斐张倩张雯吴皓郁红礼王慧珠南京中医药大学药学院江苏南京210046 江苏省中药炮制重点实验室江苏南京210046 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210046 南京中医药大学国家科技部规范化中药药理实验室江苏南京210046

目的:研究半夏毒针晶刺激性毒性产生的机制。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞体外培养模型,以培养上清液中TNF-α,IL-1β和IL-6为指标,研究半夏毒针晶致炎的量-毒,时-毒曲线;采用扫描电镜法观察经半夏毒针晶刺激后巨噬细胞表面形态学的改变;... 详细信息

目的:研究半夏毒针晶刺激性毒性产生的机制。方法:采用小鼠腹腔巨噬细胞体外培养模型,以培养上清液中TNF-α,IL-1β和IL-6为指标,研究半夏毒针晶致炎的量-毒,时-毒曲线;采用扫描电镜法观察经半夏毒针晶刺激后巨噬细胞表面形态学的改变;使用巨噬细胞-中性粒细胞共培养迁移模型,考察半夏毒针晶刺激巨噬细胞对中性粒细胞迁移的影响。结果:半夏毒针晶刺激巨噬细胞,可引起TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著升高,且具有剂量和时间依赖性;扫描电镜显示,半夏毒针晶可被巨噬细胞吞噬,细胞膜表面皱褶明显,伪足数量增多,细胞膜完整性下降,并能显著诱导中性粒细胞迁移。结论:巨噬细胞在毒针晶的致炎过程中起关键的介导作用。半夏毒针晶的毒性机制是毒针晶刺入组织,激活组织中的驻留巨噬细胞,引起吞噬、促炎细胞因子释放、中性粒细胞大量迁移,最终导致强烈的急性炎症反应。

关键词：半夏毒针晶巨噬细胞炎症因子扫描电镜中性粒细胞趋化

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藤黄炮制品对大鼠肠道组织病理学研究

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中国实验方剂学杂志 2013年第5期19卷 279-282页

作者：窦娟文红梅郁红礼柴川吴皓卞慧敏南京中医药大学药学院南京210029 江苏省中药炮制重点实验室南京210046 国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心南京210029

目的:观察藤黄各制剂单次大剂量ig给药后大鼠消化系统病变情况,并比较藤黄炮制前后对大鼠肠上皮细胞株IEC-6毒性差异,探讨藤黄炮制减毒机制。方法:单次ig给予藤黄生品(200 ***-1)、清水制藤黄(200 ***-1)和藤黄酸(50 ***-1),观察给药后... 详细信息

目的:观察藤黄各制剂单次大剂量ig给药后大鼠消化系统病变情况,并比较藤黄炮制前后对大鼠肠上皮细胞株IEC-6毒性差异,探讨藤黄炮制减毒机制。方法:单次ig给予藤黄生品(200 ***-1)、清水制藤黄(200 ***-1)和藤黄酸(50 ***-1),观察给药后大鼠的活动情况,于24 h后处死并采集大鼠心、肝、肾、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等主要脏器,观察大鼠口服给药后消化系统病变情况。以大鼠肠上皮细胞株IEC-6为研究对象,采用MTT法检测藤黄炮制前后对IEC-6细胞增殖的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态。结果:病理切片结果显示,给药后大鼠的肝脏、肾脏、心脏、胃和食道均未见明显的毒性反应;但十二指肠、空肠有轻度至重度的毒性作用,表现为肠绒毛水肿。3种藤黄制剂均会引起给药大鼠肠道的毒性作用,生品藤黄所致的十二指肠和空肠水肿程度最严重,其次是清水制藤黄和藤黄酸。细胞的毒性结果显示,与空白组相比,藤黄生品及炮制品均可明显降低IEC-6细胞的活性(P<0.01)与形态,且呈一定的剂量相关性;与藤黄生品组相比,藤黄3种炮制品组对IEC-6细胞的增殖抑制作用(P<0.01)和形态变差的趋势均显著性降低。结论:藤黄单次大剂量ig给药后大鼠的病理变化及IEC-6细胞的毒性作用结果表明,藤黄经炮制后毒性显著降低。

关键词：藤黄炮制肠黏膜上皮细胞株IEC-6 病理变化减毒

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盐制对补骨脂中主要化学成分的影响

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中成药 2013年第11期35卷 2470-2474页

作者：颜翠萍吴育翁泽斌陈志鹏蔡宝昌李伟东南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心江苏南京210023 南京中医药大学药学院江苏南京210023

目的建立HPLC同时测定补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、broussochalcone B、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、corylifol A、补骨脂查尔酮和补骨脂酚等13种... 详细信息

目的建立HPLC同时测定补骨脂中补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、broussochalcone B、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、corylifol A、补骨脂查尔酮和补骨脂酚等13种化学成分的方法,比较补骨脂盐制前后主要化学成分量的变化。方法按照《中国药典》规定的盐制法对来源不同的10批补骨脂生品进行炮制,采用HPLC法测定补骨脂中13种指标性成分,在此基础上,对补骨脂主要成分进行归类,分析了补骨脂盐制前后各类成分的变化规律。结果补骨脂盐制后香豆素成分含有量变化不大,而黄酮类成分和补骨脂酚的量略有上升。结论补骨脂的盐制机制还需结合药效学试验进行深入研究。

关键词：补骨脂香豆素黄酮单萜酚 HPLC 盐制

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