检索结果-内蒙古大学图书馆

淡水渔业 2016年第6期46卷 56-63页

作者：张国亮吕利群国家水生动物病原库农业部淡水水产种质资源利用重点实验室上海海洋大学水产与生命学院上海201306 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心武汉430070

为了分析比较不同抗生素对耐药嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的诱导效率,从五大类抗生素中各挑选出一种代表性的抗生素,在针对嗜水气单胞菌菌株AH10的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)的琼脂平板上,分别筛选... 详细信息

为了分析比较不同抗生素对耐药嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的诱导效率,从五大类抗生素中各挑选出一种代表性的抗生素,在针对嗜水气单胞菌菌株AH10的防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)的琼脂平板上,分别筛选出五株耐药菌株,并对筛选的耐药菌株进行交叉耐药性分析,制定出这些耐药菌株对常用抗生素的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC)图谱。结果显示:四环素、氟苯尼考、磺胺嘧啶、硫酸新霉素、诺氟沙星对AH10的MIC分别为:1.0、0.5、8.0、8.0、0.25μg/m L;MPC分别为4.0、3.0、128、88、2.0μg/m L,分离的耐药菌株对所使用抗生素的MIC均提高100倍以上。4℃划线平板冰箱保存条件下,一个月内个别耐药菌株耐药性下降。在药物筛选压力下,菌株耐药性随着传代次数增多而表现出递增的趋势。同属一类抗生素耐药相关性较高;不同大类抗生素压力下筛选出来的耐药菌株表现出不同的交叉耐药性。

关键词：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) 耐药性抗生素交叉耐药

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一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法

引用

中国水产科学 2016年第2期23卷 328-335页

作者：孔善云姜有声许丹谢骏吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

Ⅱ型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。在临床筛查中基于病毒核酸的PCR和real time PCR技术已经建立,但是稳定性更强的免疫学诊断技术国内外尚无报... 详细信息

Ⅱ型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus 2,Cy HV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。在临床筛查中基于病毒核酸的PCR和real time PCR技术已经建立,但是稳定性更强的免疫学诊断技术国内外尚无报道。本研究目的是利用Cy HV-2编码的ORF72基因(Gen Bank登录号:AFJ20502.1)所编码的衣壳蛋白作为捕获抗原,通过识别感染病毒的鱼体中的相应抗体,从而对样本进行临床免疫学检测。首先采用PCR方法从纯化的Cy HV-2基因组中扩增ORF72基因,并把该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-3,并转化到大肠杆菌中诱导表达,诱导表达的产物通过SDS-PAGE进行鉴定,对表达的重组蛋白进行纯化。用已纯化的72重组蛋白对小鼠进行免疫,制得72重组蛋白的抗体。Western blot检测表明所制备的多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也可以识别Cy HV-2病毒粒子上的衣壳蛋白72。在上述基础上建立了基于Western blot技术的Cy HV-2抗体检测技术:用纯化的72重组蛋白作为检测抗原,鲫鱼血清用作一抗,兔抗鲫Ig M多克隆抗体作为二抗,酶标羊抗兔作为三抗鉴定鲫鱼是否存在Cy HV-2特异性抗体。在对急性感染期的临床样本检测中,本方法能在所有样本中检测出ORF72特异性抗体存在,表明72重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于确诊鲫鱼是否感染Cy HV-2。本研究建立的实验室免疫学检测方法为商品化免疫学检测技术的开发奠定了基础,对Cy HV-2的检验检疫具有一定的临床应用价值。

关键词： Ⅱ型鲤疱疹病毒 ORF72 原核表达多克隆抗体临床检测异育银鲫

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草鱼类泛素化E2结合酶UBC9的克隆表达及纯化

草鱼类泛素化E2结合酶UBC9的克隆表达及纯化

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2016年中国水产学会学术年会

作者：喻飞王浩吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

类泛素化(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)是蛋白翻译后修饰的重要形式之一,E2结合酶UBC9在蛋白类泛素化过程中起到重要枢纽作用。本文主要目的为研究草鱼UBC9(Grass carp ubiquitin-conjugating enzyme,GcUBC9)蛋白的原核表达和建立UBC9的纯化方法。首先克隆基因GcUBC9的cDNA全长,得到477 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),其编码158个氨基酸,对其同源性分析发现其与斑马鱼的亲缘关系最近;构建原核表达载体p GEX-4T-3-GcUBC9,诱导表达谷胱甘肽转移酶(GST)与GcUBC9的融合蛋白GST-GcUBC9,分析其表达及其可溶性;纯化方法选用AKTAprime Plus标签蛋白纯化系统和基于GST标签亲和层析实验室普通方法;用纯化的融合蛋白GST-GcUBC9制备鼠源多克隆抗体。结果表明,融合蛋白GST-GcUBC9成功表达,可溶;纯化蛋白纯度较高,两种方法蛋白得率比为7.8;成功制备高效价鼠源多克隆抗体。

关键词：草鱼类泛素化 UBC9 蛋白纯化

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抗Ⅱ型鲤疱疹病毒(CyHV-2)中草药的筛选

抗Ⅱ型鲤疱疹病毒(CyHV-2)中草药的筛选

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2016年中国水产学会学术年会

作者：沈兆媛吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了筛选抗Ⅱ型鲤疱疹病毒的中草药,本实验分别用添加板蓝根、黄芪、大黄、穿心莲等中草药的饲料投喂异育银鲫,攻毒后统计死亡率。在基础饲料中添加1%的中草药生药,每日两次定时投喂质量为(100±10)g的异育银鲫,保持水温23℃,2个月... 详细信息

为了筛选抗Ⅱ型鲤疱疹病毒的中草药,本实验分别用添加板蓝根、黄芪、大黄、穿心莲等中草药的饲料投喂异育银鲫,攻毒后统计死亡率。在基础饲料中添加1%的中草药生药,每日两次定时投喂质量为(100±10)g的异育银鲫,保持水温23℃,2个月后对异育银鲫腹腔注射含CyHV-2的病毒液,观察三周并统计各组的死亡率。实验结果显示投喂含穿心莲、黄芪、板蓝根、大黄等饲料的实验组异育银鲫的死亡率分别为15%、30%、35%、95%,空白对照组死亡率为100%。研究结果表明大黄抗Ⅱ型鲤疱疹病毒效果相对较差,黄芪与板蓝根抗病毒效果稍强,穿心莲具有较好的抗Ⅱ型鲤疱疹病毒效果。

关键词： Ⅱ型鲤疱疹病毒中草药死亡率异育银鲫

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草鱼呼长孤病毒外衣壳蛋白VP5在杆状病毒表达系统中的表达

草鱼呼长孤病毒外衣壳蛋白VP5在杆状病毒表达系统中的表达

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2016年中国水产学会学术年会

作者：刘玮莎王浩吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为研究Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒其外衣壳蛋白VP5,将编码草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的基因M6插入至转座载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTa-M6,然后将重组质粒pFastBacHTa-M6转化至*** DH5α感受态细胞中,并通过LB/Amp平板筛选阳性克隆,经... 详细信息

为研究Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒其外衣壳蛋白VP5,将编码草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的基因M6插入至转座载体pFastBacHTA中,构建重组质粒pFastBacHTa-M6,然后将重组质粒pFastBacHTa-M6转化至*** DH5α感受态细胞中,并通过LB/Amp平板筛选阳性克隆,经PCR鉴定并测序正确后,再转化至*** DH10Bac感受态细胞中,经抗性培养后进行蓝白斑筛选出显性白色克隆进行扩增,通过琼脂糖凝胶电泳验证正确后,即产生重组杆粒。重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,在昆虫细胞内经复制、表达、装配等过程,形成重组杆状病毒,并表达草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP5,经Western-blot分析,表达的VP5蛋白分子量约68Kda,通过间接免疫荧光试验证明重组VP5蛋白定位于sf9细胞膜上。利用杆状病毒表达系统成功表达草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP5,从而研究GCRV外衣壳蛋白功能,并且为研究预防草鱼出血病亚单位疫苗奠定基础。

关键词：草鱼弧长孤病毒外衣壳蛋白VP5 杆状病毒表达系统亚单位疫苗

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敌百虫残留检测方法的灵敏度比较及其在制定休药期中的应用

敌百虫残留检测方法的灵敏度比较及其在制定休药期中的应用

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2016年中国水产学会学术年会

作者：张敏利孙朋辉王龙龙吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院

为了研究敌百虫在异育银鲫组织中的残留消除规律,本文比较了高效液相色谱仪、气质联用仪和高效液相色谱-质谱联用仪这三种检测敌百虫残留方法的灵敏度。在18～22℃条件下,使用浓度为0mg/L、0.2mg/L和0.5mg/L敌百虫对质量为(100±10)... 详细信息

为了研究敌百虫在异育银鲫组织中的残留消除规律,本文比较了高效液相色谱仪、气质联用仪和高效液相色谱-质谱联用仪这三种检测敌百虫残留方法的灵敏度。在18～22℃条件下,使用浓度为0mg/L、0.2mg/L和0.5mg/L敌百虫对质量为(100±10)g的异育银鲫连续药浴7d,停药后,采用高效液相色谱-质谱联用仪测定鳃、肌肉和肝脏中敌百虫的残留量。研究结果表明,在三种检测方法中高效液相色谱-质谱联用仪的检测限(0.0001μg/g)最小,符合检测要求。鲫鱼药浴富集敌百虫的过程中,敌百虫在鱼体肌肉中蓄积能力最强,后期消除比鳃和肝脏缓慢。敌百虫在鳃、肌肉和肝脏的消除半衰期T1/2分别是53.138h、60.641h和49.889h。我们的研究表明药浴敌百虫的休药期理论值至少是6天,肌肉残留才能降低到安全浓度以下。

关键词：敌百虫异育银鲫残留检测方法休药期

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氟苯尼考在鲫和草鱼体内的药代/药效动力学联合参数及其临床给药方案的研究

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水产学报 2014年第6期38卷 888-895页

作者：李梦影徐丽娟吕利群上海海洋大学水产与生命学院国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室

为研究氟苯尼考在鲫和草鱼体内的药代学、药效动力学联合参数,并制定氟苯尼考对鲫、草鱼的精确用药方案,本实验结合氟苯尼考对致病性嗜水气单胞菌CAAh01的体外药效学研究和口灌不同剂量的氟苯尼考在鲫、草鱼体内药代动力学研究,确定了... 详细信息

为研究氟苯尼考在鲫和草鱼体内的药代学、药效动力学联合参数,并制定氟苯尼考对鲫、草鱼的精确用药方案,本实验结合氟苯尼考对致病性嗜水气单胞菌CAAh01的体外药效学研究和口灌不同剂量的氟苯尼考在鲫、草鱼体内药代动力学研究,确定了氟苯尼考防治该致病菌引起的鲫和草鱼细菌性败血症的给药方案。研究结果显示,氟苯尼考对CAAh01菌株的最小抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为1.0μg/mL,防细菌耐药突变浓度(MPC)为6.0μg/mL,防耐药突变选择窗(MSW)为0.5~6.0μg/mL。按10、20、30 mg/kg体质量剂量对鲫、草鱼口灌氟苯尼考后,在鲫体内,血药浓度大于MPC的维持时间分别为5、8、24 h;AUC24/MIC分别为177.06、265.90、426.50;Cmax/MIC分别为15.59、21.32、31.24。在草鱼体内,血药浓度大于MPC的维持时间分别为0、0、3 h;AUC24/MIC分别为38.60、75.08、121.94;Cmax/MIC分别为4.75、10.08、19.99。研究表明,综合血药浓度维持MPC以上的时间、AUC24/MIC或Cmax/MIC指标,氟苯尼考适用于鲫细菌性疾病的防治,其防突变用药方案为剂量30 mg/kg,每日1次给药,休药期不低于20 d。对于草鱼细菌性疾病的防治,氟苯尼考不宜连续使用。

关键词：鲫草鱼氟苯尼考嗜水气单胞菌防耐药突变浓度药代动力学药效动力学

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一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法

一种基于Ⅱ型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72的免疫学检测方法

引用

中国水产学会鱼病专业委员会2015年学术讨论会

作者：孔善云刘玮莎姜有声许丹谢骏吕利群国家水生动物病原库农业部淡水种质资源重点实验室上海海洋大学水产与生命学院上海201306 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡 214081

Ⅱ 型鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)是引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)造血器官坏死症的致病病原。

关键词： Ⅱ型鲤疱疹病毒 ORF72 原核表达多克隆抗体临床检测

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