检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2001年第2期17卷 35-37页

作者：宋亚军王津张敏丽郭兆彪杨瑞馥国家生物医学分析中心分析微生物实验室

目的　建立防止产物污染的UDPE(UDG -DuplexPCR -EIA)技术 ,用于检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌。方法　选择类鼻疽伯克霍尔德氏菌FUR(FerricUptakeRegulator)基因为靶序列 ,设计两对引物进行PCR扩增 ,用UDG(尿嘧啶糖基化酶 )防止PCR产物污... 详细信息

目的　建立防止产物污染的UDPE(UDG -DuplexPCR -EIA)技术 ,用于检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌。方法　选择类鼻疽伯克霍尔德氏菌FUR(FerricUptakeRegulator)基因为靶序列 ,设计两对引物进行PCR扩增 ,用UDG(尿嘧啶糖基化酶 )防止PCR产物污染 ,并用微孔板杂交 -酶联显色检测扩增的PCR产物片段 ;用不同的模板考察方法的特异性和灵敏度。结果　该检测系统可以特异性地检测类鼻疽伯克霍尔德氏菌 ;对于纯DNA模板 ,检测灵敏度可以达到 10fg/ μl;对于系列稀释菌液提取的模板 ,灵敏度可达 0 1个菌 / μl;对于模拟污水标本、模拟组织标本和模拟土壤标本的检测灵敏度分别为 10个菌 / μl,10 0个菌 / μl和 10 0个菌 / μl;检测系统可以防止 10 9个PCR产物分子的污染 ;检测系统可以在 37℃下稳定保存 7d。结论　本研究建立了稳定的 ,防止产物污染。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德氏菌尿嘧啶糖基化酶 UDG PCR 微孔板杂交 UDPE

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若干需氧芽孢杆菌芽孢脂肪酸成分分析

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微生物学通报 2001年第1期28卷 23-28页

作者：宋亚军杨瑞馥郭兆彪彭清忠张敏丽周方军事医学科学院国家生物医学分析中心分析微生物实验室北京100071

51株需氧芽孢杆菌纯化后的芽孢培养物经处理抽提全细胞脂肪酸甲酯 ,用于气相色谱分析 ,同时以相应的繁殖体作为对照。芽孢脂肪酸成分的重现性实验发现 ,芽孢的脂肪酸成分比较稳定。将脂肪酸百分含量编制成原始数据矩阵 ,以 Statistica5.... 详细信息

51株需氧芽孢杆菌纯化后的芽孢培养物经处理抽提全细胞脂肪酸甲酯 ,用于气相色谱分析 ,同时以相应的繁殖体作为对照。芽孢脂肪酸成分的重现性实验发现 ,芽孢的脂肪酸成分比较稳定。将脂肪酸百分含量编制成原始数据矩阵 ,以 Statistica5.0统计软件进行聚类分析 ,得到两张分别基于芽孢脂肪酸成分和繁殖体脂肪酸成分的实验菌株树状聚类图。通过对比这两张图可以得出一些有意义的结论 ,同时也说明芽孢脂肪酸分析可望成为需氧芽孢杆菌化学分类的新手段。

关键词：需氧芽孢杆菌芽孢脂肪酸气相色谱树状聚类图成分分析

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用随机扩增DNA多态性制备李斯特菌属特异探针

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中华医学检验杂志 1998年第5期21卷 291-293页

作者：汪晓辉郭兆彪张敏丽杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学中心分析微生物实验室

目的研究一种在微生物遗传背景不清楚情况下，快速制备探针的新方法。方法采用随机扩增ＤＮＡ多态性技术随机扩增李斯特菌基因组，将其中的单核细胞增生李斯特菌扩增产物克隆制备ＤＮＡ探针，探针用聚合酶链反应标记上３２Ｐ，与李斯特... 详细信息

目的研究一种在微生物遗传背景不清楚情况下，快速制备探针的新方法。方法采用随机扩增ＤＮＡ多态性技术随机扩增李斯特菌基因组，将其中的单核细胞增生李斯特菌扩增产物克隆制备ＤＮＡ探针，探针用聚合酶链反应标记上３２Ｐ，与李斯特菌和非李斯特菌进行菌落原位杂交鉴定其特异性。结果获得一长度为８５０ｂｐ，能与所有李斯特菌特异杂交而不与非李斯特菌反应的李斯特菌属特异探针。结论随机扩增ＤＮＡ多态性技术为快速制备微生物ＤＮＡ探针提供了一种新途径。

关键词：李斯特菌随机扩增 DNA探针 DNA多态性

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五对聚合酶链反应引物检测解脲脲原体的比较

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中华医学检验杂志 1997年第1期20卷 38-40页

作者：张敏丽郭兆彪杨瑞馥汪晓辉军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学中心分析微生物实验室

目的筛选解脲脲原体（ＵＵ）尿素酶基因上的不同引物及扩增模板区，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＵＵ１～１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程... 详细信息

目的筛选解脲脲原体（ＵＵ）尿素酶基因上的不同引物及扩增模板区，使扩增敏感性达到最佳。方法以ＵＵ尿素酶基因为靶序列，设计５对引物，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＵＵ１～１４个血清型和系列稀释的ＵＵ８ＤＮＡ，用ＯＬＩＧＯ程序分析引物序列与ＰＣＲ敏感性间的关系。结果不同种的引物对１４个血清型的扩增结果有差异。引物Ｕ１＋Ｂ、Ｕ１＋２、ＵＡ＋Ｂ、Ｕ２＋Ａ及Ｕ１＋Ｃ对１４个血清型的检出率分别为１００％、８６％、７８％、６４％及６４％。结论引物自由能谱之差影响着ＰＣＲ扩增的敏感性。

关键词：解脲脲原体聚合酶链反应引物血清型

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用尿嘧啶糖基化酶预防PCR污染的研究

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中国兽医科技 1999年第3期29卷 12-13页

作者：郭兆彪张敏丽汪晓辉杨瑞馥侯顺利军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物分析中心分析微生物实验室

利用尿嘧啶糖基化酶（ＵＤＧ）能特异性地降解ＤＮＡ双链中的尿嘧啶核苷的作用，在ＰＣＲ体系中以ｄＵＴＰ代替ｄＴＴＰ使产物中掺入ｄＵＴＰ，在ＰＣＲ扩增前用ＵＤＧ水解，即可特异性地预防ＰＣＲ产物的污染。引用该酶消化建立的防污... 详细信息

利用尿嘧啶糖基化酶（ＵＤＧ）能特异性地降解ＤＮＡ双链中的尿嘧啶核苷的作用，在ＰＣＲ体系中以ｄＵＴＰ代替ｄＴＴＰ使产物中掺入ｄＵＴＰ，在ＰＣＲ扩增前用ＵＤＧ水解，即可特异性地预防ＰＣＲ产物的污染。引用该酶消化建立的防污染ＰＣＲ体系，０．１Ｕ的ＵＤＧ即可预防１０３～１０１０产物分子污染，并用于动物标本中土拉热弗朗西丝氏菌的检测。

关键词： PCR 污染尿嘧啶糖基化酶

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从动物和土壤中直接检测鼠疫耶尔森氏菌

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中国地方病学杂志 2000年第1期19卷 65-68页

作者：张敏丽郭兆彪宋亚军汪晓辉王津杨瑞馥丛显斌军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学分析中心分析微生物实验室北京100071 全国鼠疫布氏菌病防治基地吉林137000

目的　探讨用防污染的 PCR- EL ISA(U DPE)技术检测人为污染的土壤和感染的动物标本的可行性。方法　根据鼠疫耶尔森氏菌 Cafl和 Pla基因分别设计了 3条引物 ,组合成 3对引物 ,建立 U DPE检测技术。结果　利用该实验体系可以检出每克土... 详细信息

目的　探讨用防污染的 PCR- EL ISA(U DPE)技术检测人为污染的土壤和感染的动物标本的可行性。方法　根据鼠疫耶尔森氏菌 Cafl和 Pla基因分别设计了 3条引物 ,组合成 3对引物 ,建立 U DPE检测技术。结果　利用该实验体系可以检出每克土壤中 10 0 0个鼠疫耶尔森氏菌的污染。比检测纯细菌的敏感性低 2 0 0倍 ,说明土壤中有抑制 PCR反应的因子。对 2 0只实验组动物 40份标本 (肝脏和脾脏 )的培养、U DPE和 PCR-电泳检测表明 ,3种方法的检出吻合率为 10 0 % ,均能从 40份标本中检出靶细菌 ,而用 3种方法检测对照组动物的 2 0份肝脏和脾脏均为阴性。结论　利用

关键词：鼠疫耶尔森氏菌土壤动物聚合酶链反应

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PCR指纹图技术筛选鼠疫耶尔森菌种特异性探针的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 365-368页

作者：宋亚军王津徐涛宫占威郭兆彪张敏丽杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学分析中心分析微生物学实验室军事医学科学院基础医学研究所兰州军区联勤部医学研究所

目的　利用PCR指纹图技术筛选细菌种特异性探针 ,探索利用PCR指纹图技术实现病原菌通用检测的可能性。方法　以鼠疫耶尔森菌为实验对象 ,利用REP 1和REP 2引物对在非严谨的条件下进行PCR指纹图扩增 ;将所有扩增片段纯化后 ,克隆至pGEM ... 详细信息

目的　利用PCR指纹图技术筛选细菌种特异性探针 ,探索利用PCR指纹图技术实现病原菌通用检测的可能性。方法　以鼠疫耶尔森菌为实验对象 ,利用REP 1和REP 2引物对在非严谨的条件下进行PCR指纹图扩增 ;将所有扩增片段纯化后 ,克隆至pGEM T载体 ,转化大肠杆菌JM10 9;用生物素化的载体引物扩增克隆化片段 ,进行末端标记 ;在硝酸纤维素膜上固定鼠疫杆菌的染色体DNA以及相应对照菌株的染色体DNA ,以末端标记的扩增产物进行杂交 ,通过生物素链霉亲和素辣根过氧化物酶系统显色 ,判断扩增片段的特异性。结果　经杂交筛选 ,发现 1个长度约为 90 0bp的扩增具有较好的杂交特异性片段 ,将序列与鼠疫耶尔森菌已完成的基因组序列比较 ,仅发现 4个核苷酸的差异 ;根据这段序列设计的引物对可以特异性地扩增鼠疫耶尔森菌的模板。结论　利用PCR指纹图技术成功筛选到一段鼠疫耶尔森菌的种特异性探针 ,为细菌通用检测技术的研究开辟了新的思路。

关键词：种特异性探针鼠疫耶尔森菌 PCR指纹图微生物检测

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橡树岭军团菌的分离及用16S rDNA测序法的鉴定

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微生物学免疫学进展 1999年第1期27卷 1-5页

作者：杨瑞馥汪晓辉李崇辉郭兆彪张敏丽周方高树德军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学分析中心分析微生物实验室

军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能... 详细信息

军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能定种。由于核酸分析技术和细菌鉴定观念上进步，使我们能根据１６ＳｒＤＮＡ序列比较推测细菌间进化关系，并进而对未知细菌进行鉴定和检测。我们用以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列的ＰＣＲ和测定鉴定，确定了该分离株为橡树岭军团菌（Ｌ．ｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）。

关键词： 16SrDNA 测序 PCR 橡树岭军团菌

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聚合酶链反应-微孔板杂交技术用于结核分枝杆菌的检测

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中华医学检验杂志 1998年第5期21卷 285-287页

作者：杨正林杨瑞馥杜琼郭兆彪张敏丽汪晓辉杨明清四川省人民医院检验科军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学中心分析微生物实验室

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶... 详细信息

目的建立结核分枝杆菌的ＰＣＲ酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法，使ＰＣＲ结果判定更加客观。方法我们使用玻璃粉吸附提纯模板ＤＮＡ，将ＰＣＲ引物５′端标记生物素，用ＰＣＲ产物与微孔板中预先包被的克隆靶基因杂交，然后用酶标链霉亲和素与杂交体中的生物素结合，最后用酶底物与所标记酶进行显色反应，通过测定其吸光度来判断结果。结果所建立的ＰＣＲＥＬＩＳＡ检测法可提高检测的灵敏度和特异性。对５０份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的标本检测表明，ＰＣＲＥＬＩＳＡ检出２２份阳性，比抗酸染色法（７／５０）、培养法（１３／５０）和ＰＣＲ电泳法（１８／５０）检出率高，而２０份证实无结核分枝杆菌的标本，几种方法检查均为阴性。结论该法可敏感、特异和客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌。

关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应 ELISA

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炭疽芽孢DNA适配子结构与长度对亲和力的影响

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第四军医大学学报 2002年第16期23卷 1467-1470页

作者：甄蓓宋亚军郭兆彪王津俞守义杨瑞馥第一军医大学流行病学教研室广东广州510515 军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学分析中心分析微生物学实验室北京100071

目的　研究炭疽芽孢适配子结构与长度变化对其与芽孢之间亲和力的影响 .方法　人工合成 f77- 1适配子序列 ,并构建在其 7条突变体序列 ,将这些寡核苷酸序列分别与炭疽芽孢结合 ,利用 TMB显色系统判断读取吸光度 A值 ,确定各序列与芽孢... 详细信息

目的　研究炭疽芽孢适配子结构与长度变化对其与芽孢之间亲和力的影响 .方法　人工合成 f77- 1适配子序列 ,并构建在其 7条突变体序列 ,将这些寡核苷酸序列分别与炭疽芽孢结合 ,利用 TMB显色系统判断读取吸光度 A值 ,确定各序列与芽孢间亲和力大小 ;同时通过核酸序列分析软件包模拟各序列的二级结构 ,推断适配子的结构与亲和力之间的关系 .结果　适配子 f77- 1与突变体中的 f77- 3与芽孢亲和力较好 ,约是突变体中 f77- 4亲和力的 1 1倍 ,二级结构显示 :f77- 1 ,f77- 3都具有茎环或发卡结构 ,且 3'端都有连续 3个G.结论　适配子 5'端的茎环结构和发卡结构是这些寡核苷酸序列与芽孢结合的结构基础 ,3'端的连续 3个

关键词：炭疽芽孢 DNA 适配子结构长度亲和力炭疽芽孢杆菌

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