检索结果-内蒙古大学图书馆

中华传染病杂志 2003年第4期21卷 256-259页

作者：谢建平李瑶乐军徐永忠梁莉于善谦王洪海复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

目的　调查人巨噬细胞肿瘤坏死因子受体 (TNFR)相关信号传导元件在结核分枝杆菌入侵前后的转录水平和变化幅度。方法　利用含有 12 80 0个基因和 192 0 0个基因全长序列或部分序列的基因芯片研究结核分枝杆菌无毒株和有毒株入侵导致的... 详细信息

目的　调查人巨噬细胞肿瘤坏死因子受体 (TNFR)相关信号传导元件在结核分枝杆菌入侵前后的转录水平和变化幅度。方法　利用含有 12 80 0个基因和 192 0 0个基因全长序列或部分序列的基因芯片研究结核分枝杆菌无毒株和有毒株入侵导致的人巨噬细胞U937全基因组在转录水平的表达谱变化的基础上 ,然后 ,在Northern验证的基础上 ,通过生物信息学分析TNFR相关信号传导元件的表达。结果　结核分枝杆菌无毒株入侵导致的人巨噬细胞U937中与TNFR有关的表达变化不如有毒株的明显 ,TNFR被抑制 ,与TNFR相关的下游基因的表达没有检测到。有毒株导致的变化比较明显 ,MAP激酶 ,NF kappaB ,caspase ,p5 3途径等下游元件的表达分别提高 2～ 3倍 ,内源TNF表达上升 2～ 4倍 ,TNF的转换酶disintegrin金属蛋白酶表达上升 2倍。结论　TNFR相关的信号传导途径元件参与了宿主对细菌的免疫反应 ,这些基因在转录水平被调控。结核分枝杆菌有毒株比无毒株激发的基因表达变化大。造成这种差异的原因有待进一步分析。

关键词：结核杆菌巨噬细胞肿瘤坏死因子受体信号传导结核病生物信息学

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腺病毒同源重组子的鉴定

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复旦学报（自然科学版） 1996年第6期35卷 607-612页

作者：徐人尔应蓓蓓赵寿元李昌本遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传学研究所

携带入ＩＦＮ－γｃＤＮＡ序列的Ｅ１区缺失的腺病毒载体ｐＡｄ１２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ｐＪＭ１７质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染２９３细胞，经同源重组，共获得６个病毒噬斑．病毒噬斑感染２９３细胞，至出现完全细胞病变效应... 详细信息

携带入ＩＦＮ－γｃＤＮＡ序列的Ｅ１区缺失的腺病毒载体ｐＡｄ１２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ｐＪＭ１７质粒，通过磷酸钙沉淀法共转染２９３细胞，经同源重组，共获得６个病毒噬斑．病毒噬斑感染２９３细胞，至出现完全细胞病变效应（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ，ＣＰＥ）后，抽提细胞内的病毒ＤＮＡ，经ＸｈｏⅠ酶切后走凝胶电泳，出现重组腺病毒特有的３．５ｋｂ大小的ＤＮＡ条带．３２Ｐ标记的探针ｐＡｄ１２／ＲＳＶ－ＩＦＮ－ｂｐＡ与ＸｈｏⅠ酶切过的病毒ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交，显示出与预期相符的重组腺病毒特有的三条ＤＮＡ片段的杂交信号，大小分别约为３００ｂＰ、５００ｂＰ和３·５ｋｂ；同时，病毒感染人的２９３细胞培养液上清作ＰＣＲ检测，都扩增出ＩＦＮ－γｃＤＮＡ和腺病毒ＤＮＡＥ２Ｂ区特异的两条ＤＮＡ条带，证实这６个病毒噬斑均为带有ＩＦＮ－γ的重组腺病毒．

关键词：腺病毒同源重组鉴定

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人肿瘤坏死因子衍生物b cDNA的构建与表达

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生物工程学报 1999年第2期15卷 189-195页

作者：邵轶虹喻红庄黎林丽珠赵寿元李昌本复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

构建了人肿瘤坏死因子缺失１～７位和１０２～１０７位共１３个氨基酸编码序列的ｃＤＮＡ，即人肿瘤坏死因子衍生物ｂ（ｒｈＴＮＦαＤｂ），转化大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱导后，目的蛋白的表达量占菌体总蛋白量的３０％～６０％。... 详细信息

构建了人肿瘤坏死因子缺失１～７位和１０２～１０７位共１３个氨基酸编码序列的ｃＤＮＡ，即人肿瘤坏死因子衍生物ｂ（ｒｈＴＮＦαＤｂ），转化大肠杆菌ＢＬ２１，ＩＰＴＧ诱导后，目的蛋白的表达量占菌体总蛋白量的３０％～６０％。其中可溶性ｒｈＴＮＦαＤｂ蛋白约占超声上清总蛋白的４０％。经柱层析纯化后，目的蛋白纯度达９５％以上。以Ｌ９２９细胞株检测ｒｈＴＮＦαＤｂ的细胞毒活性，测得ｒｈＴＮＦαＤｂ的比活性为２×１０８ＩＵ／ｍｇ。较ｒｈＴＮＦα原型提高一个数量级。ｒｈＴＮＦαＤｂ的体内外抑瘤试验也取得了初步结果。

关键词：肿瘤坏死因子衍生物表达抑瘤活性 cDNA构建

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一个耐热碱性磷酸酯酶突变型的研究

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Acta Genetica Sinica 2000年第4期27卷 361-368页

作者：袁有忠赵思汇周宗祥季朝能盛小禹毛裕民复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

为了进一步揭示蛋白质的耐热机制，对含有耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）的表达质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ进行了随机诱变，用菌落原位显色法从约５０００个转化子中筛选到４个耐热性下降的突变型克隆，并对其中１个克隆（ＴＡＰＭ３）进... 详细信息

为了进一步揭示蛋白质的耐热机制，对含有耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）的表达质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ进行了随机诱变，用菌落原位显色法从约５０００个转化子中筛选到４个耐热性下降的突变型克隆，并对其中１个克隆（ＴＡＰＭ３）进行了部分酶学性质、ＤＮＡ和氨基酸序列的研究。酶学性质研究表明，与野生型相比，该突变型酶的耐热性有较大幅度的下降，而热激活性无明显改变。ＤＮＡ序列分析表明在１２３９位ＴＡＰＭ３发生Ｇ→Ａ转换，导致４２７位的甘氨酸变为丝氨酸（Ｇ４２７５），这种突变对酶的耐热性、米氏常数、活化能影响较为明显。这说明只须１个氨基酸置换就会对蛋白质耐热性变化起巨大作用，并且氨基酸残基侧链的大小、电荷等能使蛋白质结构松散的性质，会导致蛋白质耐热性下降。

关键词：耐热碱性磷酸酯酶随机诱变蛋白质耐热机制

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利用5′帽子亲和层析纯化IVT mRNA

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科学通报 2024年第33期69卷 4928-4938页

作者：杜彬荷林金钟复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438 复旦大学mRNA药物研发中心上海200438

mRNA作为指导蛋白质合成的活性分子,在翻译基础研究和mRNA药物研发中具有广阔的研究价值和应用前景.真核生物细胞质mRNA通常具有区别于其他类型RNA分子的5′端帽结构,在mRNA核转运、抵御核酸外切酶和介导翻译起始过程中发挥重要作用.无... 详细信息

mRNA作为指导蛋白质合成的活性分子,在翻译基础研究和mRNA药物研发中具有广阔的研究价值和应用前景.真核生物细胞质mRNA通常具有区别于其他类型RNA分子的5′端帽结构,在mRNA核转运、抵御核酸外切酶和介导翻译起始过程中发挥重要作用.无帽mRNA分子在机体内引起严重的免疫反应,因此mRNA的加帽率是评判其成药性的核心指标.虽然加帽mRNA可以通过基于T7 RNAP的共转录加帽技术和基于牛痘加帽酶的酶法加帽技术获得,但仍缺乏精确分选加帽mRNA的底盘技术.针对这一现象,本研究选取了覆盖真核生物、古菌、病毒在内的18种帽结合蛋白进行表达纯化测试,并表征了热稳定性、帽结构亲和性等参数.从中筛选获得3种代表性帽结合蛋白进行加帽RNA的亲和层析测试,实验结果表明,Hs IF4E K119A和Ct IF4E可以有效地富集加帽RNA,并且可以通过改变盐浓度的方法实现加帽RNA的洗脱.本研究开发的基于帽结构的亲和层析技术具有成本低、效率高、易于放大的特征,有望为分选加帽mRNA提供新的解决方案.

关键词：帽结构帽结合蛋白亲和层析 mRNA纯化 mRNA药物

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α－球蛋白基因缺失的DNA扩增指纹图谱法分析

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复旦学报（自然科学版） 1996年第6期35卷 625-631页

作者：陈燃杨树青温俊娥王世平于女毛裕民遗传工程国家重点实验室复旦大学遗传学研究所

应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因簇中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断．该方法稳... 详细信息

应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因簇中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断．该方法稳定、可靠，可望用于临床诊断．

关键词：地中海贫血 α-珠蛋白基因 DNA 扩增指纹图谱

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耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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Acta Genetica Sinica 1998年第4期25卷 375-380页

作者：袁有忠盛小禹吕鸿雁佟石毛裕民复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

以pUC118质粒为载体,以*** TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus ***3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中筛选到... 详细信息

以pUC118质粒为载体,以*** TGl为受体,构建了产耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的菌株Thermus ***3041的染色体基因文库。在包含1.2万个转化子的文库中,90％的转化子插入有3～10kb的外源DNA片段。用菌落原位碱性磷酸酯酶显色法从文库中筛选到5个阳性克隆。对其中的1个克隆(pTAP362)所产的TAP进行了研究,发现克隆的TAP与出发菌株所产的TAP的热稳定性、最适反应温度和最适pH等性质都相同。通过做物理图谱和测定部分缺失的质粒的TAP活性,将TAP基因定位于2kb的BamHⅠ-HindⅢ DNA片段上。模拟PCR实验表明该酶可用于PCR扩增产物的检出。

关键词：基因克隆表达大肠杆菌 FD-TAP

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转基因棉花的Bt基因流

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Acta Genetica Sinica 2001年第6期28卷 562-567页

作者：沈法富于元杰张学坤毕建杰尹承佾山东农业大学植物遗传工程实验室泰安271018 山东省棉花研究中心济南250100

通过两年实验检测转基因陆地棉品种间和海岛棉与陆地棉种间的Ｂｔ基因流。将转基因陆地棉国抗１２号种植在１２ｍ×１２ｍ的样方内，周围分别种植非转基因陆地棉品种中棉所１２号和海岛棉品种新海１３号，在离转基因棉花不同距离选... 详细信息

通过两年实验检测转基因陆地棉品种间和海岛棉与陆地棉种间的Ｂｔ基因流。将转基因陆地棉国抗１２号种植在１２ｍ×１２ｍ的样方内，周围分别种植非转基因陆地棉品种中棉所１２号和海岛棉品种新海１３号，在离转基因棉花不同距离选取样点，采集非转基因棉花种子，利用标记选择基因、Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ扩增检测Ｂｔ基因流。结果表明：在０～６ｍ内陆地棉品种间显示较高频率的基因流，随着距离的增加Ｂｔ基因流降低，最大可达３６ｍ；提高样方内转基因棉花纯度，仅增加０～３ｍ内基因流，对较远距离基因流无影响。海陆种间Ｂｔ基因流在０～６ｍ内比陆地棉品种间低，但Ｂｔ基因流随距离增加下降幅度小，最远达７２ｍ。因此，在小规模转基因棉花环境释放实验，可选用同种不同品种棉花作为缓冲隔离带，并讨论了棉花转基因逃离至我国棉属种类的可能性。

关键词：转基因棉花 Bt基因流风险评价陆地棉海岛棉

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FD-TRT耐热逆转录酶的特性分析

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复旦学报（自然科学版） 1998年第2期37卷 225-228页

作者：殷长传颜学恒郑佐华黄啸宇毛裕民复旦大学遗传工程国家重点实验室上海

从嗜热细菌ＦＤ３００９中克隆并分离纯化得到的耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ），逆转录反应在６５℃高温下进行，可克服常温逆转录酶的许多缺点，以酵母核糖体ｒＲＮＡ为模板，以与２５５和１８ＳｒＲＮＡ匹配的寡聚脱氧核苷酸为引物... 详细信息

从嗜热细菌ＦＤ３００９中克隆并分离纯化得到的耐热逆转录酶（ＦＤ－ＴＲＴ），逆转录反应在６５℃高温下进行，可克服常温逆转录酶的许多缺点，以酵母核糖体ｒＲＮＡ为模板，以与２５５和１８ＳｒＲＮＡ匹配的寡聚脱氧核苷酸为引物，探明了ＦＤ－ＴＲＴ的最适反应条件：２５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．５，２５℃），２５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４，２ｍｍｏｌ／ＬＭｎＣｌ２，１００ μｇ／ｍｌ明胶．５ｕｎｉｔＲＮａｓｉｎ，２５０ｍｍｏｌ／Ｌ４种ｄＮＴＰ，１μＣｉ３Ｈ－ｄＣＴＰ，１２ｕｇＲＮＡ，２５ｐｍｏｌ引物，并在此条件下测得ＦＤ－ＴＲＴ和ＴａｑＤＮＡ聚合酶逆转录活力与聚合酶活力的相对比值分别为０．０５６，０．００４５．

关键词：耐热逆转录酶 FD-TRT DNA 逆转录反应

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林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶活力调节的研究

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微生物学报 2001年第4期41卷 481-488页

作者：金詟焦瑞身毛裕民中国科学院上海植物生理研究所复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433 复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室

对不同氮源生长条件下林肯链霉菌无细胞粗提液中谷氨酰胺合成酶 (GS)的研究结果表明 ,高浓度NH+4阻遏了GS的生物合成。从不同氮源生长条件下林肯链霉菌中分离纯化了GS ,其性质没有差别。以受腺苷化调节的产气克雷伯氏菌GS作对照 ,林肯... 详细信息

对不同氮源生长条件下林肯链霉菌无细胞粗提液中谷氨酰胺合成酶 (GS)的研究结果表明 ,高浓度NH+4阻遏了GS的生物合成。从不同氮源生长条件下林肯链霉菌中分离纯化了GS ,其性质没有差别。以受腺苷化调节的产气克雷伯氏菌GS作对照 ,林肯链霉菌GS没有明显的氨休克作用 ,经蛇毒磷酸二酯酶处理后 ,其活力没有变化。这些结果都说明林肯链霉菌GS不存在腺苷化共价修饰这一调节方式。反馈抑制作用是林肯链霉菌GS的一种重要的调节方式 ,这种抑制作用是以累积的方式进行的 ,这表明各种抑制剂对GS作用位点不同 ,各种抑制剂对GS的抑制作用是相互独立的。由此推测 ,林肯链霉菌GS是一种变构酶。

关键词：林肯链霉菌谷氨酰胺合成酶调节酶活性

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