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金针茹tps1基因序列分析及不同温度下tps1、tps2基因定量表达研究

食品工业科技 2015年第16期36卷 173-177页

作者：刘建辉张俊玲李亮尚晓冬谭琦上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所、上海市农业遗传育种重点开放实验室、农业部南方食用菌资源利用重点实验室、国家食用菌工程技术研究中心

研究探讨金针菇海藻糖合成相关酶基因及其功能，为进一步揭示其生长发育过程中的变化规律奠定基础。本研究对金针菇6-磷酸海藻糖合成酶基因tps1的序列进行分析，并以金针菇孢子单核体菌株Dan3为实验材料，采用实时荧光定量PCR技术比较了... 详细信息

研究探讨金针菇海藻糖合成相关酶基因及其功能，为进一步揭示其生长发育过程中的变化规律奠定基础。本研究对金针菇6-磷酸海藻糖合成酶基因tps1的序列进行分析，并以金针菇孢子单核体菌株Dan3为实验材料，采用实时荧光定量PCR技术比较了tps1、tps2基因在不同温度变化下金针菇中的相对表达量差异。结果表明，金针菇tps1基因cDNA序列包含1455bp的ORF，编码1个由484个氨基酸残基组成的蛋白质；对其起始密码子上游2000bp调控区域进行分析，发现具有典型的热激反应元件（HSE，C4T）和压力反应元件（STRE，AG4）等调控元件；实时荧光定量PCR结果显示，相对于对照组21℃处理，37℃高温及4℃低温处理2h后，tps1、tps2基因相对表达量均有显著（P〈0．05）升高。说明tps1、tps2基因在转录水平上受到温度调控。

关键词：金针菇温度 tpst1 tps2 实时荧光定量PCR 生物信息学

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桑黄醇提物促进ROS的释放并诱导SW620结肠癌细胞的自体凋亡的研究

桑黄醇提物促进ROS的释放并诱导SW620结肠癌细胞的自体凋亡的研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：汪雯翰樊华张劲松杨焱赵香丽张凯吴迪颜梦秋贾薇农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

以灰树花,猴头,杏鲍菇,鸡腿菇,北虫草,灵芝,香菇和杨树桑黄九种食用菌作为研究对象,通过比较九种食用菌醇提物对SW620肿瘤细胞增殖、细胞周期、早期凋亡和细胞形态、来评价各种食用菌的抗SW620肿瘤活性。研究结果表明桑黄醇提物对SW620... 详细信息

以灰树花,猴头,杏鲍菇,鸡腿菇,北虫草,灵芝,香菇和杨树桑黄九种食用菌作为研究对象,通过比较九种食用菌醇提物对SW620肿瘤细胞增殖、细胞周期、早期凋亡和细胞形态、来评价各种食用菌的抗SW620肿瘤活性。研究结果表明桑黄醇提物对SW620的的增殖有明显的抑制,并优于其他食用菌的醇提物。进一步通过桑黄醇提物对SW620的细胞周期、早期凋亡、细胞形态和ROS释放的影响、研究探讨其的作用机理。研究发现桑黄能诱导SW620细胞的凋亡并引起细胞周期变化,呈现出浓度梯度依赖性。ROS实验结果提示桑黄的促肿瘤细胞凋亡与ROS释放相关。

关键词：醇提物 SW620 ROS 结肠癌细胞

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运用SNP-CAPS分子标记定位香菇重要功能基因的研究

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上海农业学报 2015年第2期31卷 13-17页

作者：黄杰谭琦鲍大鹏国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点开放实验室上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306

根据香菇单核菌丝体135A和135B的全基因组测序,通过生物信息学方法分析筛选出香菇功能基因CAP、GLA1、TLG1结构域中的非同义SNP位点,开发出3对SNP-CAPS分子标记。结果表明:这3对功能基因SNP-CAPS分子标记可将23个香菇单核体供试菌株分成... 详细信息

根据香菇单核菌丝体135A和135B的全基因组测序,通过生物信息学方法分析筛选出香菇功能基因CAP、GLA1、TLG1结构域中的非同义SNP位点,开发出3对SNP-CAPS分子标记。结果表明:这3对功能基因SNP-CAPS分子标记可将23个香菇单核体供试菌株分成135A型(分别为16株、20株、2株)和135B型(分别为7株、3株、21株),这些标记表现出的多态性为进一步研究香菇菌株的来源和功能基因的定位提供参考价值;并建立起可以简单、快速、准确地调查重要功能基因的SNP位点变异情况的方法。

关键词：香菇功能基因非同义 SNP SNP-CAPS 标记

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桑黄子实体和菌丝体中次级代谢物的分离纯化和生物活性的研究

桑黄子实体和菌丝体中次级代谢物的分离纯化和生物活性的研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：杨焱邵倩吴娜冯娜张超汪雯翰张劲松唐传红农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所

桑黄纤孔菌Inonotus sanghuang Sheng ***,***.&***,俗称桑黄菇、桑耳,是近年来开发的一种寄生于桑树的多年生药用真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中,《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分... 详细信息

桑黄纤孔菌Inonotus sanghuang Sheng ***,***.&***,俗称桑黄菇、桑耳,是近年来开发的一种寄生于桑树的多年生药用真菌,最早收载于李时珍《本草纲目》中,《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分,在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复等方面有活性作用。对桑黄中次级代谢物的研究已有一些报道,但多以子实体中的为主,菌丝体中报道的较少。对于子实体和菌丝体生长过程中产生的次级代谢物有何差异,目前还鲜有报道,菌丝体的功效是否可替代子实体也尚不明确。本研究以我们收集、保藏并进行分子鉴定的桑黄菌株Inonotus sanghuang为研究对象,分别进行了子实体栽培和液体及固体发酵培养,对栽培子实体和发酵菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化和抑制肿瘤细胞生长、抗氧化、抗衰老及体外降血糖活性研究。分别用等体积的石油醚,氯仿,乙酸乙酯和正丁醇依次萃取桑黄子实体醇提物,得到四种有机溶剂萃取相。以体外修复受损神经细胞和清除自由基能力为指标进行有效部位的筛选。实验结果表明:四个萃取相的抗衰老能力存在一定的差异。其中乙酸乙酯相和正丁醇相的活性要好于其他两个萃取相。乙酸乙酯和正丁醇与损伤的神经细胞之间均有显著性差异(P<0.05)。乙酸乙酯相清除超氧阴离子,过氧化氢和DPPH的IC50值分别为589.17μg/mL,5.60μg/mL,209.00μg/mL。正丁醇相清除三种自由基的IC50值分别为:483.12μg/mL,0.42μg/mL,56.22μg/mL。用硅胶、Sephadex LH-20等柱层析手段对抗衰老活性较高的乙酸乙酯相进行分离纯化,经过柱层析和重结晶反复纯化,得到11个单一化合物。对纯化后的样品进行1H NMR,13C NMR,DEPT,1H-1HCOSY,HMQC等波谱分析并结合相关文献报道数据,鉴定出六种化合物,它们分别为:星鱼甾醇,麦角甾-6,22-二烯-3β,5α,8α-三醇,灵芝醇B,灵芝酸DM,Inoscavin A,麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五烷酸酯。除了灵芝酸DM,其余的化合物对肿瘤细胞K562的生长具有很好的抑制作用。利用液体发酵、木屑固体发酵和米饭固体发酵三种方式培养桑黄菌丝体,对菌丝体醇提物的体外抗氧化、抗肿瘤和抗衰老生物活性进行了研究。结果发现,木屑固体发酵、液体发酵和米饭固体发酵的菌丝体醇提物清除H2O2自由基的IC50值分别为78.28±0.32、27.73±0.57和7.84±0.37μg/mL;米饭培养的桑黄菌丝体醇提物在低浓度500μg/mL下对超氧阴离子自由基清除作用到达80%,在相同的浓度下对DPPH自由基清除率也明显高于其它两种方法,表现出较高的抗氧化活性。木屑以及米饭培养方法得到的菌丝体对PC12神经细胞损伤修复均有较好的效果,液体培养的桑黄菌丝体表现的修复作用较低;液体发酵培养的菌丝体醇提物浓度在100μg/mL时,对肿瘤细胞HepG2的抑制率到达70%,高于其他两种培养方法的抑制作用。采用有机溶剂萃取、硅胶柱分离和高速逆流色谱法对固体发酵培养的桑黄菌丝体中的次级代谢物进行了分离纯化,经硅胶柱分离纯化出6个化合物,利用红外光谱(IR)、紫外光谱(UV),质谱(MS)及核磁共振技术(NMR)对分离纯化出的化合物进行了结构解析。经鉴定其中2个化合物为脂肪酸,其余化合物分别为Ergosterol麦角甾醇,Ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate,原儿茶醛Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛;经高速逆流色谱法结合硅胶柱层析纯化出7个化合物,分别为Inoscavin A,24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol,Baicalein,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside,Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛。对得到的化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长和抗氧化活性实验,结果表明:Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛,Inoscavin A,Naringenine-7-rhamnosidoglucoside和Baicalein在抗肿瘤和抗氧化实验中都表现出较好的活性,对K562细胞的抑制作用效果明显。在清除过氧化氢实验中,柚皮苷和黄芩素在浓度80μg/mL时,清除率就达到70%左右。采用细胞来源的二肽基肽酶Ⅳ抑制剂筛选模型对桑黄子实体和菌丝体中分离的化合物进行了体外降血糖活性研究,子实体化合物麦角甾-7,22-二烯-3β-醇十五酸酯和麦角甾-7,-二烯-3β-醇对DPPIV抑制效果最佳;菌丝体化合物中原儿茶醛、柚皮

关键词：桑黄子实体菌丝体发酵培养次级代谢物生物活性

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香菇主要育种技术研究进展

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生物学杂志 2015年第2期32卷 92-95页

作者：赵妍林锋宋春艳谭琦尚晓冬陈明杰上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306

香菇是仅次于双孢蘑菇的世界第二大类食用菌,在中国食用菌产业中占有举足轻重的地位。综述了香菇的主要育种技术及其应用研究进展,包括人工选择育种、杂交育种、诱变育种、原生质体融合育种、基因工程育种以及分子标记辅助育种等,并针... 详细信息

香菇是仅次于双孢蘑菇的世界第二大类食用菌,在中国食用菌产业中占有举足轻重的地位。综述了香菇的主要育种技术及其应用研究进展,包括人工选择育种、杂交育种、诱变育种、原生质体融合育种、基因工程育种以及分子标记辅助育种等,并针对当前香菇产业发展需求,对香菇育种今后的发展方向进行了展望。

关键词：香菇育种技术育种趋势

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香菇单孢杂交及耐高温杂交子的ISSR分析

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微生物学杂志 2015年第4期35卷 35-39页

作者：王丽宁赵妍陈明杰上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所上海市农业遗传育种重点开放实验室农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海201403

以香菇菌株L135和P18N44为亲本进行单孢杂交,通过显微镜镜检锁状联合以及与亲本的拮抗试验初步获得123个杂交子。以47℃热激3 h后菌丝在PDA培养基中的恢复生长情况进行初筛,菌丝在木屑培养基中经历33℃高温后的恢复长速进行复筛,共筛选... 详细信息

以香菇菌株L135和P18N44为亲本进行单孢杂交,通过显微镜镜检锁状联合以及与亲本的拮抗试验初步获得123个杂交子。以47℃热激3 h后菌丝在PDA培养基中的恢复生长情况进行初筛,菌丝在木屑培养基中经历33℃高温后的恢复长速进行复筛,共筛选获得耐高温杂交子12个。选用8条引物对12个耐高温杂交子和2个亲本进行了ISSR标记分析,结果表明这12株耐高温杂交子与亲本都存在一定的遗传差异,说明与亲本相比杂交子在基因水平上发生了不同程度的重组,是新的香菇耐高温菌株。

关键词：香菇单孢杂交耐高温 ISSR分析

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草菇VH3菌株及其单孢后代间的差异分析

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生物学杂志 2015年第4期32卷 11-15页

作者：林锋赵妍陈明杰颜素雅王丽宁黄金丽国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306

从菌落形态、菌丝生长速度及RAPD分析等方面，研究草菇菌株VH3及其14个单孢菌株间的生长与遗传差异。研究结果显示，这些供试菌株的菌落形态、菌丝长势、菌丝生长速度存在较大差异；通过RAPD指纹分析，发现VH3及其单孢菌株的遗传相似系... 详细信息

从菌落形态、菌丝生长速度及RAPD分析等方面，研究草菇菌株VH3及其14个单孢菌株间的生长与遗传差异。研究结果显示，这些供试菌株的菌落形态、菌丝长势、菌丝生长速度存在较大差异；通过RAPD指纹分析，发现VH3及其单孢菌株的遗传相似系数在0.50~0.96之间，在基因水平上供试菌株间的遗传差异较大。草菇菌株VH3及其单孢后代的表型与基因型均存在显著性差异，表明VH3菌株借助有性生殖过程获得了丰富的生物学变异。

关键词：草菇表型 RAPD分析遗传差异

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不同培养条件获得的樟芝菌丝体活性研究

不同培养条件获得的樟芝菌丝体活性研究

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：贾薇汪雯翰林婉珍张劲松上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

樟芝是原产台湾的一种珍稀药用真菌,有"台湾森林中之红宝石"的美誉。现代研究发现,樟芝子实体及菌丝体提取物具有很好的保肝、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、解毒等功效,被越来越多的人所关注。樟芝生长速度缓慢,且迄今无法完全... 详细信息

樟芝是原产台湾的一种珍稀药用真菌,有"台湾森林中之红宝石"的美誉。现代研究发现,樟芝子实体及菌丝体提取物具有很好的保肝、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、解毒等功效,被越来越多的人所关注。樟芝生长速度缓慢,且迄今无法完全人工培养,而樟芝的宿主-牛樟树（台湾重点保护树种）却遭到了大量的砍伐,野生樟芝的价格也日渐水涨船高,目前被称为全世界市场上最昂贵的野生真菌之一,市价高达每公斤15000美元,可说是药材中的王中王。因此以固体栽培和液体深层培养方式生产樟芝菌丝体及其代谢产物替代樟芝子实体的生物技术,就成为十分值得开发的途径。本研究以樟芝固体栽培菌丝体和液体发酵菌丝体为原料,利用有机溶剂对菌丝体进行分步萃取和水提醇沉,分级得到不同的提取物,体外生物活性实验表明,樟芝不同栽培方式获得的菌丝体有机溶剂萃取相具有明显的体外抗肿瘤活性,特别是固体栽培提取物的活性更好,且无明显细胞毒作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑菌方面固体培养萃取相作用也非常明显,水提醇沉粗多糖都对小鼠巨噬细胞RAW164.7具有很好免疫调节的作用。

关键词：樟芝菌丝体活性

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运用SNP分子标记构建香菇遗传连锁图谱及分析QTL

运用SNP分子标记构建香菇遗传连锁图谱及分析QTL

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中国菌物学会2015年学术年会

作者：林范学李宏盛黄杰谭琦鲍大鹏国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所济宁学院生命科学与工程系

本研究以香菇135菌株的2个原生质体单核体135A菌株和135B菌株以及46个孢子单核体为构图群体,通过solexa高通量测序获得基因组序列,对135A和135B进行了组装,组装后的基因组大小分别是37.9Mb和38.9Mb。以135A菌株的基因组序列为参考序列,... 详细信息

本研究以香菇135菌株的2个原生质体单核体135A菌株和135B菌株以及46个孢子单核体为构图群体,通过solexa高通量测序获得基因组序列,对135A和135B进行了组装,组装后的基因组大小分别是37.9Mb和38.9Mb。以135A菌株的基因组序列为参考序列,通过对135B菌株和46个子代的基因组序列和筛选,获得了136,411个SNP位点。以2255个SNP位点和A、B交配型位点为标记构建出一张香菇遗传连锁图,包括14个连锁群,总长度为1553.78cM。根据SNP标记所在的scaffold,将531条scaffold（总长度为23.69 Mb）定位在14条连锁群上,覆盖62.47%的香菇135A菌株的基因组,物理长度和遗传距离之比为15.37kb/cM。以上述构图群体为定位群体,检测到了3个控制香菇单核菌丝体生长速度的QTL,其中在LG2上检测到了一个显著的QTL（Qmmgr-3）,其贡献率为28.8%,与交配型A位点连锁。通过生物信息学分析Qmmgr-3位点附近的DNA序列信息,筛选获得了控制香菇单核菌丝体生长速度的3个候选基因（Le-TDC,Le-CH和Le-CP）。RT-PCR分析表明Le-CP基因在长速快的菌株中和长速慢的菌株中的表达水平存在显著差异。

关键词：香菇 SNP分子标记遗传连锁图谱 QTL

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基于全基因组系统发生的草菇基因家族显著扩增

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微生物学报 2014年第9期54卷 992-997页

作者：龚明谭琦陈明杰鲍大鹏汪虹国家食用菌工程技术研究中心农业部南方食用菌资源利用重点实验室上海市农业遗传育种重点开放实验室上海市农业科学院食用菌研究所上海201403

【目的】从基因组层次研究草菇低温自溶异常代谢的分子特征。【方法】对21个真菌物种进行全基因组系统发生分析,进而选取其中具有代表性的物种进行比较基因组学分析,系统研究草菇异常代谢分子特征。【结果】全基因组系统发生分析结果显... 详细信息

【目的】从基因组层次研究草菇低温自溶异常代谢的分子特征。【方法】对21个真菌物种进行全基因组系统发生分析,进而选取其中具有代表性的物种进行比较基因组学分析,系统研究草菇异常代谢分子特征。【结果】全基因组系统发生分析结果显示草菇位于草腐菌所形成簇的底端。基于全基因组系统发生树,由于担子菌和子囊菌属于完全不同的演化路径,所以选取担子菌中具有代表性的9个物种进行比较基因组学分析,结果显示相比于其它草腐菌,草菇基因家族具有一定的收缩趋势。进一步对不同范畴的基因家族数目进行比较,结果显示3个大于200的草菇基因家族(fam1、fam4和fam6)分别发生了显著扩增,且在总数上也显著高于其它物种,表明草菇的这一分子特征与其异常代谢相关。【结论】3个草菇基因家族(>200)显著扩增提示其特定基因家族功能加强,很可能与草菇低温自溶密切相关。

关键词：草菇自溶基因扩增全基因组异常代谢

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