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食用菌学报 2019年第4期26卷 16-22页

作者：李菲章炉军姜宁刘建雨于海龙尚晓冬宋春艳谭琦上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

通过比对分析多种导致真菌内源萎锈灵抗性的琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)氨基酸序列的突变位点,将香菇(Lentinula edodes)SdhB氨基酸序列第243位的组氨酸替换为亮氨酸,构建了香菇萎锈灵抗性同源筛选标记载体,以农杆菌介导转化小米粒培养的... 详细信息

通过比对分析多种导致真菌内源萎锈灵抗性的琥珀酸脱氢酶B亚基(SdhB)氨基酸序列的突变位点,将香菇(Lentinula edodes)SdhB氨基酸序列第243位的组氨酸替换为亮氨酸,构建了香菇萎锈灵抗性同源筛选标记载体,以农杆菌介导转化小米粒培养的香菇菌丝。转化子经5次传代后,PCR扩增验证插入片段,并观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况。结果显示:香菇单核体和双核体菌株经转化后,均能筛选到具有萎锈灵抗性的转化子,单核体菌株的转化率为34%,显著高于双核体菌株(4%);单核体转化子中的同源筛选标记及报告基因稳定性较好。本研究构建的萎锈灵抗性同源筛选标记可有效地在香菇遗传转化体系中应用。

关键词：香菇萎锈灵抗性基因同源筛选标记农杆菌转化绿色荧光蛋白

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金针菇切根多糖FVP60B的降脂作用研究

金针菇切根多糖FVP60B的降脂作用研究

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中国食品科学技术学会第十七届年会

作者：王慧敏刘肖肖张赫男汪雯翰贾薇上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

高脂血症是动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中、中风、心肌梗死等众多疾病的重要危险因素。从金针菇切根中分离纯化得到了分子质量为2.044×10～4 Ku,单糖组成为岩藻糖:半乳糖:葡萄糖:木糖:甘露糖=1.5:3:13:1:2的吡喃型杂多糖FVP60B,并... 详细信息

高脂血症是动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中、中风、心肌梗死等众多疾病的重要危险因素。从金针菇切根中分离纯化得到了分子质量为2.044×10～4 Ku,单糖组成为岩藻糖:半乳糖:葡萄糖:木糖:甘露糖=1.5:3:13:1:2的吡喃型杂多糖FVP60B,并利用甲基化分析、紫外可见光谱和红外光谱分析以及核磁共振等手段对其进行了结构解析,并研究该多糖对巨噬细胞RAW264.7和斑马鱼的降脂作用。通过氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞RAW264.7脂质细胞积累模型和高脂饮食诱导的斑马鱼幼鱼高脂模型等研究该多糖的降脂作用。结果表明FVP60B能明显减少脂质积累细胞内的脂滴数量,并且能够显著抑制斑马鱼幼鱼体内的脂质积累。金针菇切根多糖FVP60B具有良好的降脂活性,具有降脂食品添加剂或者保健品的开发潜力。

关键词：金针菇多糖脂质积累细胞斑马鱼降脂活性

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ARTP诱变灵芝菌株筛选高抗氧化能力新菌株研究

ARTP诱变灵芝菌株筛选高抗氧化能力新菌株研究

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中国食品科学技术学会第十七届年会

作者：张越野唐传红谭贻冯娜刘艳芳唐庆九张劲松上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

灵芝（Ganoderma lucidum）为担子菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属真菌,被《神农本草经》和《本草纲目》等列为上品,是滋补强身、扶正培本的珍贵药品,有久服轻身延年之功效。现代医学研究已证明灵芝具有抗肿瘤、调节免疫、保肝、镇静安... 详细信息

灵芝（Ganoderma lucidum）为担子菌纲、多孔菌目、灵芝科、灵芝属真菌,被《神农本草经》和《本草纲目》等列为上品,是滋补强身、扶正培本的珍贵药品,有久服轻身延年之功效。现代医学研究已证明灵芝具有抗肿瘤、调节免疫、保肝、镇静安神、降血压、抗氧化等多种功效,这些功效可能与灵芝中的活性物质有关,比如多糖、多酚类化合物。本课题研究ARTP（常压室温等离子体）诱变技术对灵芝发酵菌丝体抗氧化活性的影响以及相关次级代谢产物的变化。将ARTP诱变所得20个诱变菌株进行液体发酵培养,测定各菌株多糖、多酚含量并结合二苯基三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率、FRAP法、TEAC法对其代谢产物及抗氧化活性进行评价分析。结果表明,各灵芝诱变菌株的不同抗氧化活性与多酚含量存在显著正相关,且灵芝诱变菌株中A14、A19表现出最为显著的强抗氧化活性,DPPH自由基清除率、FRAP值、TEAC值分别较出发菌株G0157分别提高了139.67%,134.59%,203.8%,196.48%,147.3%,140.15%,且菌株A14,A19醇沉所得多糖组分中G1420,G1920,G1975具有明显抗氧化活性。

关键词：灵芝 ARTP 多糖多酚抗氧化活性

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猴头菌多糖合成关键基因A6180的克隆和异源表达

猴头菌多糖合成关键基因A6180的克隆和异源表达

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中国食品科学技术学会第十七届年会

作者：任鄄宝邹根张赫男吴迪张忠李文杨焱上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变... 详细信息

猴头菌（Hericium erinaceu）是我国著名的珍贵食药兼用菌,其主要的生物活性成分是猴头菌多糖,具有免疫调节、抗癌、降血脂和保护胃黏膜等多种功效。基于猴头菌三代全基因组测序和多糖的差异多组学分析结果,对一株高产多糖的猴头菇突变株的关键基因进行挖掘,发现编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因A6180在突变株中显著上调,可能和猴头菇多糖高产有关。为了验证该基因在多糖合成过程中的关键功能,在对其编码序列进行密码子优化后,分别在大肠杆菌和酿酒酵母中进行异源过表达来验证其酶学性质及生物学功能,为在猴头菌中进行过表达获得高产多糖菌株奠定基础。在大肠杆菌中异源表达的重组蛋白经过纯化后进行对其酶学特性进行测定,可以高效地将UDP-葡萄糖转化成UDP-半乳糖,相关酶活达（1.107±0.07） U/mg,证实了此目的基因发挥着UDP-葡萄糖-4-差向异构酶活性。同时在酿酒酵母中的异源表达的结果也初步验证了该基因对猴头菇活性多糖结构和功能有着关键作用。本研究利用分子生物学技术进行高产多糖优势菌株关键基因进行功能表征,为猴头菇生物活性多糖合成途径的解析奠定基础。

关键词：猴头菌活性多糖异源表达 UDP-葡萄糖-4-差向异构酶

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灵芝酸A对前列腺癌LNCaP细胞的生长抑制作用及机制

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菌物学报 2019年第5期38卷 717-727页

作者：徐宾贾薇王忠张赫男吴迪唐传红杨焱刘振东张劲松汪雯翰上海海洋大学食品学院上海201306 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海交通大学附属第六人民医院南院泌尿外科上海201400 西藏农牧学院西藏林芝860000

本研究利用alamarBlue~?测定细胞活力法、流式细胞术(annxin V-FITC)/PI双染色测定细胞凋亡法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定5α-还原酶活性法评价灵芝酸A对前列腺癌的体外抗肿瘤活性,并进一步利用... 详细信息

本研究利用alamarBlue~?测定细胞活力法、流式细胞术(annxin V-FITC)/PI双染色测定细胞凋亡法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定5α-还原酶活性法评价灵芝酸A对前列腺癌的体外抗肿瘤活性,并进一步利用流式细胞术2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA)染色测定ROS释放量法、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)检测雄激素受体(androgen receptor,AR)基因和凋亡相关基因表达的方法,探讨其作用机理。研究结果表明灵芝酸A可通过抑制5α-还原酶活性,抑制睾酮诱导的前列腺癌LNCaP细胞增殖,诱发细胞早期凋亡来发挥抗肿瘤活性;进一步研究表明,灵芝酸A降低前列腺癌细胞中AR的表达,并通过引发细胞线粒体功能障碍释放过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)诱发细胞凋亡,而qPCR和WB的数据进一步表明细胞线粒体功能障碍与抑癌基因caspase-3、bad和aifm1的高表达密切相关。

关键词：灵芝酸A LNCaP细胞细胞凋亡活性氧雄激素受体作用机理

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桦褐孔菌降糖活性成分及治疗糖尿病机制研究进展

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南京师大学报（自然科学版） 2019年第4期42卷 111-117页

作者：马丹丹汪雯翰薛蓓李梁朱琳刘振东上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 西藏农牧学院食品科学学院西藏林芝860000

桦褐孔菌(Inonotus obiquus)活性成分可降低血糖可降低治疗糖尿病,本综述对其主要的有效活性成分多糖、黄酮、多酚和三萜,以及降糖机制进行总结,以期为开发新型、无毒副作用的降糖药物提供新的思路.

关键词：桦褐孔菌活性成分糖尿病降糖抗氧化

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高效液相色谱法测定葛仙米水溶性多糖含量

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上海农业学报 2020年第1期36卷 105-110页

作者：苏攀峰唐庆九陈盛赵立彬王玉兰刘艳芳周帅许剑锋上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 湖南炎帝生物工程有限公司株洲412000

通过建立高效液相法(HPLC)测定葛仙米水溶性多糖含量的方法,对HPLC测定葛仙米水溶性多糖含量的方法学进行考察。以纯化的葛仙米多糖为标准品,应用HPLC对经过不同预处理的葛仙米水溶性多糖进行含量测定。结果表明:选择柱型为TSKgel G6000... 详细信息

通过建立高效液相法(HPLC)测定葛仙米水溶性多糖含量的方法,对HPLC测定葛仙米水溶性多糖含量的方法学进行考察。以纯化的葛仙米多糖为标准品,应用HPLC对经过不同预处理的葛仙米水溶性多糖进行含量测定。结果表明:选择柱型为TSKgel G6000 PWXL液相色谱分析柱的效果较好,标准品的定量上、下限分别为10mg/mL和0.078625mg/mL;标准溶液浓度(Y)在0.15625~5mg/mL范围内,峰面积与进样量(X)呈良好的线性关系,线性方程Y=1995695.548X-170.597、R^2=0.999;精密度、重复性和稳定性的RSD分别为1.59%、1.13%、2.56%,平均加样回收率为97.8%、RSD为1.72%,说明该方法灵敏度高、重复性和稳定性较好,试验结果可靠,所建方法适用于葛仙米水溶性多糖含量的测定。

关键词：葛仙米水溶性多糖高效液相色谱法含量

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基于交配型基因的酶切扩增多态性序列鉴定双孢蘑菇核型

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食用菌学报 2019年第4期26卷 9-15页

作者：冯志勇陈辉汪虹黄建春郝海波王倩宋晓霞隽加香张津京南京农业大学生命科学学院江苏南京210095 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403

为建立鉴定双孢蘑菇(Agaricus bisporus)核型的方法,根据GeneBank公布的其基因组信息,针对交配型基因序列设计特异性引物,以W192两个不同核型的同核体菌株A1和A2的菌丝体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得交配型基因序列,筛选存在差异的... 详细信息

为建立鉴定双孢蘑菇(Agaricus bisporus)核型的方法,根据GeneBank公布的其基因组信息,针对交配型基因序列设计特异性引物,以W192两个不同核型的同核体菌株A1和A2的菌丝体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得交配型基因序列,筛选存在差异的序列,预测基因片段的限制性内切酶位点,筛选最佳酶切位点,根据酶切片段的差异鉴定菌株的交配型。结果表明:筛选得到长度为736 bp的基因序列,将其命名为aba1;核型为A1的同核体菌株,采用内切酶EcoRⅤ可以将aba1酶切成大小为257 bp和479 bp的两个片段;核型为A2的同核体菌株,采用内切酶XhoⅠ可以将aba1酶切成大小为327 bp和409 bp的两个片段;如果同时可以被两种限制性内切酶酶切,说明该菌株为异核体。采用基因测序鉴定了5株标记为孢子同核体的菌株和8株标记为原生质体同核体的菌株,测序结果表明:5株标记为孢子同核体的菌株中176P11、176P14和176P17的核型属于A1型,176P12和176P19属于A2型;8株标记为原生质体同核体的菌株中101-1P75和03P75的核型为A1型;152P11、46P23、46P27和152P2为A2型;03P46和176P21属于异核体;同时又采用笔者建立的内切酶方法鉴定了这些菌株,核型与基因测序鉴定结果相同。

关键词：双孢蘑菇交配型基因核型限制性内切酶

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微生物多样性分析技术应用于食用菌发酵培养料分析的进展

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食用菌学报 2019年第3期26卷 148-156页

作者：赵妍刘顺杰张亚茹孙育红黄建春余昌霞陈明杰上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海海洋大学食品学院上海201306 上海市浦东新区农业技术推广中心上海200120

食用菌培养料的腐熟是由多种微生物共同作用而实现的,在这个过程中营养成分降解程度的差异,在一定程度上会影响后期的生产过程及产量。物种多样性差异反映了生态群落的功能和动态变化,因此分析发酵培养料制备过程中微生物多样性的变化... 详细信息

食用菌培养料的腐熟是由多种微生物共同作用而实现的,在这个过程中营养成分降解程度的差异,在一定程度上会影响后期的生产过程及产量。物种多样性差异反映了生态群落的功能和动态变化,因此分析发酵培养料制备过程中微生物多样性的变化对生产优质的培养料,使食用菌获得高产量尤为重要。本文梳理了食用菌发酵培养料微生物多样性分析的研究方法,简述了各种方法的原理并综述了其在相关研究中的应用,最后总结了不同方法的优缺点,以期为未来选用适宜的方法进行研究及开发复合菌制剂提供参考。

关键词：食用菌发酵培养料微生物多样性

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双孢蘑菇发酵培养料细菌菌群结构及其功能预测

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食用菌学报 2019年第4期26卷 50-56页

作者：隽加香肖婷婷王倩宋晓霞沈新芬高飞陈明杰黄建春上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验室上海201403 上海市金山区农业技术推广中心上海201599 江苏裕灌现代农业科技有限公司江苏灌南222500

为了解双孢蘑菇(Agaricus bisporus)培养料不同发酵阶段的细菌菌群组成,并对细菌菌群功能进行预测,采用近红外分析仪分别测定3个发酵阶段双孢蘑菇培养料中纤维素、半纤维素和木质素的含量,同时选用细菌16S rRNA基因V3-V4特异性引物分别... 详细信息

为了解双孢蘑菇(Agaricus bisporus)培养料不同发酵阶段的细菌菌群组成,并对细菌菌群功能进行预测,采用近红外分析仪分别测定3个发酵阶段双孢蘑菇培养料中纤维素、半纤维素和木质素的含量,同时选用细菌16S rRNA基因V3-V4特异性引物分别对3个发酵阶段的培养料进行PCR扩增、建库和测序。采用QIIME软件对获得的序列进行归并和可操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)划分,分别对每个样本计算Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数,并获取各样本在门、属分类水平上的组成和丰度分布表,使用R软件计算各样本共有OTU的数量,绘制样本在门、属分类水平的组成柱状图,通过Galaxy在线平台,提交属水平的相对丰度矩阵进行LEfSe分析,对未加权的UniFrac距离矩阵进行非度量多维尺度(nonmetric multidimensional scaling,NMDS)分析,通过PICRUSt软件将基因测序数据与代谢功能已知的微生物参考基因组数据库相比,预测细菌菌群代谢功能。结果表明:随着发酵次数的增加纤维素和半纤维素含量均呈下降趋势,而木质素含量二次发酵料高于一次料和三次料;3个阶段发酵培养料共有OTU数量为419个,其中一、二、三次发酵阶段独有的OTU数量分别为420、761和750个;二次料和三次料的细菌群落的丰富度和多样性均高于一次料;3个阶段中丰度高的门为异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)、绿弯菌门(Chloroflexi)、变形杆菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria);在一次料中栖热菌属(Thermus)丰度较高,在二次料中假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和高温多孢菌属(Thermopolyspora)丰度较高,在三次料中假黄单胞菌属和螯台球菌属(Chelatococcus)丰度较高;一次料与二、三次料样本之间的细菌群落结构差异较大;二次料与三次料样本之间的细菌群落结构相似度高;3个阶段代谢通路排在前两位的均为氨基酸代谢和碳水化合物代谢。

关键词：双孢蘑菇培养料发酵阶段高通量测序功能预测

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