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2019全国老年痴呆与认知障碍相关疾病学术大会

作者：任真奎董智慧吕菊谢鹏胡玉梅官志忠禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室黔西南州人民医院检验科贵州医科大学附属医院病理科

目的β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常聚集,导致细胞外老年斑和细胞内神经原纤维缠结的形成,从而引发的细胞毒性诱导神经元凋亡,导致渐进性认知功能障碍的临床表现,是阿尔茨海默病（AD）常见发病机制之一。因此,我们研究PNU282987激活SD新生... 详细信息

目的β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常聚集,导致细胞外老年斑和细胞内神经原纤维缠结的形成,从而引发的细胞毒性诱导神经元凋亡,导致渐进性认知功能障碍的临床表现,是阿尔茨海默病（AD）常见发病机制之一。因此,我们研究PNU282987激活SD新生乳鼠大脑皮质星形胶质细胞α7尼古丁乙酰胆碱能受体（nAChR）后通过PI3K/Akt/HSF1信号通路介导内源性αB-crystallin（Cryab）对Aβ聚集的影响。方法分离出生24 h内SD乳鼠皮质层的星形胶质细胞进行培养、纯化、并传代,通过细胞免疫荧光的方法对星形胶质细胞进行鉴定;体外制备Aβ寡聚体并进行鉴定;将细胞分为空白对照组、MLA处理组、PNU282987处理组、PNU282987+MLA处理组、LY294002处理组、PNU282987+LY294002处理组、Aβ处理组、PNU282987+Aβ处理组、PNU282987+LY294002+Aβ处理组及HSF1敲低组。收集细胞总蛋白,通过Western蛋白印迹法检测p-Akt,Cryab,HSF1和Aβ的蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光鉴定显示培养的原代星形胶质细胞占总细胞98%以上;Western蛋白印迹法对细胞中Cryab,p-Akt,HSF1和Aβ表达水平的结果显示:与空白对照组相比较,PNU282987处理后,Cryab,p-Akt,HSF1蛋白都表现出上升的趋势（P<0.05）,而单独MLA组或LY294002组无明显差异;在HSF1敲低组,PNU282987上调Cryab的作用受到明显的抑制;正常对照组未检测到Aβ的表达,与Aβ组相比,PNU282987组的Aβ表达降低（P<0.05）;与PNU282987+Aβ组相比,PNU282987+LY294002+Aβ组的Aβ表达升高（P<0.01）。结论在原代星形胶质细胞模型上,PNU282987可通过激活星形胶质细胞的α7 nAChR介导HSF1上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚,PI3K/Akt信号通路很可能是这个过程中的重要参与因素,为探讨Cryab和HSF1可能是治疗AD的一个潜在靶点提供了一定的基础研究。

关键词：阿尔茨海默病星形胶质细胞 Cryab HSF1 α7尼古丁乙酰胆碱能受体

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敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建

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贵州医科大学学报 2019年第10期44卷 1128-1133页

作者：饶凤琴程玉梅吴昌学王义崔古贞齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附院综合ICU 贵州贵阳550004 美国奥本大学系统生物学系美国奥本阿拉巴马36849 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLo... 详细信息

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。

关键词：艰难梭菌 CRISPR-Cpf1系统 PaLoc毒力岛基因敲除活菌疫苗毒性基因梭菌感染载体质粒

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α-硫辛酸对6-羟多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用

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贵州医科大学学报 2018年第3期43卷 264-268页

作者：李成朋韩飞董智慧罗坤胡玉梅官志忠吴昌学禹文峰贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵阳中医学院基础部贵州贵阳550002 贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004

目的:研究α-硫辛酸(LA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,通过CCK-8实验筛选出诱导PC12细胞建立帕金森病(PD)细胞模型的6-OHDA最佳浓度及对PD细胞模型保护的LA最佳浓度,Western blot法检测LA... 详细信息

目的:研究α-硫辛酸(LA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,通过CCK-8实验筛选出诱导PC12细胞建立帕金森病(PD)细胞模型的6-OHDA最佳浓度及对PD细胞模型保护的LA最佳浓度,Western blot法检测LA预处理后对PD模型细胞中酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。结果:75μmol/L 6-OHDA作用于PC12细胞共培养18 h后,PC12细胞活力下降35%;而经10μmol/L LA预处理PC12细胞1 h后,再用75μmol/L 6-OHDA与PC12共培养18 h,则PC12细胞活力下降20%,提示75μmol/L 6-OHDA与10μmol/L LA为最佳处理浓度;经过LA的干预,6-OHDA诱导PC12建立的PD细胞模型中TH表达显著升高(P<0.05)。结论:LA对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。

关键词： α-硫辛酸 6-羟多巴胺 PC12细胞酪氨酸羟化酶帕金森病神经保护氧化应激

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对比用末梢血与静脉血进行血常规检验的准确性

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中国社区医师 2018年第30期34卷 141-141,143页

作者：李若淳曾明燕苏艳丽吴昌学贵阳护理职业学院检验系贵州550081 贵阳中医学院第二附属医院内分泌科贵州550001 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的:探讨末梢血与静脉血进行血常规检验的准确性。方法:收治体检者420例,分为两组,每组各210例。对照组给予末梢血检验,观察组给予静脉血检验,比较两组血常规检验结果。结果:观察组RBC、WBC、Hb、PLT和MCV值高于对照组,差异有统计学意... 详细信息

目的:探讨末梢血与静脉血进行血常规检验的准确性。方法:收治体检者420例,分为两组,每组各210例。对照组给予末梢血检验,观察组给予静脉血检验,比较两组血常规检验结果。结果:观察组RBC、WBC、Hb、PLT和MCV值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血常规检验中,静脉血检验的准确率更高,可作为临床上血常规检验的最佳采血方式。

关键词：末梢血静脉血血常规检验准确性

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燃煤型氟中毒大鼠学习能力及脑组织B-raf活化的变化

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贵州医科大学学报 2017年第4期42卷 400-403页

作者：冉龙艳桂传枝吴昌学何江黄昕官志忠贵州电力职工医院病理科贵州贵阳550002 贵州省肿瘤医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学公共卫生学院贵州贵阳550004

目的:研究燃煤型氟中毒大鼠学习记忆能力的变化以及氟中毒与B-raf活性等关系。方法:制作氟中毒大鼠模型,以氟斑牙的发生以及脑组织中氟离子浓度评价造模情况,Morris水迷宫空间探索实验检测大鼠学习能力,Western Blot方法检测大鼠脑组织... 详细信息

目的:研究燃煤型氟中毒大鼠学习记忆能力的变化以及氟中毒与B-raf活性等关系。方法:制作氟中毒大鼠模型,以氟斑牙的发生以及脑组织中氟离子浓度评价造模情况,Morris水迷宫空间探索实验检测大鼠学习能力,Western Blot方法检测大鼠脑组织匀浆中B-raf蛋白表达,Realtime PCR法检测大鼠脑组织B-raf活化情况。结果:氟中毒大鼠造模成功,染氟组大鼠逃避潜伏时间均比对照组长,且与染氟剂量相关,提示燃煤型氟中毒大鼠学习能力降低;染氟组大鼠脑组织磷酸化B-raf蛋白和B-raf mRNA水平均高于对照组(P<0.05),与染氟剂量正相关(r=0.993、0.996),提示染氟组大鼠脑组织B-raf信号通路活化。结论:燃煤染氟饲料可引起慢性氟中毒大鼠学习能力减退,其机制可能与氟中毒大鼠脑组织B-raf信号转导通路的激活、B-raf mRNA表达水平及该蛋白激活磷酸化水平升高有关。

关键词：神经系统氟中毒,牙学习

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α3神经型尼古丁受体基因上调对SH-SY5Y细胞突触素水平的影响

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中风与神经疾病杂志 2018年第2期35卷 103-106页

作者：吕园园齐晓岚李毅官志忠张力贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 郑州市人民医院检验科河南郑州450000 贵州医科大学医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院新生儿科贵州贵阳550004

目的构建使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1并转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),研究α3nAChR基因上调对细胞突触素(SYP)水平的影响。方法设计α3nAChR上下游引物,通过逆转录PCR的方法获取人α3nAChR特异核苷酸序列,并将... 详细信息

目的构建使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1并转染至神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),研究α3nAChR基因上调对细胞突触素(SYP)水平的影响。方法设计α3nAChR上下游引物,通过逆转录PCR的方法获取人α3nAChR特异核苷酸序列,并将其克隆到质粒载体pcDNA3.1上,构建重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1;瞬时转染至SH-SY5Y细胞后,用Real-time法和蛋白免疫印迹法分别α3nAChR及蛋白水平,并检测上调细胞中SYPmRNA和蛋白水平的变化。结果成功构建了使α3nAChR基因上调的重组质粒α3nAChRpcDNA3.1;将α3nAChR-pcDNA3.1质粒转染到SH-SY5Y细胞后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3nAChRmRNA及蛋白表达水平分别增加了422%和106%(P<0.05);SYPmRNA及蛋白表达水平分别增加了115%和43%(P<0.05)。结论α3nAChR表达的上调可使细胞SYP的表达增加,说明了α3nAChR与SYP密切相关,在AD的发生中可能起着重要作用。

关键词： α3神经型尼古丁受体 SH-SY5Y细胞 SYP

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外源性硫化氢对氟诱导损伤SH-SY5Y细胞的作用及机制

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贵州医科大学学报 2020年第11期45卷 1260-1264页

作者：潘际刚吴昌学齐晓岚李成朱卫刘宇官志忠贵州医科大学基础医学院生理学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004

目的:探讨外源性硫化氢(H 2S)对氟诱导损伤SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:离体培养的SH-SY5Y细胞,分为Control组(不处理)、NaF组(NaF孵育48 h诱导损伤)、NaHS组(NaHS孵育48 h)、NaF联合NaHS组(NaHS预处理30 min后加2 mmol/L NaF孵育4... 详细信息

目的:探讨外源性硫化氢(H 2S)对氟诱导损伤SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:离体培养的SH-SY5Y细胞,分为Control组(不处理)、NaF组(NaF孵育48 h诱导损伤)、NaHS组(NaHS孵育48 h)、NaF联合NaHS组(NaHS预处理30 min后加2 mmol/L NaF孵育48 h);采用台盼蓝拒染法观察各组SH-SY5Y细胞存活率,采用光镜、相差显微镜及透射电镜观察各组SH-SY5Y细胞超微结构,采用流式细胞仪检测各组细胞的活性氧(ROS)水平。结果:Control组和NaF联合NaHS组SH-SY5Y细胞的存活率分别高于NaF组,差异均有统计学意义(P<0.05);NaF组细胞器结构模糊不清、线粒体空泡变性增多,NaF联合NaHS组则形态结构明显得到改善;NaF组细胞ROS水平分别高于Control组和NaF联合NaHS组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:外源性H 2S参与对氟所致神经损伤的保护,可能涉及抗氧化应激机制。

关键词：硫化氢线粒体氟中毒神经损伤活性氧 SH-SY5Y细胞

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Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响

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贵州医科大学学报 2020年第3期45卷 249-254页

作者：吕菊胡玉梅任真奎谢鹏张春林焦玲禹文峰贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 黔西南州人民医院检验科贵州兴义562400 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州医科大学附院神经内科贵州贵阳550004

目的:构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的先天性脂肪代谢障碍2型(BSCL2/Seipin)敲低细胞株,探讨Seipin敲低后对细胞凋亡的影响。方法:将PC12细胞分为空白感染组和助感染组(加助感染试剂Hitans G),采用不同慢病毒感染复数(MOI)感染细... 详细信息

目的:构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的先天性脂肪代谢障碍2型(BSCL2/Seipin)敲低细胞株,探讨Seipin敲低后对细胞凋亡的影响。方法:将PC12细胞分为空白感染组和助感染组(加助感染试剂Hitans G),采用不同慢病毒感染复数(MOI)感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的MOI;依据上述感染条件,用阴性对照病毒和Seipin-shRNA目的病毒感染PC12细胞作为阴性对照组和Seipin敲低组,同时设置正常组(正常PC12细胞),采用蛋白质免疫印迹法检测Seipin蛋白的表达;将阴性对照组与Seipin敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡染色法和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况。结果:慢病毒MOI=100时感染效果最强,助感染试剂能增加感染效率;与正常组相比,Seipin敲低组Seipin蛋白表达水平降低(P<0.05);与阴性对照组相比,TUNEL染色结果显示Seipin敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加,Hoechst染色结果显示Seipin敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多。结论:成功构建大鼠PC12 Seipin敲低细胞,下调Seipin蛋白表达会增加细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡帕金森病 PC12细胞神经变性疾病 Seipin蛋白基因干扰

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Seipin敲低对内质网应激通路诱导细胞凋亡的影响

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贵州医科大学学报 2020年第3期45卷 255-259页

作者：吕菊谢鹏任真奎胡玉梅张春林吴昌学焦玲禹文峰贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 黔西南州人民医院检验科贵州兴义562400 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 贵州医科大学附院神经内科贵州贵阳550004

目的:探讨Seipin敲低对肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的影响及其相关机制,初步探索Seipin敲低在帕金森病(PD)模型中的可能调控机制。方法:对细胞给予不同浓度的6-羟多巴胺(6-OHDA,0、25、50、75、100及125μmol/L)处理,用CCK8法检测... 详细信息

目的:探讨Seipin敲低对肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的影响及其相关机制,初步探索Seipin敲低在帕金森病(PD)模型中的可能调控机制。方法:对细胞给予不同浓度的6-羟多巴胺(6-OHDA,0、25、50、75、100及125μmol/L)处理,用CCK8法检测细胞活性筛选6-OHDA最佳造模浓度;选取阴性对照细胞和Seipin敲低细胞分别用6-OHDA诱导体外PD模型作为阴性模型组和Seipin模型组,同时设阴性正常组和Seipin正常组;4组细胞培养18 h时,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激(ERS)蛋白(GRP78和CHOP)和凋亡相关蛋白Bax水平。结果:CCK8法检测细胞活性,6-OHDA最适作用浓度为75μmol/L;Western blot结果显示,与阴性正常组比较,阴性模型组、Seipin模型组GRP78、CHOP及Bax蛋白水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而与阴性模型组相比,Seipin模型组GRP78、CHOP及Bax蛋白水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:敲低Seipin诱导细胞凋亡可能涉及ERS蛋白的增加,敲低Seipin后导致6-OHDA诱导的细胞凋亡更加严重。

关键词：羟多巴胺 PC12细胞帕金森病细胞凋亡内质网应激 Seipin蛋白

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ITGAM基因在急性髓细胞白血病中的表达及临床意义

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贵州医科大学学报 2020年第7期45卷 786-791,838页

作者：张太海金皎黄璟李鹏吴西军吴昌学马健娟庹媛媛李燕杨红兰潘海新杨小燕铜仁市人民医院儿科贵州铜仁554300 贵州医科大学附属医院&贵州省儿童医学中心儿童血液肿瘤科贵州贵阳550004 贵阳市公共卫生救治中心贵州贵阳550004 贵州医科大学干细胞与组织工程实验中心贵州贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室&地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004

目的:探讨整合素αM(ITGAM)基因在急性髓细胞白血病(AML)中的表达及临床意义。方法:利用CELL数据库获取临床常见血液肿瘤性疾病数据,并分析ITGAM在不同血液肿瘤中的表达情况;利用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库获得AML组173例和... 详细信息

目的:探讨整合素αM(ITGAM)基因在急性髓细胞白血病(AML)中的表达及临床意义。方法:利用CELL数据库获取临床常见血液肿瘤性疾病数据,并分析ITGAM在不同血液肿瘤中的表达情况;利用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库获得AML组173例和健康对照组70例的资料,比较2组对象间ITGAM mRNA表达的差异,同时将AML组分为高表达组(高于均值)53例和低表达组(低于均值)53例、分析AML患者ITGAM表达量与其总体生存率(OS)的相关性;利用UALCAN数据库获得AML患者样本171例,分析ITGAM在M0~M7中的表达情况;利用Bloodspot数据库获得AML患者样本172例,分析ITGAM在不同基因突变或染色体异常患者中的表达,同时将AML患者分为ITGAM mRNA高表达组(高于中位数)86例和低表达组(低于中位数)86例进行生存分析。结果:与健康对照组相比,ITGAM在AML患者中表达增高(P<0.05);ITGAM在不同亚型AML中表达水平存在差异,M5中表达最高、M3中表达最低;其中,M4、M5分别与M0比较,M3、M4、M5分别与M1比较,M4、M5分别与M2比较,M4、M5、M7分别与M3比较,ITGAM基因表达差异有统计学意义(P<0.05),ITGAM在AML t(11q23)/MLL中表达最高、在AML t(15;17)中表达最低,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);ITGAM在伴有Cepba+_NPM1-_FLT3+突变的AML患者中表达较低,在Cepba-_NPM1-_FLT3-和Cepba-_NPM1+_FLT3-AML患者中表达最高;Kaplan-Meier分析结果表明,ITGAM基因表达与AML患者生存有相关性,高表达ITGAM的AML患者预后差(P=0.024,P=0.008)。结论:ITGAM基因在AML患者样本中呈高表达,且ITGAM高表达的AML患者OS差,该基因对预测AML患者预后有一定的临床应用价值。

关键词：白血病,髓样,急性基因表达 ITGAM基因总体生存率临床意义

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