检索结果-内蒙古大学图书馆

杨梅素调控ERK1/2/GSK-3β信号通路保护SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激

中国药理学与毒理学杂志 2023年第7期37卷 518-519页

作者：王丽唐智李勃彭亚倩齐晓岚贵州医科大学贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学地方病与少数民族病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育... 详细信息

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育48 h，并设立对照组。分别采用Western印迹法检测各处理组细胞突触前蛋白（SNAP25和snaptophysin）和突触后蛋白（PSD95）；磷酸化tau蛋白（p-tau）和总tau蛋白（t-tau）;p-ERK和t-ERK、p-GSK-3β和t-GSK-3β蛋白；线粒体分裂蛋白（动力相关蛋白1,Drp1）和融合蛋白[丝裂蛋白1（Mfn1）和Mfn2]。流式细胞术检测线粒体膜电位变化和活性氧产生，免疫荧光法检测氧化应激标志物8-OHdG和4-HNE变化。结果（1） Aβ1-42寡聚体处理组与杨梅素预处理组对比，其p-tau/t-tau（Taus396/Tau5）的相对表达量增加了43%（P=0.0328）。（2） Aβ1-42的施加降低了突触前蛋白SNAP25（32%）、突触素snaptophysin（23%）和突触后蛋白PSD95（17%）的相对表达量（P=0.0146）。杨梅素预处理可逆转上述指标变化。（3）杨梅素可抑制SH-SY5Y细胞中Aβ1-42寡聚体诱导的ERK1/2和GSK-3β通路磷酸化（P=0.0002,P=0.0253）。（4）杨梅素可恢复SH-SY5Y细胞中Aβ1-42诱导的线粒体融合蛋白和线粒体膜电位降低以及线粒体分裂蛋白DRP1的磷酸化（P<0.05）。（5）杨梅素阻断了Aβ1-42寡聚体诱导的SH-SY5Y细胞中ROS产生和DNA损伤（P<0.01）。结论杨梅素可抑制Aβ1-42寡聚体诱导的tau蛋白过度磷酸化、突触前和突触后蛋白的损伤、线粒体功能障碍及氧化应激反应，并且上述保护作用经GSK-3β和ERK1/2信号通路介导。

关键词：淀粉样蛋白 ERK1/2通路 GSK-3β通路杨梅素寡聚体氧化应激突触损伤

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小鼠脑缺血再灌注损伤模型中circRNA的m^(6)A修饰及表达谱分析

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第10期38卷 1403-1417页

作者：安小琼谢鹏朱晓西龙婷婷禹文峰地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

关键词：大脑中动脉栓塞/再灌注 m^(6)A甲基化高通量测序环状RNA

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艰难梭菌基因编辑技术研究进展

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生物工程学报 2020年第2期36卷 210-225页

作者：洪伟万雯崔古贞官志忠齐晓岚禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学病理学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院微生物教研室贵州贵阳550004

艰难梭菌Clostridioesdifficile是一种革兰氏阳性、产芽孢、专性厌氧细菌,是医院相关性腹泻的主要病原体。近年来,随着强毒株的出现(如核糖体027型),其流行性与致死率逐年上升,因此对艰难梭菌生理、生化特征及致病机制的研究受到广泛重... 详细信息

艰难梭菌Clostridioesdifficile是一种革兰氏阳性、产芽孢、专性厌氧细菌,是医院相关性腹泻的主要病原体。近年来,随着强毒株的出现(如核糖体027型),其流行性与致死率逐年上升,因此对艰难梭菌生理、生化特征及致病机制的研究受到广泛重视。艰难梭菌生理、生化特征及致病机制研究又以建立其稳定、高效的基因编辑方法为必要前提。借助基因编辑工具,研究者可以扰动艰难梭菌核心生物学过程,在分子水平研究其分子致病机制。如Clos Tron技术在艰难梭菌毒素A (Toxin A)和毒素B (Toxin B)与其致病力关系的研究中起到了关键作用。文中以时间为主线综述了艰难梭菌基因编辑技术的发展历程和最新进展,并对艰难梭菌基因编辑技术未来的研究方向进行展望。

关键词：艰难梭菌艰难梭菌感染基因编辑基因功能研究致病机制

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活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 379-383页

作者：谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州省妇幼保健医院

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测... 详细信息

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体活性氧

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PIN1基因多态性与贵州地区民族间原发性高血压的研究

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临床心血管病杂志 2023年第5期39卷 375-382页

作者：李瑞超宋居会赵安宿刁晓艳张婷王婵娟齐晓岚官志忠何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室、贵州省医学分子生物学重点实验室、省部共建地方病及民族区域性疾病防控协同创新中心贵阳550004 贵州医科大学附属医院心血管内科

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州苗族、布依族、汉族人群原发性高血压的关联性。方法:通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族的原发性高血压和健康对照人群,采用Sequenom Ma... 详细信息

目的:探讨肽基脯氨酰顺反异构酶(PIN1)基因单核苷酸多态性(SNP)与贵州苗族、布依族、汉族人群原发性高血压的关联性。方法:通过病例-对照研究方法,选取贵州雷山苗族、荔波布依族及贵阳汉族的原发性高血压和健康对照人群,采用Sequenom MassARRAY基因分型技术对以上人群PIN1基因多态性位点rs2233678、rs2233679进行基因分型,分析SNP与贵州人群原发性高血压的遗传关系。结果:在贵州苗族、布依族、汉族人群中,高血压组和对照组性别和BMI间的差异均无统计学意义;高血压组的平均年龄均大于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。rs2233678、rs2233679在不同人群的分布均符合Hardy-Weinberg平衡。在苗族、布依族及汉族高血压组和对照组人群中,rs2233678、rs2233679等位基因及基因型差异均无统计学意义;rs2233678和rs2233679存在强连锁不平衡,以rs2233678-rs2233679构建的单倍型GC和单倍型GT与原发性高血压不存在显著关联性;多因子降维分析显示,rs2233678、rs2233679与BMI对于贵州总人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=9.328,P=0.002);rs2233679和BMI对于贵州苗族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.624,P=0.018);rs2233678和rs2233679对于贵州布依族人群高血压的发生具有强协同作用(χ2=5.323,P=0.021)。结论:PIN1基因rs2233678、rs2233679可能共同影响贵州人群原发性高血压的发生。

关键词：原发性高血压肽基脯氨酰顺反异构酶基因多态性贵州民族

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甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

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中国公共卫生 2021年第1期37卷 100-103页

作者：王琪陈芳萍官志忠于燕妮楼迪栋贵州医科大学法医学院法医病理学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省分子生物学重点实验室贵州中医药大学基础医学院

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细... 详细信息

目的观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响。方法在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现象;激光共聚焦显微镜观察溶酶体吞噬线粒体活性;Western bolt检测自噬标志蛋白LC3和P62及自噬调节蛋白PINK1和Parkin表达水平。结果METH诱导SH-SY5Y细胞24 h后,SH-SY5Y细胞凋亡水平与METH剂量呈正相关(P<0.05);线粒体超微结构破坏严重,数量减少,出现自噬小体,溶酶体数量增加,吞噬线粒体活性增强(P<0.05);LC3-II/LC3-I比值上升(P<0.05),P62蛋白早期表达水平不变,48 h后表达量下调(P<0.05);Parkin蛋白表达量升高,PINK1蛋白表达量无明显变化。结论METH通过诱导PINK1/Parkin信号通路介导了线粒体自噬,其自噬流通畅,自噬流末端反馈迟滞,可能与SH-SY5Y细胞凋亡有关。

关键词：甲基苯丙胺(METH) 线粒体自噬自噬调节蛋白细胞凋亡神经毒性

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大肠埃希菌密度感应调节子qseC基因失活突变株构建及其生物学特性

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实用医学杂志 2022年第3期38卷 288-294页

作者：周青帅赵行行李冬梅崔古贞陈峥宏任玮齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵阳550004 贵州医科大学免疫学教研室贵阳550004

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其... 详细信息

目的密度感应系统与细菌生长状态、毒力改变、生物膜形成、运动能力改变以及参与细菌和宿主的免疫反应和对药物的抗性等相关。大肠埃希菌密度调节子C(Escherichia coli quorum sensing regulator C,qseC)是其密度感应系统的受体,探究其对大肠埃希菌生理、生化特征的影响。方法使用嗜热二型内含子基因打靶系统(Thermotargetron)构建大肠埃希菌HMS174菌株qseC基因失活突变株,测定其生长速率、溶血能力、生物膜形成和运动能力等表型的变化,以及对酸碱和6种抗生素的敏感性。结果成功构建了大肠埃希菌HMS174 qseC627s位点的打靶载体,该载体基因失活效率为100%。对比大肠埃希菌HMS174与ΔqseC627s突变株的表型发现,突变株生长速率和最大生物量降低、溶血能力丧失、生物膜形成能力降低、运动能力减弱、对酸、碱的耐受能力降低。抗生素敏感性测定结果表明,ΔqseC627s对氯霉素、氨苄青霉素、四环素、阿莫西林、甲硝唑耐受性降低。结论大肠埃希菌HMS174中qseC基因缺失后,突变株表型和对抗外界压力因素发生了显著改变。

关键词：大肠埃希菌密度感应系统 Thermotargetron 突变株表型

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嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3049-3061页

作者：花登雄王鑫鑫陈峥宏洪伟汪依航俞青凤谷俊莹崔古贞贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院病原生物学重点实验室贵州贵阳550025 地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州贵阳550004

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其... 详细信息

【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。

关键词：大肠杆菌嗜热Ⅱ型内含子 Thermotargetron Tel3c/4c 内含子编码蛋白反转录结构域

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α7神经型尼古丁受体激动剂PNU282987对小鼠海马组织突触相关蛋白的影响

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中国老年学杂志 2018年第2期38卷 257-259页

作者：王晓玲邓于新董阳婷官志忠齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室贵州医科大学病理学教研室

目的探讨特异性激动小鼠α7神经型尼古丁受体(α7n AChR)水平对海马组织中突触相关蛋白表达的影响。方法选取6月龄非转基因C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(Control),腹腔注射0.5、1.0 mg/kg、3.0 mg/kg PNU282987组各8只。采用Real-tim... 详细信息

目的探讨特异性激动小鼠α7神经型尼古丁受体(α7n AChR)水平对海马组织中突触相关蛋白表达的影响。方法选取6月龄非转基因C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(Control),腹腔注射0.5、1.0 mg/kg、3.0 mg/kg PNU282987组各8只。采用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western印迹)法分别测定小鼠海马组织中囊泡相关蛋白突触素(Syn)、突触小体相关蛋白(SNAP)-25和突触后致密物(PSD)-95 mRNA及蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1.0 mg/kg PNU282987组、3.0 mg/kg PNU282987组中突触相关蛋白Syn、PSD-95、SNAP-25的mRNA和蛋白表达水平均显著增高。结论特异性激动小鼠α7n AChR能够使海马组织中突触相关蛋白水平表达增加。这可能提示了α7n AChR与突触密切相关,这可能与其神经保护作用有关。

关键词： α7神经型尼古丁受体突触

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氧糖剥夺再灌注引起的SH-SY5Y细胞凋亡与NF-κBp65和COX-2蛋白表达的关系

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中风与神经疾病杂志 2017年第2期34卷 119-121页

作者：黄赟董艳军肖雁官志忠贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州省人民医院病理科贵州贵阳550004

目的探讨氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后SH-SY5Y细胞凋亡情况及NF-κB信号通路NF-κBp65、COX-2蛋白的表达。方法将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、氧糖剥夺4 h/再灌注24 h组(OGD/R)组。利用流式细胞术分别检测各组细胞凋亡率,蛋白印记法(Western blot)检测p65和COX-2的蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,OGD/R组细胞凋亡率明显增高(P<0.05),p65和COX-2的蛋白表达也明显增高(P<0.05)。结论氧糖剥夺4 h/再灌注24 h能够促进细胞凋亡,其机制可能是通过NF-κBp65对COX-2调控的信号通路来实现。

关键词：氧糖剥夺再灌注细胞凋亡 NF-κBp6 COX-2

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