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甲基苯丙胺对体外培养SH-SY5Y细胞线粒体膜电位、超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响

中国药理学通报 2019年第7期35卷 935-939页

作者：牟登峰郑丹王琪黄仕美官志忠于燕妮楼迪栋贵州医科大学法医学院法医病理学教研室贵阳妇幼保健院围产期保健科贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004

目的评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;... 详细信息

目的评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;透射电镜观察SH-SY5Y细胞线粒体超微结构;Western blot检测Mfn1、Fis1蛋白表达。结果 METH作用SH-SY5Y细胞3、6、12、24 h,与对照组比较,METH组细胞MMP红绿荧光比值明显降低( P <0.05),Mfn1蛋白表达降低( P <0.05),Fis1蛋白表达升高( P <0.05);METH作用SH-SY5Y细胞24 h时,透射电镜观察见未处理组细胞线粒体呈椭圆形棒状双层膜结构,线粒体嵴正常、清晰,METH组细胞线粒体椭圆形棒状结构被分裂成小球状结构,并发现线粒体自噬小体及自噬溶酶体。结论 METH可引起SH-SY5Y细胞MMP下降、线粒体超微结构改变及Mfn1、Fis1蛋白表达水平改变,其改变可能参与METH致神经细胞损伤的发病机制。

关键词：甲基苯丙胺 SH-SY5Y细胞线粒体膜电位线粒体超微结构线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1

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小鼠脑缺血再灌注损伤模型中circRNA的m^(6)A修饰及表达谱分析

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中国生物化学与分子生物学报 2022年第10期38卷 1403-1417页

作者：安小琼谢鹏朱晓西龙婷婷禹文峰地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025

本研究通过甲基化RNA免疫沉淀测序(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq)、转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)及生物信息学技术,分析小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型中环状RNA (circular RNA,circRNA)差异表达谱和m^(6)A修饰差异表达谱,为揭示circRNA表观遗传修饰与脑缺血再灌注损伤之间关系提供科学依据。采用Longa生物学评分评价小鼠神经功能缺损,TTC染色法计算小鼠脑梗死体积,Dot印迹检测m^(6)A整体甲基化水平。结果显示,MCAO/R组与sham组相比出现严重神经损伤,Longa生物学评分为(2.75±0.25)分,MCAO/R组的梗死体积显著高于sham组,所占百分比为(27.63%±4.24%),MCAO/R组m^(6)A整体修饰水平增加。与sham组相比,MCAO/R组有1 787个差异表达的circRNAs(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,852个circRNA表达显著上调,935个circRNAs表达显著下调。基因本体(gene ontgology,GO)功能分析显示,差异表达circRNAs靶基因主要参与翻译、蛋白质糖基化、激素应答、IL-6介导的信号通路、高尔基体、内质网等生物学过程;京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析发现,差异靶基因主要与N-聚糖生物合成、Wnt信号通路、胃酸分泌、谷氨酸能突触、磷脂酶D信号通路、味觉传导、非洲锥虫病、甲状腺激素合成、胰岛素分泌等代谢途径和信号通路有关。与sham组比,MCAO/R组有22个circRNAs发生m^(6)A甲基化修饰差异(|log_(2)FC|> 0.58,P<0.05)。其中,14个circRNA显著上调,8个circRNA显著下调。GO和KEGG分析显示,差异甲基化circRNA主要与胞嘧啶代谢过程、骨骼肌收缩、髓样细胞分化、O-连接蛋白质糖基化等生物学过程有关,主要富集到范科尼贫血途径通路。最后,联合表达差异和m^(6)A修饰差异进行分析,共筛选到7个共表达差异(既有m^(6)A修饰差异,又有表达差异)的circRNA,经RT-qPCR验证,这些共表达差异circRNA表达趋势与测序一致。本研究通过对sham组和MCAO/R组测序分析,筛选有差异表达的circRNA和有m^(6)A修饰差异的circRNA,表明脑缺血再灌注可引起小鼠circRNA表达谱及m^(6)A修饰谱改变,差异表达的circRNA和差异甲基化circRNA靶基因涉及多种通路,为从表观遗传水平揭示脑缺血再灌注损伤的分子机制奠定基础,为后续研究脑缺血再灌注损伤提供了潜在的靶向位点。

关键词：大脑中动脉栓塞/再灌注 m^(6)A甲基化高通量测序环状RNA

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抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对冈田酸诱导原代星形胶质细胞衰老情况的影响

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中国老年学杂志 2023年第13期43卷 3187-3192页

作者：杨洁邓于新彭亚倩陈竹懿齐晓岚贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室、贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免... 详细信息

目的研究冈田酸(OA)诱导的原代星形胶质细胞中通过抑制磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β信号通路对p21、p53衰老蛋白表达水平和衰老阳性细胞表达的影响,探讨OA诱导星形胶质细胞衰老情况及相关机制。方法免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞,CCK8法筛选OA药物浓度,然后用LY294002、OA分别处理或联合处理细胞,Western印迹测定细胞中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平的变化及β-半乳糖苷酶染色检测衰老阳性细胞。结果免疫荧光鉴定原代星形胶质细胞结果显示其纯度达到95%以上,CCK8法筛选出OA药物处理浓度为30 nmol/L,OA组中p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.05),衰老阳性细胞数明显增加,但LY294002+OA组p-PI3K、p-AKT、p-GSK-3β、p21、p53蛋白表达水平较OA组明显降低,并且衰老阳性细胞数也明显减少(P<0.05)。结论通过OA处理能使星形胶质细胞发生衰老,LY294002处理能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路缓解细胞的衰老情况,提示高磷酸化Tau诱导星形胶质细胞衰老可能与PI3K/AKT/G3K-3β信号通路密切相关。

关键词：原代星形胶质细胞 LY294002 冈田酸磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶(GSK)-3β p21 p53

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贵州省3个少数民族线粒体DNA 9 bp序列缺失频率的分析研究

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重庆医学 2017年第33期46卷 4702-4704页

作者：国学红何燕张旺德王婵娟张婷官志忠地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室/贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探讨贵州省3个少数民族线粒体DNA(mtDNA)9bp序列缺失频率情况。方法随机选取贵州省雷山县苗族(69例)、荔波县布依族(70例)、荔波县水族(44例)共183例男性血液标本,应用PCR及直接测序检测线粒体DNA 9bp序列缺失情况。结果在贵州省3... 详细信息

目的探讨贵州省3个少数民族线粒体DNA(mtDNA)9bp序列缺失频率情况。方法随机选取贵州省雷山县苗族(69例)、荔波县布依族(70例)、荔波县水族(44例)共183例男性血液标本,应用PCR及直接测序检测线粒体DNA 9bp序列缺失情况。结果在贵州省3个少数民族样本中发现标准型、缺失型、3型,缺失频率最高为荔波县水族(40.91%),雷山县苗族中检出3型1例,3个少数民族群体间mtDNA 9bp缺失频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3个世居少数民族mtDNA 9bp缺失频率不同,水族的遗传变异较大,水族与苗族的亲缘关系相比水族与布依族较近。

关键词：贵州布依族水族苗族 mtDNA

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硫化氢对血管性痴呆大鼠缺血再灌注损伤中NLRP3表达的影响

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中国老年学杂志 2022年第3期42卷 644-647页

作者：章亚明田茂郑菊肖雁贵州医科大学分子生物学重点实验室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院贵州医科大学附属白云医院

目的探讨硫化氢(H_(3)S)对血管性痴呆(VaD)大鼠缺血再灌注损伤(IRI)中NLRP3表达的影响。方法采用改良四血管法(4-VO)制作VaD大鼠IRI模型,随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组(CY-09组)、NaHS组,每组各6只,共24只大鼠。应... 详细信息

目的探讨硫化氢(H_(3)S)对血管性痴呆(VaD)大鼠缺血再灌注损伤(IRI)中NLRP3表达的影响。方法采用改良四血管法(4-VO)制作VaD大鼠IRI模型,随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组(CY-09组)、NaHS组,每组各6只,共24只大鼠。应用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,收集各组大鼠脑组织标本,采用苏木素-伊红(HE)染色,观察海马区形态。各组大鼠血清H_(3)S含量采用亚甲蓝法检测;白细胞介素(IL)-1β、IL-18采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;用Western印迹检测各组大鼠海马组织中炎症小体NLRP3、Caspase-1表达水平。结果VaD大鼠模型构建成功;模型组大鼠海马区神经元细胞损伤明显,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。NaHS组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,血清H_(3)S含量较模型组明显升高(P<0.05),海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05);CY-09组大鼠海马区神经元细胞损伤减轻,海马组织NLRP3、Caspase-1蛋白较模型组降低(P<0.05),血清IL-1β、IL-18显著低于模型组(P<0.05)。结论VaD大鼠IRI可引起NLRP3表达增加;H_(3)S能够通过降低NLRP3表达,减轻大鼠IRI。

关键词：缺血再灌注损伤硫化氢 NLR家族Pyrin域蛋白3

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杨梅素调控ERK1/2/GSK-3β信号通路保护SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激

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中国药理学与毒理学杂志 2023年第7期37卷 518-519页

作者：王丽唐智李勃彭亚倩齐晓岚贵州医科大学贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州医科大学地方病与少数民族病教育部重点实验室贵州医科大学贵州省医学分子生物学重点实验室

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育... 详细信息

目的探讨杨梅素在SH-SY5Y细胞对抗Aβ寡聚体诱导的突触损伤、线粒体功能障碍和氧化应激中的保护作用及机制。方法 CCK-8检测细胞活性，施加杨梅素5,10和20μmol·L-1预处理SH-SY5Y细胞24 h之后，Aβ1-42寡聚体10μmol·L-1孵育48 h，并设立对照组。分别采用Western印迹法检测各处理组细胞突触前蛋白（SNAP25和snaptophysin）和突触后蛋白（PSD95）；磷酸化tau蛋白（p-tau）和总tau蛋白（t-tau）;p-ERK和t-ERK、p-GSK-3β和t-GSK-3β蛋白；线粒体分裂蛋白（动力相关蛋白1,Drp1）和融合蛋白[丝裂蛋白1（Mfn1）和Mfn2]。流式细胞术检测线粒体膜电位变化和活性氧产生，免疫荧光法检测氧化应激标志物8-OHdG和4-HNE变化。结果（1） Aβ1-42寡聚体处理组与杨梅素预处理组对比，其p-tau/t-tau（Taus396/Tau5）的相对表达量增加了43%（P=0.0328）。（2） Aβ1-42的施加降低了突触前蛋白SNAP25（32%）、突触素snaptophysin（23%）和突触后蛋白PSD95（17%）的相对表达量（P=0.0146）。杨梅素预处理可逆转上述指标变化。（3）杨梅素可抑制SH-SY5Y细胞中Aβ1-42寡聚体诱导的ERK1/2和GSK-3β通路磷酸化（P=0.0002,P=0.0253）。（4）杨梅素可恢复SH-SY5Y细胞中Aβ1-42诱导的线粒体融合蛋白和线粒体膜电位降低以及线粒体分裂蛋白DRP1的磷酸化（P<0.05）。（5）杨梅素阻断了Aβ1-42寡聚体诱导的SH-SY5Y细胞中ROS产生和DNA损伤（P<0.01）。结论杨梅素可抑制Aβ1-42寡聚体诱导的tau蛋白过度磷酸化、突触前和突触后蛋白的损伤、线粒体功能障碍及氧化应激反应，并且上述保护作用经GSK-3β和ERK1/2信号通路介导。

关键词：淀粉样蛋白 ERK1/2通路 GSK-3β通路杨梅素寡聚体氧化应激突触损伤

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GIV对脑缺血/再灌注损伤模型中神经炎症反应的影响

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安徽医科大学学报 2023年第1期58卷 54-59页

作者：陈明石鹏夏明燕龙婷婷禹文峰贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室贵阳550004 贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学基础医学院贵阳550004

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑... 详细信息

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑梗死面积;Longa神经生物学评分评价小鼠的神经功能缺损程度;ELISA检测小鼠外周血及细胞培养物上清液中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放水平、Western blot检测小鼠梗死灶周围皮质区组织中卷曲螺旋结构域蛋白(GIV)、TREM2及TLR4的蛋白表达;不同浓度(1、5、10μg/ml)的脂多糖(LPS),刺激BV2细胞24 h建立神经炎症模型,qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA水平、Western blot检测GIV的表达;运用siRNA干扰技术敲低GIV基因的表达后进行OGD/R培养处理;ELISA检测细胞培养基上清液中IL-6和TNF-α的释放浓度;Western blot检测GIV的敲低效率。结果成功构建的MCAO/R及OGD/R模型均激活了神经炎症应答反应,诱导了GIV的蛋白表达降低;MCAO/R诱导了小鼠外周血中IL-6和TNF-α的释放浓度增加,促进了TREM2及TLR4的蛋白表达;LPS激活了BV2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α表达,但不影响GIV的表达;siRNA干扰GIV基因的表达后进一步增加炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结论GIV基因可能特异性地参与调控脑缺血再灌注损伤诱导的神经炎症应答反应,其可能是脑缺血再灌注损伤的一个潜在治疗靶点。

关键词： GIV 脑缺血/再灌注损伤脂多糖氧糖剥夺/复氧 BV2细胞神经炎症

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活性氧ROS在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 379-383页

作者：谢渊刘正美周建奖赵艳鲍利雅王琴容贵州医科大学地方病与少数民族性疾病教育部重点实验室&分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染科实验室贵州省妇幼保健医院

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测... 详细信息

目的探讨细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导胃上皮细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法培养Hp国际标准株NCTC11639和胃黏膜上皮细胞株GES-1。用Hp感染细胞GES-1 6 h,采用活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS;用25 mmol/L的活性氧ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)预处理GES-1细胞30 min,再按照MOI为100∶1、200∶1加入Hp与细胞共孵育6 h和12 h,通过Western blot检测细胞内NLRP3、caspase-1 p10、ASC蛋白水平,采用ELISA检测上清液中IL-1β含量;实验设未感染对照组。结果与未感染组比较,Hp感染组细胞内ROS生成增多;无论是感染6 h还是感染12 h, NLRP3、caspase-1及ASC蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β的浓度均随着感染复数的增加而增加(均P<0.05);NAC预处理后再用Hp感染,细胞NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达降低,IL-1β的浓度也降低(均P<0.05);Hp感染6 h和12 h结果一致。结论 ROS途径可能参与Hp对GES-1细胞NLRP3炎症小体的激活。

关键词：幽门螺杆菌 NLRP3炎症小体活性氧

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马凡综合征口腔颌面部症状的研究进展

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实用医学杂志 2020年第1期36卷 127-130页

作者：周倩廖健程余婷李芳伍超石前会齐昱晗洪伟贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

马凡综合征(marfan syndrome,MFS)是常染色体显性遗传的结缔组织疾病,由微纤维蛋白1基因突变引起,突变类型多,表型差异大,临床诊断困难。主要造成眼部、骨骼及心血管系统异常。而口腔颌面部异常表现可帮助口腔医生在早期发现马凡综合征... 详细信息

马凡综合征(marfan syndrome,MFS)是常染色体显性遗传的结缔组织疾病,由微纤维蛋白1基因突变引起,突变类型多,表型差异大,临床诊断困难。主要造成眼部、骨骼及心血管系统异常。而口腔颌面部异常表现可帮助口腔医生在早期发现马凡综合征。本文就该病的发病机制、口腔颌面部临床表现、诊断及治疗作一综述。

关键词：马凡综合征常染色体诊断治疗

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燃煤污染型地方性氟中毒病区儿童智商与尿氟的关系

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中华地方病学杂志 2022年第2期41卷 117-119页

作者：田薇赵安宿喻艳琴王婵娟张婷单可人张茜何燕贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的探讨贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区梭戛苗族彝族回族乡(简称梭戛乡)儿童智力水平与尿氟之间的关系。方法2019年4月,在梭戛乡的3所学校选择173名10~13岁儿童作为调查对象,按照是否有氟斑牙,将儿童分为病例组(n=104)和对照组(n=69... 详细信息

目的探讨贵州省燃煤污染型地方性氟中毒病区梭戛苗族彝族回族乡(简称梭戛乡)儿童智力水平与尿氟之间的关系。方法2019年4月,在梭戛乡的3所学校选择173名10~13岁儿童作为调查对象,按照是否有氟斑牙,将儿童分为病例组(n=104)和对照组(n=69)。采集调查对象中段尿样,采用离子选择电极法检测尿氟;采用联合型瑞文测试农村版(CRT-RC2)进行儿童智商(IQ)测试。采用线性回归分析观察尿氟与IQ之间的关联,结果以回归系数(β)和95%置信区间(CI)表示。结果病例组尿氟高于对照组[(2.14±1.78)比(1.53±0.98)mg/L],IQ值低于对照组[(92.33±11.68)比(100.38±11.87)分],差异均有统计学意义(t=2.58、4.41,P均<0.05)。病例组尿氟(X)与IQ(Y)的线性回归方程为Y=96.99-2.86X,尿氟每增加1 mg/L,IQ下降2.86分(β=-2.86,95%CI:-5.48~-0.24)。结论长期处于燃煤污染的氟环境可能会对儿童的智力产生损害,儿童IQ随尿氟的增加而下降。

关键词：氟儿童尿智商

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