检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2002年第1期29卷 60-64页

作者：任浩朱分禄戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HG... 详细信息

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HGV在HepG2细胞中的复制和表达。HepG2细胞在转染后24h便可在培养上清液中检测到HGV负链RNA,传代感染的细胞及培养上清液中可检测到HGV正、负链RNA。在90d内传代20余次,均能检测到HGV的复制。免疫组化和Western　blot可检测到HGV E2蛋白在感染细胞中的表达。HGV感染细胞经冻存后复苏,仍能检测到 HGV RNA。故 HGV RNA基因组能够在HepG2细胞中复制和表达,此细胞模型有可能用于HGV的复制与感染防治的研究。

关键词：庚型肝炎病毒 HGV RNA基因组 HepG2细胞复制表达

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铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究

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第三军医大学学报 2004年第13期26卷 1133-1136页

作者：黄建军胡晓梅饶贤才张克斌金晓琳周莹冰李明申晓冬朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观... 详细信息

目的　确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法　电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果　噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论　PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体短尾噬菌体溶原性最佳感染复数一步生长实验

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两株钩端螺旋体16s rRNA基因部分核苷酸序列分析

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中国人兽共患病杂志 1993年第2期9卷 7-10页

作者：陆淼泉李娜桥本安弘江崎孝行浙江医科大学微生物学教研室日本岐阜大学医学部微生物学教研室

本文采用聚合酶链反应技术对爪哇型和帕托克型两株钩端螺旋体(简称钩体)的部分16s rRNA基因进行扩增和核苷酸序列分析,并与已报道的犬型钩体序列加以比较。结果发现爪哇型钩体与犬型钩体的16s rRNA基因核苷酸序列具有高度同源性,而在爪... 详细信息

本文采用聚合酶链反应技术对爪哇型和帕托克型两株钩端螺旋体(简称钩体)的部分16s rRNA基因进行扩增和核苷酸序列分析,并与已报道的犬型钩体序列加以比较。结果发现爪哇型钩体与犬型钩体的16s rRNA基因核苷酸序列具有高度同源性,而在爪哇型与帕托克型之间则存在着较明显差别。

关键词：钩端螺旋体 rRNA 核苷酸基因

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血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

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第二军医大学学报 2001年第1期22卷 36-39页

作者：贺祥王路潘卫曹明媚芮耀诚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2... 详细信息

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2 0 0分子筛纯化 ;通过体外内皮细胞 (ECV30 4)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜 (CAM)新生血管实验检测其抑制活性。结果 :Endo-statin在 DH5α中的表达率为 2 8.5 % ,纯化后纯度可达 90 .5 %。 Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,IC5 0 为 72μg/ m l;2 0μg/ ml时使细胞于 48h发生明显凋亡 ;2 0 0μg/ ml的 endostatin可使 CAM新生血管化率下降 30 %。结论 :研究结果表明 endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用。

关键词：血管生成抑素基因表达内皮细胞生物学效应 ENDOSTAIN 胶原蛋白

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应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达

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第三军医大学学报 2004年第4期26卷 294-297页

作者：蹇锐程小星安静陈炜王嘉丽张俊磊万颖杰陈宗涛第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间... 详细信息

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果　 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论　本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl

关键词：载体介导 RNAi Bcl-2 表达

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鞭毛染色法染色条件的探索

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第三军医大学学报 1998年第2期20卷 183-184页

作者：蹇锐李芹阶刘启富陈剑第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：探索一套细菌鞭毛染色法的最佳化条件。方法：采用不同琼脂浓度的培养基中生长的变形杆菌，以不同菌液浓度制成涂片，染色，对比其在不同媒染剂、媒染时间、染色液和染色时间条件下的影响。结果：通过对不同染色条件进行优化筛选... 详细信息

目的：探索一套细菌鞭毛染色法的最佳化条件。方法：采用不同琼脂浓度的培养基中生长的变形杆菌，以不同菌液浓度制成涂片，染色，对比其在不同媒染剂、媒染时间、染色液和染色时间条件下的影响。结果：通过对不同染色条件进行优化筛选，确定了一套最佳条件。结论：改进后的染色法所需试剂少，染色时间短，操作简单，鞭毛着色清晰，重复性好。

关键词：细菌鞭毛染色法染色条件

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对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 84-86页

作者：黄建军饶贤才胡晓梅金晓琳朱军民胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分... 详细信息

目的　探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果。方法　将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳 ,回收单一目的片段并再行电泳 ,观察非目的片段的分离效果。结果　第一次回收的“单一”目的片段中 ,除目的DNA外 ,还含有多条较小的DNA分子 ;再次电泳回收的单一目的片段中 ,肉眼已看不见其它DNA分子 ,其纯度已大为提高 ;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段。结论　琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开 ,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子。

关键词： DNA 琼脂糖凝胶电泳回收

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PaP3噬菌体53×10^3蛋白编码基因的确定

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第三军医大学学报 2004年第1期26卷 51-53页

作者：朱军民金晓琳饶贤才黄建军张克斌胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从P... 详细信息

目的　确认PaP3噬菌体 5 3× 10 3 蛋白的编码基因。方法　用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒 ,通过SDS PAGE电泳分析该噬菌体的结构性蛋白带 ,转印PVDF膜后 ,对 5 3× 10 3 蛋白进行N 端氨基酸测序 ,进而从PaP3全基因组的 2 5 2个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果　PaP3噬菌体的结构性蛋白共发现有 8个 ,其中 5 3× 10 3 蛋白是由ORF2 9893编码的。 5 3× 10 3 蛋白编码基因全长 15 2 4bp ,G +C =5 4 92 %,编码 5 0 8个氨基酸。该蛋白分子质量为 5 3 7× 10 3 ,等电点 (PI)为 7 2 0 7。结论　 5 3× 10 3 蛋白是由噬菌体基因组中ORF2 9893编码的 ,共由 5 0 8个氨基酸组成。

关键词： PaP3噬菌体结构性蛋白编码基因

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噬菌体表面展示人干扰素-α 2b

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 403-406页

作者：吴晓兰潘卫马仲才陈秋莉武文斌曹明媚戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a... 详细信息

目的：建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法：利用噬菌体表面展示（phage display）技术表达人于扰素-α2b（hIFN-αa2b）基因。结果：生物活性测定表明，3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a的活性相当，并能被 IFN-α单抗中和。结论：hlFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达，即成功地建立了噬菌体展示外源肽（hIFN-α）的技术平台。

关键词：人干扰素-α 抗病毒活性噬菌体表面展示

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庚型肝炎病毒研究现状与展望

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第二军医大学学报 2000年第9期21卷 802-805页

作者：戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(eme... 详细信息

病原微生物是人类健康的大敌,1977年至1997年的20年中,人类先后发现并鉴定的重要致病微生物就有近30种,包括埃博拉病毒、汉坦病毒、大肠杆菌O157、艾滋病毒、霍乱弧菌 O139等,学术界将这类微生物所致的疾病称为'新现传染病'(emerging infectious disea ses).由于对这类病原微生物本身及其致病机制了解甚少,加之人群缺乏免疫力及有效的防治方法,这类新的病原体常引起严重的传染性疾病,造成巨大的社会影响和经济损失.庚型肝炎病毒(hepatitis G virus,HGV)被认为是这类病原微生物之一.

关键词：庚型肝炎庚型肝炎病毒 HGV 病原微生物

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