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海马CA1区与眶额叶皮质的神经节律同步活动参与大鼠空间目标导向任务中的学习与记忆巩固

南方医科大学学报 2025年第3期45卷 479-487页

作者：唐令苇李佳松徐海兵南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广东广州510515

目的探究海马CA1区和眶额叶皮质(OFC)神经节律在空间目标导向任务中的作用机制。方法训练Long-Evans大鼠(n=4)在陆地式水迷宫(Cheese-board迷宫)执行空间目标导向任务。空间目标导向任务分别设置学习前测试时期、学习前睡眠时期、学习... 详细信息

目的探究海马CA1区和眶额叶皮质(OFC)神经节律在空间目标导向任务中的作用机制。方法训练Long-Evans大鼠(n=4)在陆地式水迷宫(Cheese-board迷宫)执行空间目标导向任务。空间目标导向任务分别设置学习前测试时期、学习前睡眠时期、学习时期、学习后睡眠时期和学习后测试时期。学习新奖赏位置前、后的测试时期用来评估大鼠对新、旧奖赏位置的记忆能力,学习两个新奖赏位置的时期用来评估大鼠对新奖赏位置的学习能力。在学习期内,将任务态划分为两种过程:目标导航过程和奖赏获取过程。学习阶段平均划分成8份。利用可驱动微型电极同步记录海马CA1区与OFC的局部场电位(LFP)。通过计算功率谱密度分析各脑区Theta(6~12 Hz)、Beta(15~30 Hz)、Low gamma(30~60 Hz)和High gamma节律(60~90 Hz)神经活动在不同任务态中的活动强度,并结合相干性、相位锁相值(PLV)和相位-幅值跨频耦合(PAC)分析,探讨海马CA1区与OFC在空间目标导向任务中与学习和记忆相关的作用机制。结果在空间目标导向任务中,OFC各个节律的神经活动在同一任务态中表现出一致性(P>0.05),而海马CA1区在Beta节律和High gamma节律神经活动强度则表现出差异(P<0.05);相较于奖赏获取过程的任务态,双脑区的高相干性和高锁相值主要出现在目标导航过程中,并且这些同步效应在学习稳定阶段高于学习早期阶段(第1阶段vs第8阶段P<0.01);相较于学习前的测试时期,学习后的测试时期显示出更强的海马CA1区-Theta相位与OFC-Low gamma幅值跨频耦合(P<0.05)。结论空间目标导向任务中,对目标路径的学习与记忆的巩固需要海马CA1区与OFC的同步参与。此外,海马CA1区与OFC之间以跨频耦合方式在奖赏位置短期记忆的维持中发挥重要作用。

关键词：目标导向任务海马CA1 眶额叶皮质神经节律

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成年大鼠脑桥三叉神经束局部脱髓鞘诱发三叉神经痛样行为

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陆军军医大学学报 2024年第17期46卷 1943-1950页

作者：文菊梅齐建国四川大学华西基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室成都610041

目的探究成年大鼠脑桥三叉神经束(pontine trigeminal tract,PTT)局部脱髓鞘能否诱发三叉神经痛样行为。方法利用脑立体定位微量注射技术向250~270 g雄性SD大鼠PTT区域注射1%溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)或1×PBS,... 详细信息

目的探究成年大鼠脑桥三叉神经束(pontine trigeminal tract,PTT)局部脱髓鞘能否诱发三叉神经痛样行为。方法利用脑立体定位微量注射技术向250~270 g雄性SD大鼠PTT区域注射1%溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)或1×PBS,分别建立PTT脱髓鞘模型组(LPC组)和对照组。通过髓鞘荧光染色评估PTT区域脱髓鞘改变情况。采用行为学实验检测大鼠缩头反应机械刺激阈值、单侧眼睑缩窄时间和快速抚面次数。通过腹腔注射给予大鼠卡马西平(50 mg/kg)药物处理,评估其行为学改变。结果以Bregma为坐标原点,于前后径(axterior-posterior,AP)-9.86 mm、内外径(medial-lateral,ML)0 mm和背腹径(dorsal-ventral,DV)0 mm处左侧18°倾斜脑立体定位仪的操作臂,使玻璃微电极下行9.22 mm后,以250 nL/min的速度注射250 nL的1%LPC,能够稳定可靠地建立成年大鼠PTT局部脱髓鞘模型。髓鞘荧光染色结果显示成年大鼠PTT局部脱髓鞘模型中脱髓鞘峰点为造模后第7天。行为学实验发现,与对照组相比,引发LPC组大鼠缩头反应的Air-puff气体刺激阈值和von Frey纤维丝刺激阈值显著降低(P<0.01);微量注射后第7天,LPC组大鼠的左侧单侧眼睑缩窄时间和快速抚面次数在不同强度的机械刺激下均显著增加(P<0.01)。卡马西平可显著减少机械刺激触发的左侧单侧快速抚面次数(P<0.01)。结论成年大鼠PTT局部脱髓鞘可以诱发三叉神经痛样行为。

关键词：三叉神经痛脑桥三叉神经束脱髓鞘溶血磷脂酰胆碱

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小分子化合物在神经元重编程中的应用研究进展

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生理学报 2025年第1期77卷 181-193页

作者：戴子为刘红袁一旻张静宜秦尚尧苏志达海军军医大学基础医学院神经生物学教研室分子神经生物学教育部重点实验室海军军医大学麻醉系疼痛治疗学研究室

神经元重编程是将非神经元成体细胞转分化为神经元的一项创新性技术，能够补充、替代丢失或受损的神经元，为中枢神经系统再生修复提供了一种潜在的有效策略。在细胞内高表达转录因子是诱导神经元重编程一种常用的重要手段，但其重编程... 详细信息

神经元重编程是将非神经元成体细胞转分化为神经元的一项创新性技术，能够补充、替代丢失或受损的神经元，为中枢神经系统再生修复提供了一种潜在的有效策略。在细胞内高表达转录因子是诱导神经元重编程一种常用的重要手段，但其重编程效率比较低，且导入外源基因可能引起宿主基因组不稳定或诱发基因突变，从而限制了它们未来的临床转化应用。相对于转录因子，小分子化合物在神经元重编程领域具有得天独厚的优势，能够克服传统转录因子诱导神经元重编程的诸多局限性，具有更好的应用前景。本文就近年来小分子化合物介导的神经元重编程的相关研究进展及其在中枢神经系统再生修复中的应用进行简要综述。

关键词：小分子化合物神经元重编程中枢神经系统神经再生修复

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弓形虫病治疗:从传统药物到纳米药物

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 1834-1844页

作者：孙晓敬张磊田甜马茜姚佳汪洋西安医学院基础医学部病原生物学教研室西安710021

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的机会致病原虫,几乎感染所有的温血动物,引起人兽共患弓形虫病。免疫力正常的个体感染常呈隐性感染,无明显的临床症状;但免疫功能缺陷的人或动物感染则会导致严重后果,需进行有效治疗... 详细信息

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的机会致病原虫,几乎感染所有的温血动物,引起人兽共患弓形虫病。免疫力正常的个体感染常呈隐性感染,无明显的临床症状;但免疫功能缺陷的人或动物感染则会导致严重后果,需进行有效治疗。目前,弓形虫病已是全世界绵羊和山羊流产的常见原因,该病给人类健康和畜牧业生产都造成了严重影响。因此,控制人和动物弓形虫病对公共卫生和畜牧业经济发展极为重要。以往用于弓形虫病治疗的药物,由于其副作用和/或疾病分期的特点,治疗效果大大受限,然而纳米药物可有效克服传统药物的局限性。本文就纳米技术在弓形虫病治疗方面的新进展作一综述,以期为抗弓形虫病药物的研究提供新思路。

关键词：弓形虫传统药物纳米载药系统固体脂质纳米粒聚合物纳米粒子

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采用流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞

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海军军医大学学报 2024年第4期45卷 448-453页

作者：周锦涛俞仲望曹莉海军军医大学(第二军医大学)基础医学院神经生物学教研室上海200433

目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓... 详细信息

目的建立通过流式细胞分选术区分中枢神经系统内小胶质细胞和浸润巨噬细胞的方法。方法用成年C57BL/6小鼠建立双侧颈总动脉狭窄模型,分别采用集落刺激因子1受体抑制剂PLX5622或氯膦酸盐脂质体处理。将分离、匀浆、重悬后的小鼠脑和脊髓组织进行Percoll密度梯度离心,得到单核细胞悬液。采用CD45、CD11b和淋巴细胞抗原6家族成员C(Ly6C)抗体进行流式分选,获得小胶质细胞(CD11b^(+)CD45^(low)Ly6C^(-)细胞)和浸润巨噬细胞(CD11b^(+)CD45^(high)Ly6C^(+)细胞),并验证PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式获得的处理效果。结果通过CD45、CD11b和Ly6C抗体可以有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞。与对照组比较,PLX5622处理后小胶质细胞数量减少(P=0.001),而氯膦酸盐脂质体处理后浸润巨噬细胞数量减少(P<0.001)。结论所建立的流式细胞分选方法可有效区分中枢神经系统中小胶质细胞和浸润巨噬细胞,PLX5622和氯膦酸盐脂质体2种给药范式可分别选择性清除中枢神经系统内的小胶质细胞和浸润巨噬细胞。

关键词：小胶质细胞浸润巨噬细胞流式细胞分选术双侧颈总动脉狭窄 PLX5622 氯膦酸盐脂质体

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华支睾吸虫LAMP方法的建立与初步应用

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黑龙江畜牧兽医 2024年第13期 47-51页

作者：孙晓敬马茜田甜张磊刘丽君姚佳汪洋西安医学院基础医学部病原生物学教研室西安710021

为了建立华支睾吸虫环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法,试验利用GenBank中华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的线粒体全基因组设计特异性引物,然后构建LAMP方法,并验证了LAMP方法的特异性和敏感... 详细信息

为了建立华支睾吸虫环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测方法,试验利用GenBank中华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的线粒体全基因组设计特异性引物,然后构建LAMP方法,并验证了LAMP方法的特异性和敏感性;以及用粪便镜检(金标准)、PCR和LAMP方法同时检测45份犬粪便样本,评价LAMP方法的检测效果。结果表明:经序列比对,筛选得到华支睾吸虫特异性基因Unit R2,以该基因序列为靶标构建检测方法,优化后的总体积为50μL,Bst3.0 DNA聚合酶的最适用量为1μL,MgSO_(4)的最适浓度为6 mmol/L,最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为40 min。构建的LAMP方法可以检测华支睾吸虫整个生命发育周期,实现了对其成虫、嚢蚴及虫卵的全方位覆盖;与其他种类寄生虫无交叉反应;对基因组DNA的最低检测限为10 fg,是PCR方法的100倍;与金标准相比,LAMP方法的特异性为100%(30/30),敏感性为93.33%(14/15)。说明试验建立的华支睾吸虫LAMP方法特异性强、敏感性高、检测结果准确,具有快速检测华支睾吸虫的潜力。

关键词：华支睾吸虫环介导等温扩增(LAMP) 线粒体基因组核酸检测

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少突胶质前体细胞的免疫调控功能

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生理学报 2024年第5期76卷 743-751页

作者：陈祥何成刘鹏海军军医大学分子神经生物学教育部重点实验室基础医学院神经生物学教研室中国人民解放军第903医院检验科

少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的经典功能是分化为成熟的少突胶质细胞并参与中枢神经系统的髓鞘形成。在多种脱髓鞘疾病情况下，如颅脑外伤、脑缺血、多发性硬化等，OPCs虽然存在于脱髓鞘区域，但难以正常分... 详细信息

少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的经典功能是分化为成熟的少突胶质细胞并参与中枢神经系统的髓鞘形成。在多种脱髓鞘疾病情况下，如颅脑外伤、脑缺血、多发性硬化等，OPCs虽然存在于脱髓鞘区域，但难以正常分化为成熟的少突胶质细胞并进行再髓鞘化。传统观点认为OPCs是免疫反应的承受者，但新的研究显示在疾病发生过程中，OPCs并非单纯是免疫应答对象，而是深度参与免疫调控过程。干扰素γ (interferon γ,IFN-γ)、白细胞介素-17 (interleukin 17,IL-17)等细胞因子可诱导OPCs表型改变，形成免疫相关OPCs (immune associated OPCs,imOPCs)，参与天然免疫和适应性免疫活化。imOPCs表达包括Toll样受体在内的多个天然免疫模式识别受体，并具有吞噬髓鞘碎片、提呈抗原的能力。此外，imOPCs还可分泌多种炎性因子和趋化因子，调控Th0细胞分化和NK细胞、粒细胞、巨噬细胞等募集。探究imOPCs的免疫调控功能，对于认识脱髓鞘相关疾病机理，提出治疗新策略有着重要意义。

关键词：少突胶质前体细胞神经免疫免疫调控炎症反应抗原提呈

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小胶质细胞固有免疫记忆的表观遗传调节与神经系统疾病

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生理学报 2022年第6期74卷 1031-1038页

作者：周锦涛俞仲望曹莉海军军医大学基础医学院神经生物学教研室

小胶质细胞具有介导固有免疫记忆的能力，可由初级刺激引起小胶质细胞重编程，从而增强或抑制小胶质细胞对次级刺激的免疫反应。炎症刺激是小胶质细胞产生固有免疫记忆的重要因素，单一或重复的炎症刺激是小胶质细胞形成不同细胞表型的... 详细信息

小胶质细胞具有介导固有免疫记忆的能力，可由初级刺激引起小胶质细胞重编程，从而增强或抑制小胶质细胞对次级刺激的免疫反应。炎症刺激是小胶质细胞产生固有免疫记忆的重要因素，单一或重复的炎症刺激是小胶质细胞形成不同细胞表型的诱因。小胶质细胞介导固有免疫反应过程中涉及许多免疫记忆调控。免疫记忆调控是多方面综合作用的结果。增强子修饰是小胶质细胞表观遗传调控的关键途径，H3K27ac增强子标记与免疫训练形成密切相关。细胞因子TGF-β1介导IL-10和IL-1β之间的相互作用，从而影响小胶质细胞表型。小胶质细胞糖酵解活性在免疫训练形成后增强，而氧化磷酸化与免疫耐受形成有关。固有免疫记忆与神经退行性疾病、脑肿瘤、脑损伤和精神疾病密切相关。深入研究小胶质细胞介导固有免疫反应的机制有助于加强对中枢神经系统疾病发生和发展的进一步认识，也有助于为治疗中枢神经系统疾病提供新思路。

关键词：小胶质细胞固有免疫记忆表观遗传修饰细胞因子代谢通路中枢神经系统疾病

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C57BL/6小鼠大脑皮层区与基底神经节隆起区神经元突触发育过程比较

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 602-611页

作者：赵艳卢广泉杜金乐潘雨绮董子意康鑫高弋婷高方杨加周延安大学医学院组织学与胚胎学教研室陕西延安716099 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室陕西西安710032

目的:观察小鼠皮层区和基底神经节隆起(GE)区神经元突触发育过程,阐明兴奋性突触和抑制性突触在不同脑区的体内外发育差异。方法:C57BL/6雌鼠于妊娠第13.5~15.5天断颈处死后,经无菌操作取胚胎小鼠,显微镜下逐步分离获取胚胎小鼠脑组织... 详细信息

目的:观察小鼠皮层区和基底神经节隆起(GE)区神经元突触发育过程,阐明兴奋性突触和抑制性突触在不同脑区的体内外发育差异。方法:C57BL/6雌鼠于妊娠第13.5~15.5天断颈处死后,经无菌操作取胚胎小鼠,显微镜下逐步分离获取胚胎小鼠脑组织皮层区和GE区。体外原代培养胚胎小鼠神经元,于培养3、7、14和21 d分别收集细胞样品,并将其作为培养3、7、14和21 d组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠皮层区和GE区原代培养神经元中突触后表达蛋白突触后密度蛋白95(PSD95)及桥尾蛋白(Gephyrin) mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组小鼠皮层区和GE区原代培养神经元中囊泡谷氨酸转运蛋白1(vGLUT1)、 PSD95、囊泡γ-氨基丁酸(GABA)转运蛋白(vGAT)及Gephyrin蛋白表达水平。免疫荧光法检测胚胎小鼠脑组织皮层区和GE区神经元中vGLUT1及vGAT蛋白表达水平。结果:与培养3 d组比较,培养14和21 d组小鼠皮层区和GE区原代培养神经元中PSD95及Gephyrin mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与皮层区比较,培养14 d组小鼠GE区原代培养神经元中Gephyrin mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。显微镜下观察,培养14 d组小鼠皮层区和GE区原代培养神经元中兴奋性突触及抑制性突触均初步发育,相关蛋白呈阳性表达;其中兴奋性突触相关蛋白阳性表达在皮层区神经元中更为明显,且突触前分子vGLUT1和突触后分子PSD95在皮层区神经元的胞体及突起部位均呈现共定位的特征;抑制性突触前分子vGAT蛋白和突触后分子Gephyrin蛋白在GE区神经元胞体及突起中也呈现共定位的特征,且突触前分子较相应的突触后分子蛋白阳性表达更明显。与皮层区比较,培养14 d组小鼠GE区原代培养神经元中vGLUT1和PSD95蛋白表达水平明显降低(P<0.01),vGAT和Gephyrin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。培养21 d组小鼠皮层区和GE区原代培养神经元突触相关蛋白阳性表达增加,兴奋性突触和抑制性突触进一步成熟并完善。皮层区和GE区原代培养神经元的胞体及突起部位均形成了丰富的突触前后对应的表达模式,突触结构逐步发育良好,且突触前分子较相应的突触后分子蛋白阳性表达更明显。与皮层区比较,培养21 d组小鼠GE区原代培养神经元中vGLUT1和PSD95蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),vGAT和Gephyrin蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与皮层区比较,胚胎小鼠脑组织GE区神经元中vGLUT1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),vGAT蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:皮层区和GE区神经元的突触发育具有明显的差异性,皮层区兴奋性突触发育较早,GE区抑制性突触发育较早。突触的脑区特异性发育提示不同细胞类型的神经疾病可能具有不同的发育来源。

关键词：神经元发育兴奋性突触抑制性突触皮层区基底神经节隆起区

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弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物信息学分析及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2023年第15期 18-24,129,130页

作者：孙晓敬田甜马茜张磊李薇姚佳汪洋西安医学院基础医学部病原生物学教研室西安710021

为了预测分析弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物结构及功能,并制备多克隆抗体,试验首先采用生物信息学软件对TgASP2蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点及B、T淋巴细胞抗原表位等进行分析,然后构建... 详细信息

为了预测分析弓形虫天冬氨酸蛋白酶2(TgASP2)的生物结构及功能,并制备多克隆抗体,试验首先采用生物信息学软件对TgASP2蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、信号肽、跨膜结构域、磷酸化位点及B、T淋巴细胞抗原表位等进行分析,然后构建原核表达载体,采用Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白,再免疫大鼠制备特异性多克隆抗体。结果表明:TgASP2蛋白的分子式为C_(2296)H_(3588)N_(626)O_(661)S_(24),等电点为7.22,为亲水性稳定蛋白;N端第1~19位氨基酸为信号肽序列,无跨膜结构域,共有37个磷酸化位点;具有14个B淋巴细胞线性表位、4个CTL细胞抗原表位及3个Th细胞抗原表位。试验成功构建出重组质粒pET-28a(+)-TgASP2,获得了可溶性重组蛋白rTgASP2;成功制备出多克隆抗体,且制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫内源性TgASP2蛋白,抗体效价高达1∶128000。说明TgASP2蛋白具有一定的免疫原性,能引发良好的免疫应答。

关键词：弓形虫天冬氨酸蛋白酶2 生物信息学分析表达载体表位预测多克隆抗体

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