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肌肽通过AMPK/mTOR信号通路抑制自噬对氧糖剥夺/复糖复氧诱导星形胶质细胞损伤的保护作用

吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1297-1304页

作者：王宇彤冉睿黎边疆姜晓涵宋俊秋王德威杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的:探讨肌肽(CAR)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的星形胶质细胞(AS)损伤的改善作用,并阐明其可能的作用机制。方法:将AS分为对照组、模型组(OGD/R组)、OGD/R+CAR组(CAR组)和OGD/R+CAR+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂AICAR组(CAR+AICA... 详细信息

目的:探讨肌肽(CAR)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的星形胶质细胞(AS)损伤的改善作用,并阐明其可能的作用机制。方法:将AS分为对照组、模型组(OGD/R组)、OGD/R+CAR组(CAR组)和OGD/R+CAR+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂AICAR组(CAR+AICAR组)。MTT法和绿菁染色检测各组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率,AnnexinⅤ-FITC/PI法流式细胞术检测各组AS凋亡率,Western blotting法检测各组AS中AMPK、磷酸化AMPK (p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、微管相关蛋白轻链3B (LC3B)、Beclin-1和P62蛋白表达水平,免疫荧光染色法观察各组AS中LC3B阳性荧光强度。结果:与对照组比较,OGD/R组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显降低(P<0.01),AS凋亡率明显升高(P<0.01), AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值及P62蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与OGD/R组比较,CAR组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显升高(P<0.01),AS凋亡率明显降低(P<0.01),AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值和p62蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与CAR组比较,CAR+AICAR组AS存活率和绿菁染色阳性细胞率明显降低(P<0.01),AS凋亡率升高(P<0.01)、AS中p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值及Beclin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值和P62蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。LC3B免疫荧光染色结果与Westernblotting法检测结果趋势一致。结结论论:CAR对OGD/R所致AS损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制AMPK/mTOR信号途径,进而抑制细胞自噬有关。

关键词：肌肽自噬星形胶质细胞腺苷酸活化蛋白激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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泛凋亡在肝脏疾病中的作用及其机制研究进展

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中华肝脏病杂志 2024年第11期32卷 1047-1052页

作者：缪立颖王欣韩洋洋新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆地方病分子生物学重点实验室乌鲁木齐830017

细胞焦亡、细胞凋亡、坏死性凋亡是3种关键的程序性细胞死亡(PCD)通路。研究发现3条通路间存在广泛的相互串扰现象,并提出了泛凋亡(PANoptosis)概念,即由泛凋亡体(PANoptosome)复合物调节的炎症性PCD通路,有焦亡、细胞凋亡和/或坏死性... 详细信息

细胞焦亡、细胞凋亡、坏死性凋亡是3种关键的程序性细胞死亡(PCD)通路。研究发现3条通路间存在广泛的相互串扰现象,并提出了泛凋亡(PANoptosis)概念,即由泛凋亡体(PANoptosome)复合物调节的炎症性PCD通路,有焦亡、细胞凋亡和/或坏死性凋亡的关键特征,这些特征不能单独由这些PCD通路中的任何一种机制来解释。越来越多的研究发现泛凋亡参与许多肝脏相关疾病过程,包括肝癌、代谢相关脂肪性肝病、肝衰竭、病毒性暴发性肝炎等。因此,现就泛凋亡的潜在机制以及泛凋亡在不同肝脏疾病中的作用及其机制进行综述,为多种肝脏相关疾病发病机制的研究与潜在治疗策略提供方向。

关键词：程序性细胞死亡泛凋亡肝脏相关疾病发病机制

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TRAIL联合顺铂诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞过度性自噬的分子机制

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中国药理学通报 2023年第8期39卷 1599-1600页

作者：岳子雯杨彪刘皓周伟强沈阳医学院基础医学院辽宁沈阳110034 沈阳医学院病原生物学教研室辽宁沈阳110034

流行病学报道,乳腺癌成为目前女性发病率和死亡率最高的癌症[1]。而铂类药物也是临床上最常用的周期非特异性抗肿瘤药物,在临床治疗实体肿瘤中显示了良好的疗效[2]。其中顺铂作为一线临床的传统用药,其靶点选择范围窄、疗效差、易耐药... 详细信息

流行病学报道,乳腺癌成为目前女性发病率和死亡率最高的癌症[1]。而铂类药物也是临床上最常用的周期非特异性抗肿瘤药物,在临床治疗实体肿瘤中显示了良好的疗效[2]。其中顺铂作为一线临床的传统用药,其靶点选择范围窄、疗效差、易耐药等问题,尚未得到解决。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)属于肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族。

关键词：顺铂肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体三阴乳腺癌自噬 MDA-MB-231 细胞凋亡

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信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

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基于雨课堂及微课的BOPPPS教学模式在医学微生物学课程中的设计与应用

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微生物学通报 2024年第12期51卷 5240-5248页

作者：乐率饶贤才周晶赵岩王竞李刚李明卢曙光陆军军医大学基础医学院微生物学教研室重庆400038

在教育数字化转型时代背景下,利用信息化工具与数字化资源进行混合式教学,对于提升教学质效意义重大。针对医学微生物学课程教学中存在的内容复杂、教学方法手段单一、学员参与度不够、教学效果不佳等问题,通过在导入-目标-前测-参与式... 详细信息

在教育数字化转型时代背景下,利用信息化工具与数字化资源进行混合式教学,对于提升教学质效意义重大。针对医学微生物学课程教学中存在的内容复杂、教学方法手段单一、学员参与度不够、教学效果不佳等问题,通过在导入-目标-前测-参与式教学-后测-总结(bridge-in,objective,pre-assessment,participatory learning,post-assessment,and summary,BOPPPS)教学模式下整合雨课堂的在线互动教学平台与微课的短视频教学资源,构建了一种新型线上线下混合式教学模式,在医学微生物学课程中进行了应用实践,并通过问卷调查、成绩对比等方法对教学效果进行评估。结果表明,基于雨课堂及微课的BOPPPS教学模式显著提升了学员的学习兴趣和课堂参与度,同时也提高了学生的成绩。本研究证明了该教学模式在提升教学质量和学生学习效果方面的有效性,为医学教育领域的教学改革提供了有益参考。

关键词：雨课堂微课 BOPPPS教学模式医学微生物学教学设计与应用

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细胞与分子基础实验课程“情景式”教学模式探索

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生物学杂志 2025年第2期 112-117页

作者：钱美睿缪金林黄婉陈志南蒋建利空军军医大学基础医学院细胞生物学教研室国家分子医学转化中心

细胞与分子基础整合课程开设配套实验课程目的是提高学生对所学重难点的融会贯通和对实践能力的灵活应用，培养学生提出问题和解决问题的创新科研思维。文章分析该课程实验教学现状，包括教学方式模式化、教学内容冗余且连续性差、实验... 详细信息

细胞与分子基础整合课程开设配套实验课程目的是提高学生对所学重难点的融会贯通和对实践能力的灵活应用，培养学生提出问题和解决问题的创新科研思维。文章分析该课程实验教学现状，包括教学方式模式化、教学内容冗余且连续性差、实验内容陈旧以及教学效果评价维度单一等问题，并从课程设计，实验内容和考核目标3个方面探讨具体的实验教学改革实践，按照新时代背景下高校大学生创新创业能力培养，以临床病例为导向进行“情景式”实验课教学设计；基于科研思维培养教学模式重构实验内容；以科研思维为主、实验技能为辅建立多重维度考核方式，提升教学设计的实效性和创新性，促进细胞与分子基础课程建设，有效培养学生创新科研思维和科研素养，为培养具有科研创新精神和实践能力的医学人才提供新的思路和实践依据。

关键词：细胞与分子基础实验教学改革实践 “情景式”实验课教学设计创新科研思维

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miR-207调控结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的机制研究

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中国比较医学杂志 2024年第12期34卷 41-49页

作者：杜文雅代禹美乐林芝马涛吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra... 详细信息

目的miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。方法将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra并转染miRNA-207 mimics)和mi-NC组(感染H37Ra并转染mimics NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将miRNA-207 mimics和mimics NC转入Ana-1细胞。结核菌落形成单位计数评估miR-207对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-207、细胞凋亡基因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。Western blot检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达量。采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内ROS的荧光强度,以及检测细胞内LDH的含量。结果显微镜下观察成功建立感染模型,qPCR检测发现对照组miR-207表达量低于空白组(P<0.01),表明miR-207在空白组和对照组中差异性表达,mi组miR-207表达量显著高于mi-NC组(P<0.0001),表明成功建立转染模型。菌落形成单位计数发现mi组的菌落数高于mi-NC组和对照组(P<0.001)。流式细胞术检测发现mi组总凋亡高于mi-NC组和对照组(P<0.05)。qPCR及Western blot检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。对照组炎症基因相对表达量高于空白组(P<0.001),mi组高于mi-NC组(P<0.05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.01),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。自噬正调节基因LC3和Beclin1在对照组的相对表达量高于空白组(P<0.0001),mi组低于mi-NC组(P<0.05)。负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。ROS荧光强度检测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.001)。LDH检测发现对照组细胞内LDH含量高于空白组(P<0.01),mi组与mi-NC组含量无统计学意义(P>0.05)。结论miR-207过表达促进细胞凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于H37Ra的存活,为结核病的治疗提供新的方向。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra miR-207 自噬巨噬细胞凋亡焦亡

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酒精饮料对小鼠认知功能的影响及其机制

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中国医科大学学报 2023年第3期52卷 230-235页

作者：边欢欢程美嘉吴仪李彦怡邹丹沈阳医学院基础医学院病理生理学教研室沈阳110034 大阪大学大学院医学系研究科医学统计学教研室大阪565-0871 沈阳医学院沈阳110034 沈阳医学院基础医学院免疫学教研室沈阳110034

目的探讨长时间大量饮用不同乙醇含量的饮料对小鼠海马内参与自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及c-Jun N末端激酶(JNK)通路的影响,揭示含乙醇饮料对认知功能的影响及机制。方法将40只成年雌性小鼠随机分为对照(蒸馏水)组及不同浓度(... 详细信息

目的探讨长时间大量饮用不同乙醇含量的饮料对小鼠海马内参与自噬的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及c-Jun N末端激酶(JNK)通路的影响,揭示含乙醇饮料对认知功能的影响及机制。方法将40只成年雌性小鼠随机分为对照(蒸馏水)组及不同浓度(2.5%vol、11%vol及52%vol)乙醇组。利用Morris水迷宫检测小鼠认知功能,通过HE染色观察小鼠锥体细胞形态变化,用免疫印迹及免疫荧光法检测小鼠海马内相关蛋白的表达情况。结果2.5%vol、52%vol乙醇组小鼠出现认知障碍。2.5%vol、52%vol乙醇组小鼠mTOR-4EBP1通路相关蛋白表达高于对照组(P<0.05),自噬及JNK通路相关蛋白表达低于对照组(P<0.05)。11%vol乙醇组p-4EBP1表达低于2.5%vol、52%vol乙醇组(P<0.05),p-JNK及Beclin1蛋白表达高于2.5%vol、52%vol乙醇组(P<0.01)。结论长期过量饮用含2.5%vol、52%vol乙醇饮料对小鼠认知功能的损害比含11%vol乙醇的饮料更重,海马内与mTOR和JNK通路相关的自噬抑制可能参与此过程。

关键词：乙醇认知哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 c-Jun N末端激酶自噬

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脑型疟辅助治疗研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2023年第3期41卷 361-373,379页

作者：曹伟王一张熙致仝国栋杨超沈燕赵亚空军军医大学基础医学院陕西西安710032 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

脑型疟是恶性疟原虫感染的主要致死性并发症之一,发病机制尚不完全清楚。但目前的研究多认为,被疟原虫感染的红细胞黏附脑微血管内皮细胞引发的脑部微循环阻塞,以及由此产生的脑血管内皮细胞活化和炎细胞浸润共同导致的免疫病理损伤,协... 详细信息

脑型疟是恶性疟原虫感染的主要致死性并发症之一,发病机制尚不完全清楚。但目前的研究多认为,被疟原虫感染的红细胞黏附脑微血管内皮细胞引发的脑部微循环阻塞,以及由此产生的脑血管内皮细胞活化和炎细胞浸润共同导致的免疫病理损伤,协同造成血脑屏障破坏和脑水肿,是脑型疟最主要的发病机制。因此,脑血管内皮细胞活化、受损的程度是决定脑型疟进展、结局的关键因素之一。现有临床研究证明,即便给予积极有效的青蒿素类药物杀虫治疗也不能完全缓解脑型疟症状和可能继发的神经组织损伤,而联用糖皮质激素抗炎治疗副作用大。脑型疟辅助治疗研究涉及其发病机制的多个环节,但由于恶性疟原虫生活史特点和高度抗原变异等诸多因素影响,现有辅助治疗方法均未获预期疗效,亟待探索脑型疟辅助治疗新方法。本文主要以保护脑血管内皮细胞为靶点,从提升内皮细胞的自我保护功能和抑制其他炎细胞或有害因子2个方面对内皮细胞损伤的脑型疟辅助治疗研究进展进行综述。

关键词：脑型疟血管内皮细胞辅助治疗

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MTB Hsp60重组蛋白对巨噬细胞趋化功能的影响

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中国病原生物学杂志 2024年第2期19卷 157-161,171页

作者：卫麟娜高雪涵董品志吴荧浓王海燕罗军敏覃明遵义医科大学基础医学院免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室

目的研究结核分枝杆菌H37Rv重组热休克蛋白60(Heat shock protein 60 of Mycobacterium tuberculosis,MTB Hsp60)对巨噬细胞(RAW264.7)趋化功能的影响。方法MTB Hsp60重组蛋白(100 ng/mL)刺激巨噬细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR检测下列趋化因子如单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1,CCL2)、巨噬细胞炎症蛋白1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α,CCL3)、巨噬细胞炎症蛋白1β(Macrophage inflammatory protein-1β,MIP-1β,CCL4)、调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(Regulation of Activation,Expression and Secretion by Normal T Cells,RANTES,CCL5)和单核细胞趋化蛋白5(Monocyte chemotactic protein-5,MCP-5,CCL12)的mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12的分泌水平;Western bolt检测巨噬细胞表面趋化因子受体CC基序趋化因子受体1(C-C motif chemokine receptor 1,CCR1)、CCR2和CCR5的蛋白表达;流式细胞术检测表达趋化因子受体CCR1、CCR2、CCR5的巨噬细胞;Transwell实验检测巨噬细胞的趋化功能。结果100 ng/mL MTB Hsp60重组蛋白刺激巨噬细胞24 h后,其趋化因子CCL2、CCL3、CCL4及CCL12的mRNA表达水平无明显差异,但CCL5的mRNA水平显著上调(P<0.05);巨噬细胞表面主要的趋化因子受体CCR1、CCR2蛋白表达水平显著增高(P<0.05),而其表面CCR5蛋白的变化不明显;流式细胞术检测结果显示,与未处理组相比,处理组中CCR1^(+)、CCR2^(+)巨噬细胞数量明显增加(P<0.05),而CCR5^(+)巨噬细胞数量无明显差异;Transwell实验表明,经过MTB Hsp60重组蛋白处理后的巨噬细胞有更明显的被募集的趋势(P<0.05);而上清液中趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5及CCL12的释放水平无明显变化。结论MTB Hsp60重组蛋白能上调巨噬细胞中趋化因子CCL5的mRNA表达水平,能增加巨噬细胞表面趋化因子受体CCR1和CCR2的表达,并且能增强巨噬细胞的趋化功能。

关键词： MTB Hsp60重组蛋白巨噬细胞趋化因子趋化因子受体

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