检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2010年第11期26卷 2097-2100页

作者：朱丽红毕伟陆大祥谭宇蕙李杰芬暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 中山大学附属第二医院神经科广东广州510120 广州中医药大学基础医学院广东广州510405

目的:探讨胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响。方法:取对数生长期的SGC-7901细胞,加入2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L TdR孵育15h,去除TdR孵育10h,再次加入不同浓度的TdR孵育15h后收集各组细胞,流式细胞术分析... 详细信息

目的:探讨胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期的影响。方法:取对数生长期的SGC-7901细胞,加入2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L TdR孵育15h,去除TdR孵育10h,再次加入不同浓度的TdR孵育15h后收集各组细胞,流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分比。经不同浓度TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞后,再去除TdR孵育12h,收集各组细胞分析细胞周期各时相细胞百分比。结果:SGC-7901细胞经2mmol/L、4mmol/L和8mmol/L TdR双阻断法诱导,收获G0/G1期的细胞数分别为77.3%、77.5%和77.0%。再次去除TdR培养12h后,各期细胞百分比又可恢复正常范围。结论:2mmol/L TdR双阻断法诱导SGC-7901细胞即可在短时间内获得大量的G0/G1期细胞,是一种理想的获得大量处于"基态"的细胞的方法。

关键词：胸腺嘧啶核苷双阻断法 SGC-7901细胞细胞周期

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胃黏膜特异表达JC病毒T抗原质粒构建及表达鉴定

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中国医科大学学报 2010年第1期39卷 18-21页

作者：夏蒲徐小燕贾宝萍王薇关一夫高野康雄郑华川中国医科大学基础医学院生物化学研究室沈阳110001 中国医科大学基础医学院病理生理学教研室中国医科大学档案馆沈阳110001 日本富山大学医学部病理诊断教室

目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。... 详细信息

目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。利用酶切和DNA测序确认其DNA序列。免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCVT抗原质粒转染,用Western blot方法检测JCVT抗原的表达情况。结果K19-JCVT抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCVT抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达。结论同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题。

关键词： JC病毒 T抗原真核表达载体构建

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稳定表达EGFRvIII的U87MG细胞株的建立与鉴定

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数理医药学杂志 2010年第5期23卷 516-518页

作者：陈明孙红宇文荣朝余政梁吴巧琪夏许可张兴梅高天明南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515 南方医科大学基础医学院生理学教研室

目的:构建稳定表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87MG细胞株。方法:采用电转染方法将pcD-NA4/TO-EGFRvⅢ质粒导入U87MG细胞,加入zeocin筛选,进一步将细胞有限稀释并克隆化培养以建立稳定的转染细胞株。应用RT-PCR、Western b... 详细信息

目的:构建稳定表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87MG细胞株。方法:采用电转染方法将pcD-NA4/TO-EGFRvⅢ质粒导入U87MG细胞,加入zeocin筛选,进一步将细胞有限稀释并克隆化培养以建立稳定的转染细胞株。应用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定稳定表达EGFRvⅢ基因的细胞株。结果:经RT-PCR鉴定发现V6号和V24号单克隆细胞株EGFRvⅢ基因mRNA水平高表达,进一步Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定发现V6号细胞株EGFRvⅢ蛋白水平高表达。结论:成功建立了稳定表达EGFRvⅢ的U87MG细胞株,为进一步的抗肿瘤治疗及其机制研究提供基础。

关键词： EGFRvⅢ U87MG细胞基因表达

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甲状腺功能减退对大鼠认知行为和氧化应激的影响

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安徽医科大学学报 2010年第6期45卷 767-770页

作者：张艳青潘天荣钟明奎李光武安徽医科大学第二附属医院内分泌科合肥230601 安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院神经生物研究所合肥230032

目的研究成年甲状腺功能减退(甲减)大鼠认知行为及其血清海马组织氧化应激水平的变化。方法 SD♂大鼠20只随机分为正常对照组(饮用自来水)、甲减组(饮用含0.05%PTU的自来水8周),每组10只。Morris水迷宫试验观察大鼠学习记忆能力(定位航... 详细信息

目的研究成年甲状腺功能减退(甲减)大鼠认知行为及其血清海马组织氧化应激水平的变化。方法 SD♂大鼠20只随机分为正常对照组(饮用自来水)、甲减组(饮用含0.05%PTU的自来水8周),每组10只。Morris水迷宫试验观察大鼠学习记忆能力(定位航行实验和空间探索实验),采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定血清、海马组织脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果甲减组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),空间探索实验成绩甲减组稍差,但差异无显著性;甲减大鼠血清、海马组织SOD活性均显著降低(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01)。结论甲减大鼠空间学习能力下降,可能与甲状腺功能减退引起的氧化应激水平的改变有关;记忆能力稍差,提示长期的甲减可能会导致记忆能力的下降。

关键词：甲状腺功能减退症学习记忆海马认知氧化性应激

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电刺激大鼠伏隔核对腹侧苍白球神经元自发放电的影响

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神经解剖学杂志 2010年第2期26卷 170-174页

作者：贾媛媛马羽林宇涵关有良孟飞王军高东明辽宁医学院生理学教研室锦州121000 北京市神经外科研究所功能神经外科研究室北京100050 辽宁医学院附属一院泌尿外科锦州121000 辽宁医学院附属一院神经外科锦州121000

目的:研究电刺激大鼠伏隔核(nucleus accumbens,NAC)对腹侧苍白球(ventral pallidum,VP)神经元放电的影响,探索电刺激NAC治疗药物成瘾的机制。方法:本实验应用细胞外记录方法观察不同频率电刺激(强度0.4mA,波宽0.06ms,时程5s,频率5,10,2... 详细信息

目的:研究电刺激大鼠伏隔核(nucleus accumbens,NAC)对腹侧苍白球(ventral pallidum,VP)神经元放电的影响,探索电刺激NAC治疗药物成瘾的机制。方法:本实验应用细胞外记录方法观察不同频率电刺激(强度0.4mA,波宽0.06ms,时程5s,频率5,10,20,50,80,100,130,150和200Hz)大鼠NAC对VP神经元放电的影响。结果:刺激频率低于20Hz时,大多数VP神经元的放电频率无变化,电刺激频率大于20Hz可使大多数VP神经元的放电频率降低。结论:本研究提示高频刺激NAC对药物依赖可能有治疗作用。

关键词：伏隔核腹侧苍白球电刺激药物依赖

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人对氧磷酶1基因重组腺相关病毒载体的构建及表达

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广州医学院学报 2010年第5期38卷 57-62页

作者：王峰田晶薛金凤赵霏宋柳江谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室湖南长沙410078 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 深圳湘雅生物医药研究院广东深圳518057

目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEas... 详细信息

目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEasy载体连接，将PON1基因片段切下，插入到质粒pAAV—IRES—GFP的多克隆位点，获得质粒pAAV—PON1-IRES—GFP，经酶切和测序鉴定。包装的病毒rAAV—PON1用斑点杂交检测滴度，并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达。结果：pAAV—PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确。斑点杂交检测病毒的滴度为1．7×10^10g／mL，RT—PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达。结论：成功构建了pAAV—PON1-IRES—GFP质粒，包装出较高滴度的rAAV—PON1，并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达。

关键词：腺相关病毒动脉粥样硬化对氧磷酶1 内皮祖细胞

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构建重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1及在胃癌细胞SGC-7901中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 555-559页

作者：朱丽红毕伟陆大祥谭宇蕙杜标炎李杰芬暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 中山大学孙逸仙纪念医院神经科广东广州510120 广州中医药大学基础医学院广东广州510405

目的:构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并观察其在人胃癌细胞SGC-7901中的表达及对SGC-7901活性的影响。方法:通过RT-PCR法扩增不可降解CyclinB1(NDCyclinB1),将其插入到pEGFP-N1载体的XhoⅠ和BamHⅠ酶切位点,构建真核表达载体pEGFP-N1-ND CyclinB1,并以PCR、双酶切、测序鉴定。通过脂质体法转染胃癌细胞SGC-7901,进行荧光检测、Western blotting分析和流式细胞仪分析。结果:PCR、酶切及测序证明重组质粒pEGFP-N1-ND CyclinB1构建成功。转染胃癌细胞SGC-7901 24 h后,荧光显微镜下观察到绿色荧光。West-ern blotting检测到CyclinB1的表达明显增加。流式细胞仪检测重组质粒细胞组凋亡指数高于对照组,差异有显著性。结论:成功构建pEGFP-N1-ND CyclinB1荧光真核表达载体,并可在SGC-7901细胞中有效表达。

关键词：不可降解CyclinB1 细胞周期蛋白绿色荧光蛋白细胞周期肿瘤

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嗅鞘细胞移植到大鼠损伤脊髓前后的形态学研究

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重庆医科大学学报 2010年第10期35卷 1475-1478页

作者：陈莉发段朝霞张洁元李兵仓余华荣重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第六研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的:观察体外培养和植入损伤脊髓的自发绿色荧光嗅鞘细胞(Green fluorescent protein-olfactory ensheathing cells,GFP-OECs)的形态结构特征,研究绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)及脊髓损伤的病理环境对其形态的影响。方法:用酶消化法分离培养来自2.5月龄的绿色荧光蛋白转基因大鼠嗅球最外层的嗅鞘细胞,对培养细胞定期进行光镜、电镜及激光共聚焦显微镜观察并摄片,观察其在体外培养的形态特征。培养第10 d,用显微外科技术将嗅鞘细胞移植到脊髓挫伤后的T10节段,分别在移植术后7、15 d取材,观察细胞植入损伤脊髓后光电镜下形态。结果:GFP-OECs在荧光显微镜下呈绿色强荧光,培养第7 d,为双极样(梭形或纺锤形)、三极样和扁圆形3种典型的细胞形态,以双极梭形为主;培养第10 d,细胞形态为梭形,植入损伤脊髓后,移植细胞胞体呈长梭形,一端突起细长,与另一嗅鞘细胞接触,呈条索状生长。电镜下嗅鞘细胞核不规则,胞质内有丰富的粗面内质网、游离核糖体及线粒体。结论:GFP不影响嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells,OECs)形态。在脊髓损伤处,OECs胞体呈长梭形,突起细长,与培养10 d移植时比较,形态无显著改变,早期脊髓损伤病理环境不影响GFP-OECs形态。

关键词：嗅鞘细胞绿色荧光蛋白脊髓损伤

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神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠海马突触素表达和学习记忆能力的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第10期14卷 1803-1807页

作者：杨春周辉白琳琳王书春章茜郑州大学基础医学院生理学教研室河南省郑州市450052 郑州大学第一附属医院神经外科河南省郑州市450052 濮阳市卫生局河南省濮阳市457000

背景:前期实验已证实,移植入阿尔茨海默病大鼠脑内的神经干细胞能够存活、增殖,但其是否可替代损伤或坏死的神经细胞而重建神经通路,改善学习记忆能力尚不清楚。突触素是突触重建的重要标记之一。目的:观察神经干细胞移植对阿尔茨海默... 详细信息

背景:前期实验已证实,移植入阿尔茨海默病大鼠脑内的神经干细胞能够存活、增殖,但其是否可替代损伤或坏死的神经细胞而重建神经通路,改善学习记忆能力尚不清楚。突触素是突触重建的重要标记之一。目的:观察神经干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及突触表达的影响。方法:SD大鼠随机数字表法分为正常对照组、阿尔茨海默病模型组、2周移植组和4周移植组,除正常对照组外制备阿尔茨海默病模型。另取新生24hSD大鼠海马齿状回分离、培养神经干细胞,经Hoechst33258标记后植入2周和4周移植组海马CA1区,行Y迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,然后取脑进行尼氏染色和突触素免疫组织化学染色。阿尔茨海默病模型组则以同样的方法、同样的位点注入等量无菌生理盐水。正常对照组不施以任何处理。结果与结论:①2周和4周移植组海马CA1区细胞比阿尔茨海默病模型组增多,但仍少于正常对照组(P<0.05),平均吸光度与正常对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。②2周移植组和4周移植组大鼠海马结构内突触素吸光度值明显高于正常对照组和阿尔茨海默病模型组(P<0.05)。③与阿尔茨海默病模型组相比,2周和4周移植组大鼠学习能力和记忆能力均显著增强,正确反应率明显提高(P<0.05),而与正常对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。提示移植入脑内的神经干细胞可促进突触形成,改善学习记忆能力。

关键词：神经干细胞阿尔茨海默病突触素海马学习记忆

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刺激小脑顶核对大鼠应激性胃黏膜损伤的神经调控

刺激小脑顶核对大鼠应激性胃黏膜损伤的神经调控

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：高玲费素娟张建福邢宏彬乔伟丽徐州医学院生理学教研室附属医院消化内科学研究室神经生物学研究中心徐州医学院生理学教研室附属医院消化内科学研究室徐州医学院生理学教研室神经生物学研究中心

本研究通过将SD大鼠束缚并浸水(21±1)℃3 h建立应激性胃黏膜损伤(stress gastric mucosal injury,SGMI)模型,观察化学和电刺激小脑顶核(fastigial nucleus,FN)对SGMI的保护作用,并对其可能的神经调控机制作初步的探讨。结果:1.化... 详细信息

本研究通过将SD大鼠束缚并浸水(21±1)℃3 h建立应激性胃黏膜损伤(stress gastric mucosal injury,SGMI)模型,观察化学和电刺激小脑顶核(fastigial nucleus,FN)对SGMI的保护作用,并对其可能的神经调控机制作初步的探讨。结果:1.化学刺激FN使SGMI显著减轻,且有强度-效应依赖关系;电刺激FN具有与其相同的效应;2.预先化学损毁FN或者电损毁小脑上脚交叉、或预先损毁下丘脑外侧区(LHA)均可消除化学刺激FN对SGMI的保护作用;但损毁室旁核则不能产生此效应;3.单纯向LHA注射GABA激动剂,具有与刺激FN相同的作用;4.预先向ICV注射谷氨酸脱羧酶抑制剂,或向LHA注射GABA受体拮抗剂,均能消除FN对SGMI的保护作用;交感神经切断后,同样能消除此保护作用,但迷走神经切断后对其保护作用无影响;5.化学刺激FN后,使内脏大神经的放电频率降低,胃黏膜血流量增加。以上结果表明:FN参与了对SGMI保护作用的调控,并可能释放GABA作用于LHA,使交感神经下传冲动减少,胃血管舒张,血流量增多,从而使SGMI有所减轻,起到保护作用。本研究在一定程度上丰富了小脑对内脏活动调控研究的内容。

关键词：神经调控应激性胃黏膜损伤小脑顶核

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