检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 509-513页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态... 详细信息

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态及与其他蛋白质,如上游激酶、磷酸酶和下游底物之间的相互作用,可能在其特异性定位与激活后移位中起作用.MAPK的定位与移位机制的阐明,有助于进一步揭示MAPK的生理功能.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 亚细胞定位移位磷酸化蛋白质-蛋白质相互作用

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钙依赖性粘附素及其信号转导

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生理科学进展 2000年第4期31卷 353-356页

作者：闫文生姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

钙依赖性粘附素介导的粘附连接在决定和维持发育及成年机体的组织结构中起着重要作用。钙依赖性粘附素结合的特异性取决于其细胞外段 ,但完整的生理性粘附还需其胞质尾段与胞质相关蛋白以及细胞骨架的相互作用和联系。粘附连接的调节涉... 详细信息

钙依赖性粘附素介导的粘附连接在决定和维持发育及成年机体的组织结构中起着重要作用。钙依赖性粘附素结合的特异性取决于其细胞外段 ,但完整的生理性粘附还需其胞质尾段与胞质相关蛋白以及细胞骨架的相互作用和联系。粘附连接的调节涉及到钙依赖性粘附素基因表达、聚集和磷酸化以及缝隙连接通讯等 ;此外 ,钙依赖性粘附素连环素复合体还参与信号转导过程。

关键词：钙依赖性粘附素粘附连接信号转导

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报告基因技术的理论基础及其应用

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生理科学进展 2002年第4期33卷 361-363页

作者：刘志锋姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地"报道"细胞内与基因表达有关的信号级联.这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点.随着报告基因技... 详细信息

报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地"报道"细胞内与基因表达有关的信号级联.这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点.随着报告基因技术及其检测方法的不断改进,荧光素酶、绿色荧光蛋白以及新近克隆出的红色荧光蛋白作为无害性的检测工具,将在检测活体组织和细胞基因表达方面得到越来越广泛的应用.此外,在研究疾病发生的分子机制,基因治疗和药物开发方面,报告基因技术也将发挥出重要作用.本文对报告基因技术的基础理论、常用报告基因的种类和特点,以及其目前的主要应用作了概括性介绍.

关键词：报告基因荧光蛋白信号检测基因表达

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丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)生物学功能的结构基础

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 5-11页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似,但也存在着一些差异,这些差异是不同亚族对不同的细胞外刺激产生特异性反应的结构基础.某些关键性结构,例如Loop 12,在MAPK对上游激酶的作用、下游底物的选择以及亚细胞定位中都具有重要作用.进一步深入研究MAPK的空间结构,探讨MAPK的生物学功能与其空间构象之间的关系,对于开发新的MAPK通路抑制剂用于治疗某些严重疾病有着重要的临床意义.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶,Loop 12,结构-功能关系

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第3期20卷 352-357页

作者：宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTr... 详细信息

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTrack-△TLR4.用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,用脂质体法转染HEK-293细胞进行腺病毒的包装扩增.将重组腺病毒感染CHO-K1细胞,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF-κB激活的影响.酶切及测序表明,TLR4全长及其截断体△TLR4的重组腺病毒载体构建正确.荧光素酶报告基因检测结果表明,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响,Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的NF-κB激活(P＜0.05),Ad-TLR4则使LPS引起的NF-κB活性增强(P＜0.05).LPS对细胞的激活作用依赖于TLR4的结构完整性.

关键词：腺病毒 TLR4基因报告基因 NF-κB

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Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第4期17卷 420-424页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

Retro-Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开/关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统.该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet-off/Tet-on基因表达系统的优点,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功... 详细信息

Retro-Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开/关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统.该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet-off/Tet-on基因表达系统的优点,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用,同时也为基因治疗提供了一种理想的基因载体系统.

关键词：诱导性基因表达系统基因调控基因治疗

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带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第3期19卷 354-358页

作者：孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat... 详细信息

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat-Flag-EGFP蛋白,并加入培养的NIH3T3细胞.荧光显微镜观察显示,His-Tat-Flag-EGFP融合蛋白进入细胞.带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET-14b-HTF表达的融合蛋白能够进入细胞,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具.

关键词： Tat 蛋白转导增强型绿色荧光蛋白

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 168-172页

作者：莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1c... 详细信息

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗。

关键词：信号传导分子蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白原核表达制备 GST-AWP1融合蛋白多克隆抗体

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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1131-1133页

作者：李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用... 详细信息

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。

关键词： T7噬菌体筛选 p38 结合蛋白靶蛋白

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p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

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第一军医大学学报 2002年第2期22卷 171-173页

作者：龚小卫秦清和王静珍姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒... 详细信息

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒经酶切、PCR和测序证明正确无误,并在HeLa细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的红色荧光表明p38 MAPK弥散分布于细胞质中,细胞核中也有一定的分布.结论成功构建了p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究p38MAPK的细胞内定位提供了一个重要的工具.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶红色荧光蛋白载体构建基因表达

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