检索结果-内蒙古大学图书馆

生物物理学报 2004年第2期20卷 119-124页

作者：宋革孙学刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病... 详细信息

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体,重组腺病毒质粒经Pac I酶切线性化后,用脂质体法转染293细胞进行腺病毒的包装扩增,用重组腺病毒感染Rf-6A细胞,采用免疫荧光标记方法观察结果.免疫荧光标记结果表明Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的细胞骨架F-actin的解聚与重排,Ad-TLR4则使LPS引起的F-actin应力纤维产生增强.以上结果说明TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染内皮细胞对LPS诱导的细胞骨架变化具有不同的影响,Ad-△TLR4对LPS引起的内皮细胞骨架变化具有抑制作用.

关键词：腺病毒细胞骨架 toll样受体4 脂多糖

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晚期糖基化终产物对血管通透性的影响和作用机制

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中国微循环 2004年第6期8卷 419-422页

作者：郭晓华黄巧冰第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

血管通透性的增高是糖尿病血管并发症的一个标志性事件[1],是其发生的最初表现和导致其他后续改变的病理基础.随着对晚期糖基化终产物(advanc-ed glycation end products,AGEs)及其特异性受体(rece-ptor for advanced glycation end pro... 详细信息

血管通透性的增高是糖尿病血管并发症的一个标志性事件[1],是其发生的最初表现和导致其他后续改变的病理基础.随着对晚期糖基化终产物(advanc-ed glycation end products,AGEs)及其特异性受体(rece-ptor for advanced glycation end products,RAGE)的结构及其病理机制研究的深入,AGEs在血管通透性增高中所起的重要作用引起了广泛的关注,我们就此作一综述.

关键词：晚期糖基化终产物血管通透性作用机制糖尿病血管并发症

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星形胶质细胞条件培养液对tbOOH致PC12细胞凋亡的抑制作用

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第一军医大学学报 2004年第9期24卷 998-1000页

作者：莫永炎邢飞跃张宝陈瑗姜勇第一军医大学病理生理学教研室暨全军休克微循环重点实验室广东广州510515 暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632 第一军医大学自由基研究室广东广州510515

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流... 详细信息

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化;用巴比妥酸法评估细胞内丙二醛含量的变化。结果tbOOH可诱导PC12细胞凋亡,而星形胶质细胞条件培养液可降低其凋亡;同时,巴比妥酸法显示星形胶质细胞条件培养液可显著性降低PC12细胞丙二醛含量(P<0.05)。结论星形胶质细胞条件培养液有提高PC12细胞抗氧化能力,可抑制活性氧tbOOH诱导的神经细胞凋亡。

关键词：星形胶质细胞条件培养液/抗氧化作用叔丁基脂氢过氧化物 PCI2细胞/凋亡活性氧种

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MAPK的细胞内定位与激活后移位机制

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生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 509-513页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态... 详细信息

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态及与其他蛋白质,如上游激酶、磷酸酶和下游底物之间的相互作用,可能在其特异性定位与激活后移位中起作用.MAPK的定位与移位机制的阐明,有助于进一步揭示MAPK的生理功能.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 亚细胞定位移位磷酸化蛋白质-蛋白质相互作用

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丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)生物学功能的结构基础

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 5-11页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似,但也存在着一些差异,这些差异是不同亚族对不同的细胞外刺激产生特异性反应的结构基础.某些关键性结构,例如Loop 12,在MAPK对上游激酶的作用、下游底物的选择以及亚细胞定位中都具有重要作用.进一步深入研究MAPK的空间结构,探讨MAPK的生物学功能与其空间构象之间的关系,对于开发新的MAPK通路抑制剂用于治疗某些严重疾病有着重要的临床意义.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶,Loop 12,结构-功能关系

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带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第3期19卷 354-358页

作者：孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat... 详细信息

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat-Flag-EGFP蛋白,并加入培养的NIH3T3细胞.荧光显微镜观察显示,His-Tat-Flag-EGFP融合蛋白进入细胞.带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET-14b-HTF表达的融合蛋白能够进入细胞,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具.

关键词： Tat 蛋白转导增强型绿色荧光蛋白

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 168-172页

作者：莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1c... 详细信息

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗。

关键词：信号传导分子蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白原核表达制备 GST-AWP1融合蛋白多克隆抗体

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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1131-1133页

作者：李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用... 详细信息

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。

关键词： T7噬菌体筛选 p38 结合蛋白靶蛋白

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iNOS红色荧光蛋白报告基因载体的构建及其在细胞中的表达

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中国病理生理杂志 2003年第12期19卷 1709-1712页

作者：刘志锋阚文宏秦清和邓鹏王静珍姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的:构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-iNOSp;用脂质体瞬时转染NIH3T... 详细信息

目的:构建iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,为研究细胞内iNOS的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具.方法:采用基因重组技术构建了含iNOS启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRed1-1-iNOSp;用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察iNOS启动子对脂多糖(LPS)刺激的反应.结果:酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的;该表达载体在NIH3T3细胞静息状态下表达水平很低,经LPS刺激后,在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光.结论:所构建的iNOS启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的,对生理相关刺激有很好的反应,可有效地用于iNOS基因表达信号调控机制的研究.

关键词：一氧化氮合酶红色荧光蛋白基因,调节基因,报告

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BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

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中国病理生理杂志 2003年第4期19卷 438-442,T001页

作者：李红乐李浩威邢飞跃孙学刚邓宇斌张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDN... 详细信息

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。

关键词： BDNF 重组腺病毒构建大鼠骨髓间质干细胞表达增强型绿色荧光蛋白基因融合脑源性神经营养因子

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