检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2003年第3期19卷 293-296,T002页

作者：李红乐邢飞跃孙学刚曹永宽宋革张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (p... 详细信息

目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (pAd -EGFP) ,用 2 93包装细胞制备腺病毒 ,用EGFP重组腺病毒感染rMSC ,观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况 ,用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率。用血清撤离加入 β -巯基乙醇诱导Ad -EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化。结果 :Ad -EGFP可高效感染rMSC ,感染率为 (3 6±2 ) % ,而脂质体法转染质粒pTrack -GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功 ;Ad -EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到 β -巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式。免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶 (NSE) ,表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能。结论 :腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率。

关键词： EGFP基因大鼠骨髓间质干细胞腺病毒感染

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肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

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中华结核和呼吸杂志 2003年第2期26卷 88-92页

作者：刘爱华邓鹏姜勇第一军医大学南方医院呼吸科广州510515 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedprotei... 详细信息

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedproteinkinasekinase 6 ,MKK6 )及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒 ;使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果　TNF α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活 ;用TNF α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡 ;MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡 ;而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF α诱导的LA795细胞凋亡。结论　TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的。

关键词：肿瘤坏死因子α 丝裂原活化蛋白激酶肺腺癌细胞凋亡

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人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达

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中国危重病急救医学 2003年第3期15卷 163-166页

作者：刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质... 详细信息

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。

关键词： Toll样受体融合蛋白蛋白表达

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人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达

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中华神经医学杂志 2003年第2期2卷 123-125,144页

作者：莫永炎曹永宽刘亚伟龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础方法应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14... 详细信息

目的获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础方法应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。

关键词： ECV304细胞 AWP1 His-融合蛋白原核生物表达

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Toll样受体4与心血管疾病

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2003年第6期23卷 627-629页

作者：黄浩刘靖华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

Toll样受体是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体 ,在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4是介导LPS信号跨膜转导的主要受体 ,对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。由于心血管疾病的发生和发展与感染密切相关 ,近来 ,有关TLR4及... 详细信息

Toll样受体是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体 ,在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4是介导LPS信号跨膜转导的主要受体 ,对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。由于心血管疾病的发生和发展与感染密切相关 ,近来 ,有关TLR4及其介导的信号转导在心血管疾病发病中的作用受到人们的关注。深入研究TLR4在心血管疾病中作用 ,不仅能极大地扩展我们对病原体与宿主免疫反应之间相互作用复杂性的认识 ,更能为进一步揭示心血管疾病的发病机制 ,寻求有效的防治措施提供重要的理论基础。

关键词： TLR4 动脉粥样硬化病毒性心肌炎心力衰竭

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晚期糖基化终产物受体的结构和功能

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生理科学进展 2003年第1期34卷 71-73页

作者：赵善超侯凡凡姜勇第一军医大学南方医院肾内科和中国人民解放军肾脏病研究所第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

晚期糖基化终产物受体 (RAGE)是一种膜蛋白 ,属于免疫球蛋白家族 ,由 4 0 0多个氨基酸组成 ,分子量为 35kD ,分胞外段、跨膜段和胞内段 ,在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达。RAGE作为信... 详细信息

晚期糖基化终产物受体 (RAGE)是一种膜蛋白 ,属于免疫球蛋白家族 ,由 4 0 0多个氨基酸组成 ,分子量为 35kD ,分胞外段、跨膜段和胞内段 ,在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达。RAGE作为信号转导受体介导晚期糖基化终产物 (AGE)和其配体在细胞表面结合 ,激活细胞内多种信号转导机制 ,在糖尿病慢性并发症、透析相关性淀粉样变 (DRA)、阿尔采末病 (AD)、动脉粥样硬化等疾病发生中起重要作用。对RAGE结构和功能的认识可能为这些疾病的防治提供新的靶位。

关键词：晚期糖基化终产物受体结构-功能研究信号转导

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用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白

用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白

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2003年中国博士后生命科学学术研讨会暨院士论坛

作者：刘靖华赵克森姜勇李志杰刘亚伟赵善超黄浩龚小卫秦清和邓鹏孙学刚第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州 510515

为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克隆序列编码的蛋白为已知蛋白... 详细信息

为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克隆序列编码的蛋白为已知蛋白或与已知蛋白序列高度同源。在已知蛋白中,有与细胞外抗氧化还原反应、炎症反应、抗肿瘤、重金属解毒等密切相关的硒蛋白;有参与各种膜性细胞器、蛋白质和mRNA转运的细胞内马达(motor)蛋白KIF4;有与RNA的加工、代谢,包括剪接、转运、蛋白质翻译、核转运和RNA降解等有关的DEAD-box蛋白。这些发现为我们下一步研究TLR4介导的信号转导及其功能提供了新的切入点。

关键词： Toll样受体4 蛋白质相互作用噬菌体结合蛋白

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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白

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中国病理生理杂志 2003年第12期19卷 1666-1666页

作者：刘靖华李志杰刘亚伟黄浩邓鹏秦清和赵善超赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的:建立有效的T7噬菌体筛选系统,筛选与靶蛋白(信号分子)有结合关系的多肽或蛋白.方法:以p38MAPK、PRAK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂),通过结合-洗脱-扩增3个步骤,筛选噬菌体cDNA文库(T7人肝和/或人肺cDNA文... 详细信息

目的:建立有效的T7噬菌体筛选系统,筛选与靶蛋白(信号分子)有结合关系的多肽或蛋白.方法:以p38MAPK、PRAK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂),通过结合-洗脱-扩增3个步骤,筛选噬菌体cDNA文库(T7人肝和/或人肺cDNA文库).结果:选择第四轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行顺序,将获得的序列在美国国立卫生院(NIH)的GenBank数据库中进行同源序列比较,获得若干编码蛋白的序列.在这些蛋白中有激酶、转录因子、细胞骨架相关蛋白和离子通道相关蛋白等.结论:T7噬菌体展示筛选系统是用来筛选新的结合蛋白一个非常简单、快速和有效的工具,筛选的p38和PRAK结合蛋白对进一步研究MAPK信号转导通路的复杂功能和调节机制提供了很好的机会.

关键词： T7噬菌体示筛选系统筛选靶蛋白

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报告基因技术的理论基础及其应用

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生理科学进展 2002年第4期33卷 361-363页

作者：刘志锋姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地"报道"细胞内与基因表达有关的信号级联.这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点.随着报告基因技... 详细信息

报告基因技术广泛地应用于监测细胞的信号转导和基因表达,通过把转录控制元件剪接到报告基因,可以直观地"报道"细胞内与基因表达有关的信号级联.这种检测具有敏感性高、方便、可靠而且适用于大规模检测等优点.随着报告基因技术及其检测方法的不断改进,荧光素酶、绿色荧光蛋白以及新近克隆出的红色荧光蛋白作为无害性的检测工具,将在检测活体组织和细胞基因表达方面得到越来越广泛的应用.此外,在研究疾病发生的分子机制,基因治疗和药物开发方面,报告基因技术也将发挥出重要作用.本文对报告基因技术的基础理论、常用报告基因的种类和特点,以及其目前的主要应用作了概括性介绍.

关键词：报告基因荧光蛋白信号检测基因表达

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p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

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第一军医大学学报 2002年第2期22卷 171-173页

作者：龚小卫秦清和王静珍姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒... 详细信息

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒经酶切、PCR和测序证明正确无误,并在HeLa细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的红色荧光表明p38 MAPK弥散分布于细胞质中,细胞核中也有一定的分布.结论成功构建了p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究p38MAPK的细胞内定位提供了一个重要的工具.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶红色荧光蛋白载体构建基因表达

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