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塔里木大学学报 2024年第3期36卷 30-35页

作者：候梦哲李雪娇郝斌黎双邢潇月李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院/塔里木畜牧科技兵团重点实验室/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

小肠结肠炎耶尔森菌为嗜冷菌,能够在低温、低氧的环境下生存,是一类食源性病原体,能够感染人及多种动物。本研究旨在了解新疆阿克苏地区部分集约化奶牛场小肠结肠炎耶尔森菌污染情况,在2022年期间采集阿克苏地区部分奶牛养殖场奶牛粪便... 详细信息

小肠结肠炎耶尔森菌为嗜冷菌,能够在低温、低氧的环境下生存,是一类食源性病原体,能够感染人及多种动物。本研究旨在了解新疆阿克苏地区部分集约化奶牛场小肠结肠炎耶尔森菌污染情况,在2022年期间采集阿克苏地区部分奶牛养殖场奶牛粪便、原料乳、饲草、采乳设备、环境样品,共计240份。采用形态学观察、生化鉴定、分子生物学的方法对小肠结肠炎耶尔森菌进行分离与鉴定。结果表明共分离出23株小肠结肠炎耶尔森菌,3个县市均分离出该菌,且分离率相近,均约为9%。本试验能为阿克苏地区部分集约化奶牛场小肠结肠炎耶尔森菌的防治、杀灭提供理论依据和参考价值。

关键词：小肠结肠炎耶尔森菌污染调查奶牛

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新疆南疆部分规模化羊场粪肠球菌的毒力基因及耐药基因的检测

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今日畜牧兽医 2022年第12期38卷 9-11页

作者：邢潇月胡亚辉张家浩阿迪莱·卡哈曼李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院 843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室 843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室 843300

本试验采集新疆南疆部分规模化羊场病料305份,通过细菌分离培养,粪肠球菌形态特征观察、生化鉴定以及肠球菌特异性基因tuf的扩增,快速筛选粪肠球菌。并通过普通PCR检测新疆南疆部分规模化羊场中粪肠球菌所携带的毒力基因及耐药基因。结... 详细信息

本试验采集新疆南疆部分规模化羊场病料305份,通过细菌分离培养,粪肠球菌形态特征观察、生化鉴定以及肠球菌特异性基因tuf的扩增,快速筛选粪肠球菌。并通过普通PCR检测新疆南疆部分规模化羊场中粪肠球菌所携带的毒力基因及耐药基因。结果表明,此次样本中有108株粪肠球菌,并发现51株粪肠球菌存在大环内酯类药物的耐药基因(erm B),31株粪肠球菌存在毒力基因(alas),本试验为此地区规模化羊场粪肠球菌的防控提供基础依据。

关键词：南疆粪肠球菌毒力基因耐药基因

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绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的原核表达、生物信息学分析及鼠源多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2024年第22期 85-93,134,135页

作者：邓博文刘晓艳王永飞靳玲李江斌哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团农一师畜牧兽医工作站新疆阿拉尔843300 新疆焉耆回族自治县畜牧兽医局新疆焉者841100

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至B... 详细信息

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至BL21(DE3)感受态细胞中,获得重组菌pET42b-DnaJ/BL21(DE3);然后用IPTG对重组菌进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行可溶性分析、鉴定和纯化;随后采用生物信息学软件对绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白进行生物信息学分析(亲水性、跨膜区域、B细胞抗原表位、磷酸化位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位预测);最后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并分别通过间接ELISA方法和Western-blot方法检测绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组表达菌在41.5 ku处出现目的条带,与预期大小相符;重组蛋白主要以包涵体形式表达,可与鼠抗His标签抗体特异性结合,纯化后重组蛋白在正确位置出现单一的特异性条带,质量浓度为0.24 mg/mL。经生物信息学分析,绵羊支原体DnaJ蛋白亲水性区域分布在第1~10,12~18,20~30,32~57,61~91,108~129,141~182,190~198,204~228,230~239,247~262,264~281,291~308,311~318,321~337,347~358,361~376位氨基酸位点;为膜外蛋白,无跨膜区域;存在13个B细胞抗原表位,分别分布在5~24,26,28,30~90,111~128,137~209,211~221,246~254,267~273,302~314,323~333,346~356,360~372位氨基酸位点;共存在67个磷酸化位点,其中包含35个丝氨酸位点、18个苏氨酸位点和14个酪氨酸位点;二级结构主要为无规则卷曲和α-螺旋,然后依次为延伸链、β-转角,参与这4种二级结构构成的氨基酸分别占氨基酸总量的48.40%、25.40%、19.79%、6.42%;预测的三级结构与二级结构结果一致;亚细胞定位于细胞质中。制备的绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体效价为1∶12800,能与重组蛋白特异性结合。说明绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的免疫原性,由其制备的鼠源多克隆抗体效价较高、特异性较好。

关键词：绵羊肺炎支原体 DnaJ 原核表达生物信息学多克隆抗体

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山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的克隆及序列分析

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现代畜牧科技 2023年第3期 69-74页

作者：张汐周正国赵垚鑫王永飞李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成... 详细信息

为研究山羊痘病毒036(gtpv-036)基因的生物学特征,试验利用PCR法扩增gtpv-036基因,经NdeΙ、XhoΙ双酶切后与PET 42b同源重组构建其原核表达载体,并用菌液PCR和测序鉴定,测序结果进行生物信息学分析,预测其蛋白生物学特性。结果表明:成功构建原核表达载体PET 42b-gtpv-036,测序结果显示036基因大小为285 bp,与山羊痘gtpvIsolateIndia等参考株系同源性为97.9%~100%,遗传进化树表明其与gtpv处于同一分支,亲源关系最近,测序比对发现其基因有2个碱基发生了突变,推测氨基酸序列:从第37位和95位异亮氨酸密码子是“ATA”分别突变成异亮氨酸氨酸“ATT”和天冬氨酸氨酸“CTA”;预测山羊痘病036蛋白亚细胞定位在细胞质;蛋白信号肽的剪切位点位于第23和24号氨基酸之间;蛋白磷酸化位点有10个;蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,其次β-折叠,三级结构以α-螺旋为主,推测山羊痘病gtpv-036蛋白功能可能是巯基氧化酶。这为制备山羊痘病毒疫苗研究和为研发新型药物提供理论基础。

关键词：山羊痘病毒036 克隆序列分析

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山羊痘病毒晚转录因子VLTF-3基因的原核表达及结构预测

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现代畜牧兽医 2022年第12期 1-6页

作者：周正国赵垚鑫张汐李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

研究旨在了解羊痘病毒晚转录因子VLTF-3结构特征和生物学特征。试验采用PCR方法扩增羊痘病毒Thx毒株晚转录因子VLTF-3基因,将其插入质粒PET-42b中建立原核表达载体,经菌液PCR和测序方法鉴定。阳性质粒转入大肠杆菌BL21中,用0.1 mmoL/L的... 详细信息

研究旨在了解羊痘病毒晚转录因子VLTF-3结构特征和生物学特征。试验采用PCR方法扩增羊痘病毒Thx毒株晚转录因子VLTF-3基因,将其插入质粒PET-42b中建立原核表达载体,经菌液PCR和测序方法鉴定。阳性质粒转入大肠杆菌BL21中,用0.1 mmoL/L的IPTG诱导其表达蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blot技术进行蛋白的表达的检测与鉴别。基因检测结果利用DNAMAN、DNAStar和Mega等软件进行生物信息学分析和建立遗传进化树,对其编码的氨基酸序列在线进行二级结构分析和高级结构的预测,并对其信号肽、跨膜特性、亲水性、磷酸化位点和抗原性等生物学特性进行分析。结果显示:试验成功扩增了VLTF-3的基因组,并建立了原核表达载体pET-42b-VLTF-3。测序结果表明,GTPV-VLTF-3基因全长681 bp;与参照株GTPV-Pellor毒株的同源性达99%,保守性较强,编码227aa,与理论相符。遗传进化树分析结果显示,该基因与皮肤疙瘩病遗传距离最近。SDS-PAGE检测结果显示,该蛋白质大量表现在上清中;Western blot结果显示,该蛋白与His标签进行了融合表达。VLTF-3蛋白不具有信号肽,为非分泌型蛋白,共有22个磷酸化位点,α螺旋、无规则卷曲、延伸链和β转角分别占34.80%、35.68%、22.91%、6.61%,三级结构以α螺旋为主。研究表明,试验成功克隆了晚转录因子VLTF-3,并能够可溶性表达其蛋白,生物分析预测其高级结构α螺旋为主。

关键词：山羊痘病毒克隆融合表达 VLTF-3基因

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新疆某鸡场马立克氏病的实验室诊断及发病原因和场后消毒措施

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中国动物保健 2022年第11期24卷 124-125页

作者：李虎邢潇月张家浩刘祥杰李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿克苏843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿克苏843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿克苏843300

2022年3月份,在新疆某地区一万羽肉鸡场出现较大死亡,每日平均死亡100只左右,病鸡出现精神沉郁,萎靡不振,食欲下降,被毛糙乱,有的鸡呈现大劈叉,部分病鸡解剖发现内脏器官出现结节。随后对鸡进行荧光定量PCR检测,确定为阳性。由于马立克... 详细信息

2022年3月份,在新疆某地区一万羽肉鸡场出现较大死亡,每日平均死亡100只左右,病鸡出现精神沉郁,萎靡不振,食欲下降,被毛糙乱,有的鸡呈现大劈叉,部分病鸡解剖发现内脏器官出现结节。随后对鸡进行荧光定量PCR检测,确定为阳性。由于马立克疾病没有特效药物,所以在临床中预防成为防治本疾病的关键要点。

关键词：马立克病毒消毒肉鸡

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阿克苏地区某规模化猪场猪流行性腹泻的诊断和疫苗效果评价

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塔里木大学学报 2023年第2期35卷 60-66页

作者：邢潇月刘洋李虎胡亚辉刘祥杰张家浩李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发,采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物,结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为100%。为探究其原因,于2021年1—12月采集该猪场6567份猪肛拭子,通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的... 详细信息

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发,采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物,结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为100%。为探究其原因,于2021年1—12月采集该猪场6567份猪肛拭子,通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的感染情况,为防控猪流行性腹泻(PED),选用TGE-PED二联弱毒苗和灭活苗对妊娠85 d和105 d母猪进行联合免疫,应用间接ELISA法监测妊娠母猪的IgG、IgA抗体水平,并对该场PEDV疫苗免疫效果进行评价。结果显示PEDV的检出率在1月、2月、11月、12月较高,其余月份较低;妊娠母猪PEDV的抗体IgG和IgA抗体阳性率在产前15 d和分娩当天均达到了100%,离散度小于40%,免疫效果较好;产前1 d各批次PEDV的IgG抗体阳性率仍达到100%,但IgA抗体阳性率有不同程度下降,且离散度有不同程度升高,推测母猪可能存在排毒情况。本研究为该猪场PED防控提供了理论依据。

关键词：猪流行性腹泻荧光定量PCR PEDV 免疫抗体

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新疆地区某猪场猪嗜血支原体病的检测与分析

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现代畜牧兽医 2024年第9期 1-5页

作者：刘淑华李超群梁樊鑫陈鑫候梦哲李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为了解新疆地区某猪场猪嗜血支原体的感染情况,试验采集新疆地区某猪场保育仔猪的抗凝血200份,采用血液压片、血涂片瑞氏染色镜检和普通PCR方法检测猪嗜血支原体,并利用猪嗜血支原体16SrRNA基因引物,以血液DNA为模板,扩增、克隆、鉴定... 详细信息

为了解新疆地区某猪场猪嗜血支原体的感染情况,试验采集新疆地区某猪场保育仔猪的抗凝血200份,采用血液压片、血涂片瑞氏染色镜检和普通PCR方法检测猪嗜血支原体,并利用猪嗜血支原体16SrRNA基因引物,以血液DNA为模板,扩增、克隆、鉴定后送测序,进行同源性比对与遗传进化分析。结果显示,经血液压片、血液涂片及PCR检测共检出58份猪嗜血支原体阳性样本;以猪嗜血支原体16SrRNA基因引物、血液DNA为模板成功克隆猪嗜血支原体基因,命名为XJP1(已被Genbank收录,登录号:PP526316)。同源性比对与遗传进化分析结果显示,XJP1与猪嗜血支原体(登录号:KC907396)、猪嗜血支原体(登录号:HQ259257)为同一分支,亲缘关系较近,同源性为96.9%~99.6%。研究表明,该猪场保育猪感染了猪嗜血支原体,试验结果将为该猪场防控猪嗜血支原体感染以及该病的深入研究提供基础数据。

关键词：猪嗜血支原体 16SrRNA序列新疆地区

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新疆阿克苏地区某规模化猪场猪链球菌分离鉴定及耐药性分析

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现代畜牧兽医 2023年第2期 9-13页

作者：胡亚辉张家浩李虎刘祥杰邢潇月杨睿智李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300

研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾... 详细信息

研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾脏中分离出的1株细菌,在血平板上呈圆形、隆起、半透明、光滑且湿润、边缘比较整齐的菌落,且表现出明显的β溶血环,初步鉴定为链球菌。生化鉴定及测序结果表明,分离株为2型猪链球菌。药敏试验结果表明,分离菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠、多西环素、氧氟沙星及环丙沙星表现为敏感,对青霉素、阿米卡星、新霉素表现为中介,对阿莫西林、复方新诺明、氨苄西林、磺胺甲硝唑、四环素、米诺环素和庆大霉素等药物表现为不同程度的耐药。研究表明,新疆阿克苏地区某猪场仔猪死亡原因为2型猪链球菌感染,且该菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠等药物敏感,建议临床可将其应用于2型猪链球菌的防治。

关键词： 2型猪链球菌分离与鉴定 16S rRNA 耐药性分析

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新疆阿克苏地区部分猪场流行性腹泻病毒的检测与分析

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养猪 2022年第4期 111-116页

作者：刘洋孙鹏亮张秋林陈荟旭龚学文李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 阿克苏兴疆牧歌食品股份有限公司新疆阿克苏843000

为了解新疆阿克苏地区某猪场猪流行性腹泻感染情况,采集疑似患有猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的7日龄以内仔猪肠道内容物,使用猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因的特异性引物进行扩增,克隆鉴定后送测序,分析该基因序列。... 详细信息

为了解新疆阿克苏地区某猪场猪流行性腹泻感染情况,采集疑似患有猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的7日龄以内仔猪肠道内容物,使用猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因的特异性引物进行扩增,克隆鉴定后送测序,分析该基因序列。结果表明:该基因片段长度为663 bp。通过构建系统进化树及同源性分析发现,该毒株与GenBank中公布的2011年以后国内外分离的主要M基因毒株同源性在96.7%以上,其中与湖北分离株C3-HB2017亲缘关系最近,同源性高达99.5%,与该猪场疫苗株亲缘关系相对较远,同源性为98%,存在13个碱基位点的突变。说明该猪场存在猪流行性腹泻病毒感染,且推测可能为变异毒株的感染。该试验为新疆阿克苏规模化猪场PED的防控提供基础数据。

关键词：阿克苏地区猪流行性腹泻病毒 M基因 PCR 序列分析

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