检索结果-内蒙古大学图书馆

绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的原核表达、生物信息学分析及鼠源多克隆抗体的制备

黑龙江畜牧兽医 2024年第22期 85-93,134,135页

作者：邓博文刘晓艳王永飞靳玲李江斌哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团农一师畜牧兽医工作站新疆阿拉尔843300 新疆焉耆回族自治县畜牧兽医局新疆焉者841100

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至B... 详细信息

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至BL21(DE3)感受态细胞中,获得重组菌pET42b-DnaJ/BL21(DE3);然后用IPTG对重组菌进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行可溶性分析、鉴定和纯化;随后采用生物信息学软件对绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白进行生物信息学分析(亲水性、跨膜区域、B细胞抗原表位、磷酸化位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位预测);最后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并分别通过间接ELISA方法和Western-blot方法检测绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组表达菌在41.5 ku处出现目的条带,与预期大小相符;重组蛋白主要以包涵体形式表达,可与鼠抗His标签抗体特异性结合,纯化后重组蛋白在正确位置出现单一的特异性条带,质量浓度为0.24 mg/mL。经生物信息学分析,绵羊支原体DnaJ蛋白亲水性区域分布在第1~10,12~18,20~30,32~57,61~91,108~129,141~182,190~198,204~228,230~239,247~262,264~281,291~308,311~318,321~337,347~358,361~376位氨基酸位点;为膜外蛋白,无跨膜区域;存在13个B细胞抗原表位,分别分布在5~24,26,28,30~90,111~128,137~209,211~221,246~254,267~273,302~314,323~333,346~356,360~372位氨基酸位点;共存在67个磷酸化位点,其中包含35个丝氨酸位点、18个苏氨酸位点和14个酪氨酸位点;二级结构主要为无规则卷曲和α-螺旋,然后依次为延伸链、β-转角,参与这4种二级结构构成的氨基酸分别占氨基酸总量的48.40%、25.40%、19.79%、6.42%;预测的三级结构与二级结构结果一致;亚细胞定位于细胞质中。制备的绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体效价为1∶12800,能与重组蛋白特异性结合。说明绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的免疫原性,由其制备的鼠源多克隆抗体效价较高、特异性较好。

关键词：绵羊肺炎支原体 DnaJ 原核表达生物信息学多克隆抗体

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新疆克孜勒河5种土著鱼食性分析

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中国水产科学 2022年第10期29卷 1461-1474页

作者：赵贺赵年桦李丽强壮魏杰聂竹兰塔里木大学动物科学与技术学院新疆维吾尔自治区阿拉尔843300 省部共建塔里木盆地生物资源保护利用国家重点实验室新疆维吾尔自治区阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆维吾尔自治区阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆维吾尔自治区阿拉尔843300

为探究克孜勒河5种土著鱼食物组成及其营养级,本研究选取采自于克孜勒河的塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)、宽口裂腹鱼(Schizothorax eurystomus)、厚唇裂腹鱼(Schizothorax irregularis)、叶尔羌高原鳅(Triplophysa yarkandensis)和长身高原鳅(Triplophysa tenuis)5种鱼样品共46尾作为研究对象,运用传统形态学方法,对样品5个摄食器官形态性状进行分析,通过高通量测序技术分析其肠道食物组成,并测定了碳、氮稳定同位素以分析其营养级。研究结果显示,3种裂腹鱼属鱼类摄食器官形态较为相近,2种高原鳅摄食器官形态基本一致;厚唇裂腹鱼肠长比约为2.95,主要食物来源于初级生产者,包括刚毛柽柳(Tamarix hispida)、野大豆(Glycine soja)和白刺(Nitraria tangutorum)等;宽口裂腹鱼肠长比较短,约为2.56,食物以初级生产者为主,如二穗短柄草(Brachypodium distachyon),也会捕食一些小型鱼类;塔里木裂腹鱼肠长比较短,约为2.38,食物以裂腹鱼属鱼类为主,其次为白柠檬(Citruslatifolia);叶尔羌高原鳅与长身高原鳅比肠长均小于1,肠道中裂腹鱼属鱼类丰度达到95%以上;塔里木裂腹鱼、宽口裂腹鱼和厚唇裂腹鱼营养级分别为3.19、2.78和2.52,叶尔羌高原鳅与长身高原鳅营养级为3.44和3.55;综合判断厚唇裂腹鱼属植食性鱼类,宽口裂腹鱼为杂食性偏植食性鱼类,塔里木裂腹鱼为杂食性偏肉食性鱼类,叶尔羌高原鳅和长身高原鳅为肉食性鱼类。本研究拓展了对克孜勒河食物网的认识,探明克孜勒河鱼类食物关系和营养级,为克孜勒河鱼类资源保护及合理利用提供基础数据。

关键词：裂腹鱼属高原鳅属食性高通量测序稳定同位素

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某规模化猪场猪细小病毒的检测与分析

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当代畜牧 2024年第5期 17-19页

作者：黎双郝斌李雪娇姚斌刘淑华刘峰李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设丘团塔里木动物疫病诊断与防挖工程实验室新疆阿拉尔843300

南疆某规模化养殖场的妊娠母猪在接种了猪细小疫苗后,出现流产、死胎、木乃伊化、胎儿发育不良等症状。笔者以该养殖场42头疑似发病猪为研究对象,采集其流产胎儿、胎盘、肝脏、肺脏等组织器官进行处理,对猪细小病毒基因组序列进行特异... 详细信息

南疆某规模化养殖场的妊娠母猪在接种了猪细小疫苗后,出现流产、死胎、木乃伊化、胎儿发育不良等症状。笔者以该养殖场42头疑似发病猪为研究对象,采集其流产胎儿、胎盘、肝脏、肺脏等组织器官进行处理,对猪细小病毒基因组序列进行特异性扩增、克隆、测序,经NCBI比对后确认其感染猪细小病毒病。希望此次试验能为该规模化猪场猪细小病毒病的防控提供参考。

关键词：猪细小病毒分离鉴定

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日粮中不同葡萄籽添加比例对多浪羊营养物质消化代谢的影响

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饲料工业 2021年第3期42卷 43-48页

作者：彭婉婉许贵善马忠杰何刚刘建行王彦高帆冯昕炜塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在研究日粮中不同葡萄籽添加比例对多浪羊营养物质消化代谢的影响。试验选用15只健康、1.5岁左右、体重(41.0±1.0)kg、安装永久瘤胃瘘管的多浪羊羯羊,随机分成5组,分别饲喂添加0%(D1组)、4%(D2组)、8%(D3组)、12%(D4组)和16%... 详细信息

试验旨在研究日粮中不同葡萄籽添加比例对多浪羊营养物质消化代谢的影响。试验选用15只健康、1.5岁左右、体重(41.0±1.0)kg、安装永久瘤胃瘘管的多浪羊羯羊,随机分成5组,分别饲喂添加0%(D1组)、4%(D2组)、8%(D3组)、12%(D4组)和16%(D5组)葡萄籽的全混合日粮。采用全收粪尿法通过采食量与营养物质排出量之间的关系计算各组的干物质(DM)、有机物(OM)、氮(N)、脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)的表观消化率及能量代谢参数。结果表明:D5组的DM和OM表观消化率显著低于D1组(P<0.05),NDF的表观消化率D5组显著低于D1组(P<0.05),D5组氮存留率显著低于D3组和D4组(P<0.05),D4组ADF和EE表观消化率最高,但各组间差异不显著(P>0.05);总能消化率和总能代谢率变化规律相同(D2>D1>D4>D3>D5),消化能代谢率表现为D1>D4>D2>D5>D3,但各组间无显著差异(P>0.05)。综上,16%的葡萄籽添加日粮可降低DM、OM、NDF、氮表观消化率,不利于营养物质的消化。

关键词：葡萄籽多浪羊消化率能量代谢营养物质

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发酵甜菜渣对断奶仔猪生长性能、血液生化与免疫指标和肠道微生物多样性的影响

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中国畜牧杂志 2023年第1期59卷 247-253页

作者：敖维平程梦陈颜旭孙继鹏张春雷赵先乐周波塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 新疆宏盛牧歌养殖有限公司新疆阿拉尔843308

试验旨在研究仔猪饲粮中添加发酵甜菜渣对仔猪生长性能及肠道菌群结构的影响。选择同批次120头28~32日龄、平均体重为(9.96±0.13)kg的杜×长×大断奶仔猪(公母各半),随机分成2组,每组5个重复(栏),每栏12头猪,试验期28 d。... 详细信息

试验旨在研究仔猪饲粮中添加发酵甜菜渣对仔猪生长性能及肠道菌群结构的影响。选择同批次120头28~32日龄、平均体重为(9.96±0.13)kg的杜×长×大断奶仔猪(公母各半),随机分成2组,每组5个重复(栏),每栏12头猪,试验期28 d。对照组饲喂基础日粮,发酵甜菜渣组用发酵甜菜渣等量(以干物质为基础)替代基础日粮中5.26%玉米。结果表明:与对照组相比,发酵甜菜渣组断奶仔猪的末重增加6.61%(P<0.05),但日增重差异不显著;发酵甜菜渣组仔猪的血浆白蛋白浓度提高了28.31%(P<0.05),血浆谷草转氨酶、尿素氮和丙二醛浓度分别降低了27.74%、12.20%和46.90%(P<0.05);仔猪血浆IgA和IgG的含量在组间没有显著差异;直肠微生物16S rRNA基因测序发现,对照组肠道微生物特有OUT有79个,发酵甜菜渣组特有OUT为74个,2组Alpha多样性指数差异不显著,但发酵甜菜渣组肠道厚壁菌门相对丰度高于对照组(P<0.05)。另外,成本计算发现发酵甜菜渣组仔猪的单位增重成本比对照组减少了0.21元/kg。本试验条件下,发酵甜菜渣替代饲粮中部分玉米(5.26%)对断奶仔猪增重无负面影响,对血浆IgA、IgG含量和肠道微生物Alpha多样性影响不显著,但可提高仔猪抗氧化能力,增加肠道厚壁菌门相对丰度,降低饲养成本。

关键词：甜菜渣发酵断奶仔猪抗氧化指标肠道微生物多样性

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细粒棘球绦虫EgBAL蛋白的生物信息学分析及原核表达

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中国畜牧兽医 2025年第2期52卷 801-810页

作者：赵文卿薄新文普娜张玉霞陈旭珂张艳艳孙艳齐萌王正荣塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 石河子大学动物科技学院石河子832000

[目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(Ge... 详细信息

[目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(GenBank登录号:HM748917),设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,通过PCR扩增并克隆EgBAL基因。使用Mega 7.0软件,通过邻接法(NJ)构建系统进化树,运用生物信息学软件对EgBAL蛋白理化性质和结构特征进行预测分析。构建含EgBAL基因重组pET-22b质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达EgBAL重组蛋白,通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,并进行纯化。利用Western blotting分析重组蛋白的免疫原性。[结果]细粒棘球绦虫EgBAL基因片段大小为1 020 bp。系统进化树显示,EgBAL蛋白与中华树鼩EgBAL蛋白处于同一分支,进化距离较近,相似性高达99.60%。生物信息学分析显示,EgBAL基因全长1 014 bp,编码337个氨基酸,EgBAL蛋白分子质量为37 089.59 u,理论等电点为4.77,不稳定指数为44.72,为不稳定蛋白,脂肪系数为66.11,亲水性为-0.429,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽。EgBAL蛋白具有14个潜在B细胞抗原表位,二级结构包括α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲,分别占27.90%、12.76%、12.76%和56.08%。此外,EgBAL蛋白含有35个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸磷酸化位点、16个苏氨酸磷酸化位点和7个酪氨酸磷酸化位点。本研究成功构建重组pET-22b-EgBAL质粒,诱导表达得到EgBAL重组蛋白大小约38 ku。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被细粒棘球绦虫感染的昆明小鼠和犬的阳性血清识别,具有良好的免疫原性。[结论]本研究成功克隆了细粒棘球绦虫EgBAL基因、表达了EgBAL重组蛋白,并初步证实重组EgBAL蛋白具有较好的免疫原性,提示其有作为囊型棘球蚴病疫苗或诊断候选抗原的潜力,为进一步研究EgBAL蛋白的功能提供了科学依据。

关键词：细粒棘球绦虫 EgBAL基因生物信息学分析原核表达

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策勒黑羊母羊脂尾性状特征及其与体重、体尺的相关性分析

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黑龙江畜牧兽医 2022年第19期 59-63页

作者：米热妮萨·图尔荪托合提张继虎买尔哈巴郑浪漫李亮刘书东塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆畜牧科学院草业研究所乌鲁木齐830000

为了探究策勒黑羊脂尾性状特征及其与体重、体尺的相关性,试验选取健康的成年策勒黑羊母羊408只,测定体重(y)、体高(x_(1))、体长(x_(2))、体斜长(x_(3))、胸宽(x_(4))、胸深(x_(5))、胸围(x_(6))、管围(x_(7))、尾长(x_(8))、尾宽(x_(... 详细信息

为了探究策勒黑羊脂尾性状特征及其与体重、体尺的相关性,试验选取健康的成年策勒黑羊母羊408只,测定体重(y)、体高(x_(1))、体长(x_(2))、体斜长(x_(3))、胸宽(x_(4))、胸深(x_(5))、胸围(x_(6))、管围(x_(7))、尾长(x_(8))、尾宽(x_(9))和尾周长(x_(10)),计算尾体积(x_(11)),分析策勒黑羊母羊的尾体积差异,根据尾体积进行尾型分型,并对体重与脂尾性状和体尺指标进行相关性分析,构建体重的最优回归方程。结果表明:策勒黑羊母羊平均尾体积较大,为(18108.51±11868.52)cm3,策勒黑羊母羊的尾型分为小尾型、中尾型、大尾型和肥尾型;肥尾型策勒黑羊母羊的数量比较少(9只),中尾型数量较多(223只);肥尾型的策勒黑羊母羊的体重、体长、体斜长、胸围、尾长、尾宽和尾周长均极显著大于其他三种尾型(P<0.01);策勒黑羊母羊的体高、体长、体斜长、胸深、胸围、管围、尾长、尾宽和尾周长与体重均呈极显著正相关(P<0.01);构建的母羊体重最优回归方程为y=0.152x_(5)+0.078x_(6)+0.146x_(9)+0.284x_(2)+6.430。说明策勒黑羊尾部性状与体重密切相关,揭示尾部性状对产肉性能具有一定影响,在策勒黑羊生产性能测定和品种选育中要关注尾部性状。

关键词：策勒黑羊尾部性状脂尾性状体尺性状相关性分析

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阿克苏地区某规模化猪场猪流行性腹泻的诊断和疫苗效果评价

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塔里木大学学报 2023年第2期35卷 60-66页

作者：邢潇月刘洋李虎胡亚辉刘祥杰张家浩李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发,采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物,结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为100%。为探究其原因,于2021年1—12月采集该猪场6567份猪肛拭子,通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的... 详细信息

2021年1月阿克苏地区某规模化猪场腹泻病爆发,采用猪腹泻胶体金试剂盒检测发病仔猪腹泻物,结果显示猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率为100%。为探究其原因,于2021年1—12月采集该猪场6567份猪肛拭子,通过实时荧光定量法检测不同月份PEDV的感染情况,为防控猪流行性腹泻(PED),选用TGE-PED二联弱毒苗和灭活苗对妊娠85 d和105 d母猪进行联合免疫,应用间接ELISA法监测妊娠母猪的IgG、IgA抗体水平,并对该场PEDV疫苗免疫效果进行评价。结果显示PEDV的检出率在1月、2月、11月、12月较高,其余月份较低;妊娠母猪PEDV的抗体IgG和IgA抗体阳性率在产前15 d和分娩当天均达到了100%,离散度小于40%,免疫效果较好;产前1 d各批次PEDV的IgG抗体阳性率仍达到100%,但IgA抗体阳性率有不同程度下降,且离散度有不同程度升高,推测母猪可能存在排毒情况。本研究为该猪场PED防控提供了理论依据。

关键词：猪流行性腹泻荧光定量PCR PEDV 免疫抗体

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羊痘病毒80、81基因真核表达载体构建及鉴定

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现代畜牧兽医 2023年第11期 1-5页

作者：葛志毅赵微程思危周园霞马欣欣李有文塔里木大学动物与科学技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在探究羊痘病毒80、81基因的生物学功能。利用在线软件对80、81基因进行生物信息学分析,以此为基础通过PCR技术扩增80、81基因,与真核表达载体pCDNA3.1构建重组质粒;重组质粒转染Vero细胞,CCK-8测定重组质粒在细胞中表达蛋白的毒... 详细信息

试验旨在探究羊痘病毒80、81基因的生物学功能。利用在线软件对80、81基因进行生物信息学分析,以此为基础通过PCR技术扩增80、81基因,与真核表达载体pCDNA3.1构建重组质粒;重组质粒转染Vero细胞,CCK-8测定重组质粒在细胞中表达蛋白的毒力。结果显示:羊痘病毒80基因蛋白以α螺旋为主,表现出亲水性,具备功能酶位点;羊痘病毒81基因蛋白以无规则卷曲为主,表现出疏水性,也具有功能酶位点。以扩增80、81基因为模板成功构建pCDNA3.1-80、pCDNA3.1-81真核表达载体,CCK-8未检测到80、81基因在细胞中表达的蛋白具有毒力。研究表明,80、81基因具有功能位点,在转染细胞中未表现出毒力。

关键词：羊痘病毒真核表达载体生物学分析细胞表达

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槲皮素-替米考星混合物纳米粒的制备及对金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性研究

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中国畜牧兽医 2022年第4期49卷 1470-1478页

作者：刘金环张珊玲宋玮罗万和陈伟塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室阿拉尔843300

【目的】制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】通过对槲皮素(0.05、0.10、... 详细信息

【目的】制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】通过对槲皮素(0.05、0.10、0.15和0.20 g)和替米考星原料药用量(0.2、0.3、0.4和0.5 g)及转速(500、1000、1500 r/min)、反应时间(0.5、1.0、2.0 h)、反应温度(25、50、75℃)、溶剂浓度(5.0%、7.5%、10.0%)进行考察,以外观性状为指标,筛选槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优配方和制备条件;以微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径和Zeta电位为指标,对制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒表征;通过琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和体外杀菌曲线,对比槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抗菌活性,评价槲皮素-替米考星混合物纳米粒的优势。【结果】当替米考星为0.4 g、槲皮素为0.1 g、溶剂为20 mL 7.5%的聚乙二醇溶液,在转速为1000 r/min、反应时间为1 h、反应温度为50℃时,所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优,其溶液外观性状显示颜色清亮,无沉淀和絮状物;微观形态显示该混合物纳米粒分布均匀,颗粒大小一致;沉降体积比为1,再分散性良好,平均粒径为741.9 nm,Zeta电位为-7.69 mV。替米考星标准品、槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抑菌圈直径分别为2.54、1.51和1.38 cm,对SASCVs菌株的最低抑菌浓度分别为1、1和2μg/mL;体外杀菌曲线表明,槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株表现出明显的浓度依赖性。【结论】本研究所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株具有较强杀菌能力,可为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供基础研究资料。

关键词：槲皮素替米考星混合物纳米粒金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性

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