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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第12期 108-110,296页

作者：王娜胡建军武军元新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室/塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300

为了解新疆南疆牛隐孢子虫病的感染情况,从而为该病的防控提供理论依据,以新疆南疆某牛场牛粪中的隐孢子虫卵囊DNA为模板,根据隐孢子虫18S rRNA序列设计引物,采用巢式PCR方法鉴定了自然感染的新疆南疆牛源隐孢子虫,并对扩增出的目的片... 详细信息

为了解新疆南疆牛隐孢子虫病的感染情况,从而为该病的防控提供理论依据,以新疆南疆某牛场牛粪中的隐孢子虫卵囊DNA为模板,根据隐孢子虫18S rRNA序列设计引物,采用巢式PCR方法鉴定了自然感染的新疆南疆牛源隐孢子虫,并对扩增出的目的片段进行了测序、同源性分析,并运用MEGA 5.0软件构建系统发育进化树。结果表明:检测材料能够扩增出目的片段;新疆南疆牛源隐孢子虫分离株的18S rRNA与广州微小隐孢子虫的同源性达100%,种系发育亲缘关系最近,处于同一分支,与宁夏、河南、黑龙江等地微小隐孢子虫的同源性达99%。说明新疆南疆牛源隐孢子虫分离株在种属上为微小隐孢子虫。

关键词：新疆牛源隐孢子虫巢式PCR 种系发育

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16SrDNA克隆文库法分析拜城油鸡盲肠细菌多样性研究

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家畜生态学报 2017年第2期38卷 18-21页

作者：陈荣刘利林格明古丽·木哈台王永塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为了研究拜城油鸡盲肠细菌物种多样性,本研究采用基于16SrDNA基因序列系统发育分析的免培养方法进行细菌物种多样性分析,以盲肠内容物样品总DNA为模板,利用细菌通用引物扩增16SrDNA基因,构建16SrDNA基因克隆文库,并对文库中的插入序列进... 详细信息

为了研究拜城油鸡盲肠细菌物种多样性,本研究采用基于16SrDNA基因序列系统发育分析的免培养方法进行细菌物种多样性分析,以盲肠内容物样品总DNA为模板,利用细菌通用引物扩增16SrDNA基因,构建16SrDNA基因克隆文库,并对文库中的插入序列进行RFLP分析。结果表明:随机挑选的252个克隆为阳性克隆,阳性率为65.7%,经过RFLP筛选出95个不同图谱的重组克隆并测序,比对分析后发现:拜城油鸡盲肠细菌分属于厚壁菌门(Firmicutes)(65.26%)、拟杆菌门(Bacteroidetes)27.37%)和变形菌门(Proteobacteria)(4.21%)。在纲水平有梭菌纲(Clostridia)、拟杆菌纲(Bacteroidia)和ε-变形菌纲(Epsilonproteobacteria)相对含量最多,分别占总菌的64.21%、26.32%和4.21。在科水平上以瘤胃菌科(Ruminococcaceae)(21.05%)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)(20%)和理研菌科(Rikenellaceae)(12.63%)相对含量最多,为优势科。在属水平上仅有31.58%的序列可以鉴定到属,Lachnoclostridium的相对含量最多,占总菌的12.63%,其次为另枝菌属(Alistipes)和瘤胃梭菌属(Ruminiclostridium)。拜城油鸡盲肠内容物中的细菌组成具有丰富的多样性,并有新细菌分类单位的潜在资源,值得进一步进行开发研究。

关键词：拜城油鸡盲肠细菌 16SrDNA 多样性

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苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医 2017年第7期44卷 2155-2159页

作者：贾琦珍陈根元王连群亚森.麦麦提王帅塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱... 详细信息

本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱生腹水效价为1∶80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×1010,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128μg/mL(R2=0.9969),与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。

关键词：苦马豆素单克隆抗体杂交瘤细胞间接ElISA

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小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响

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西南农业学报 2017年第1期30卷 209-214页

作者：王帅贾琦珍陈根元王连群张玲塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

研究小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含... 详细信息

研究小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法定位,Hoechst 33258荧光染色细胞核,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期。从第35天开始,试验组家兔生精细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),表现为细胞膜下陷,细胞器浓缩,细胞核碎裂等,并出现凋亡小体。试验组家兔睾丸单倍体细胞和二倍体细胞凋亡率均极显著升高(P﹤0.01),但四倍体细胞数量无显著变化。与对照组相比,中毒家兔睾丸生精细胞G0/G1期数量升高,S期细胞数量降低,而且G1期与S期细胞数量呈显著的负相关。小花棘豆中毒可导致家兔睾丸组织生精细胞凋亡,且与小花棘豆毒性成分呈现一定的时间-剂量效应。

关键词：小花棘豆苦马豆素生精细胞细胞凋亡细胞周期

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山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备

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中国畜牧兽医 2017年第10期44卷 2851-2857页

作者：李金娜宋书婷陈宏伟刘涛赵爱云李有文塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

为了研究羊痘病毒(capripox virus),制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体,试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达... 详细信息

为了研究羊痘病毒(capripox virus),制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体,试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达,目的蛋白采用SDS-PAGE和Western blotting检测,并用KCl染色切胶纯化,纯化蛋白加弗氏佐剂免疫家兔,制备的抗体用Western blotting和ELISA检测评价。结果表明,试验成功构建了表达载体p ET42b-KLP2-1和p ET42b-KLP2-2,测序结果显示KLP2-1和KLP2-2基因大小分别为657和984 bp,分别表达了约27和38 ku的蛋白,与理论值相符。切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/m L之间,制备的抗体用Western blotting检测发现,蛋白有明显的特异条带,ELISA检测抗体的效价均为1∶512。说明试验成功表达了KLP2-1、KLP2-2蛋白,制备了相应的多克隆抗体。

关键词：羊痘病毒 KLP2基因蛋白表达抗体制备

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塔里木马鹿鹿茸VEGF基因克隆及其在不同鹿茸组织中的表达研究

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中国畜牧兽医 2017年第5期44卷 1289-1294页

作者：刘俊峰王晓婷钟婷郭雪峰新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300 塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300

试验旨在从塔里木马鹿鹿茸顶端组织中克隆血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的编码序列,分析其分子特性及其在鹿茸组织中的表达情况。本研究采用改良的Trizol法提取鹿茸顶端组织总RNA,以RT-PCR方法获得VEGF基... 详细信息

试验旨在从塔里木马鹿鹿茸顶端组织中克隆血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的编码序列,分析其分子特性及其在鹿茸组织中的表达情况。本研究采用改良的Trizol法提取鹿茸顶端组织总RNA,以RT-PCR方法获得VEGF基因,回收纯化后连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并鉴定,利用免疫组化法确定VEGF蛋白在塔里木马鹿鹿茸顶端组织茸皮层、间充质层和软骨层中的表达水平。结果显示,VEGF基因开放读码框(ORF)全长为648bp,编码216个氨基酸。通过其序列比对和进化分析发现,塔里木马鹿茸中VEGF与人、牛、羊、猪的VEGF核苷酸序列同源性分别为98.75%、96.55%、97.58%和97.56%,其中与人VEGF同源性较高。免疫组化试验表明,塔里木马鹿VEGF蛋白在间充质、茸皮层和软骨中均有表达,但无明显表达差异。说明塔里木马鹿鹿茸可能会是人类研究再生医学和血管相关疾病的理想模型,同时,本研究为不同发育期塔里木马鹿鹿茸再生干细胞比较蛋白质组学研究提供了基础试验数据。

关键词：塔里木马鹿茸血管内皮生长因子克隆免疫组化

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因的克隆及序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2017年第7期 178-181页

作者：宋显明艾东旭张晶李玮李莲瑞塔里木大学生命科学学院新疆阿拉尔843300 新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引发的猪的一种高度传染性疾病。根据PRRS致病性的不同，可将其分为低致病性（经典）猪繁殖与呼吸综合征（IJP—PRRS）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRS）。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性序列分析克隆基因 virus 传染性疾病猪蓝耳病

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南疆绵羊FSHR基因第10外显子多态性检测及序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2017年第9期 114-117,294页

作者：王惠娥王永汪澜陆阳薛莹莹塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为了研究多浪羊和卡拉库尔羊促卵泡素受体(FSHR)基因第10外显子的多态性及其与多浪羊胎次产羔数相关性,试验采用PCR-SSCP和直接测序的方法进行研究。结果表明:多浪羊和卡拉库尔羊FSHR基因第10外显子存在3个突变位点,分别为Arg 1 328 Lys... 详细信息

为了研究多浪羊和卡拉库尔羊促卵泡素受体(FSHR)基因第10外显子的多态性及其与多浪羊胎次产羔数相关性,试验采用PCR-SSCP和直接测序的方法进行研究。结果表明:多浪羊和卡拉库尔羊FSHR基因第10外显子存在3个突变位点,分别为Arg 1 328 Lys、Gln 1 334 Pro和Asp 1 342Asn,均属于错义突变。在1 328位点有等位基因A和B,基因型仅为AA和AB;在1 334位点有等位基因C和D,基因型只有CD和DD;在1 342位点有等位基因E和F,基因型为EE、FF和EF。多浪羊与卡拉库尔羊在1 334位点基因型分布存在显著差异(P<0.05),其他两位点差异不显著(P>0.05);FSHR基因多态性与多浪羊胎次产羔数之间差异不显著(P>0.05),表明FSHR基因第10外显子对多浪羊产羔数没有显著影响(P>0.05)。

关键词：促卵泡素受体(vsnn) PCR—SSCP 多浪羊卡拉库尔羊多态性检测序列分析

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饲喂水平对多浪羊生产性能及内脏器官发育的影响

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饲料工业 2017年第15期38卷 36-39页

作者：冯昕炜马绍楠周艳许贵善塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

文章旨在研究不同饲喂水平对20~35 kg多浪羊公羔的生产性能和内脏器官发育的影响。采用完全随机试验设计,将15只多浪羊公羔随机分为3组,每组5只羊。三组试验羊分别按自由采食(AL组)、自由采食量的70%(IR70组)和自由采食量的40%(IR40组)... 详细信息

文章旨在研究不同饲喂水平对20~35 kg多浪羊公羔的生产性能和内脏器官发育的影响。采用完全随机试验设计,将15只多浪羊公羔随机分为3组,每组5只羊。三组试验羊分别按自由采食(AL组)、自由采食量的70%(IR70组)和自由采食量的40%(IR40组)3个饲喂水平投喂试验饲粮。当自由采食的羊只体重达到35 kg时进行屠宰试验测定。结果表明,净增重、平均日增重、干物质采食量、宰前活重、空体重和胴体重在3组间差异显著(P<0.05)且呈现相同的变化规律,即AL组>IR70组>IR40组;屠宰率、净肉率、胴体净肉率和骨重三组间差异不显著(P>0.05);瘤胃占宰前活重比例在自由采食组较高,与IR70组差异不显著(P>0.05),但显著高于IR40组(P<0.05);肝脏占宰前活重的比例三组之间差异显著(P<0.05)。结果提示,饲喂水平对多浪羊的生产性能会产生显著的影响;饲喂水平会影响到胃室的增重和发育,影响最大的是瘤胃和皱胃;多浪羊公羔的主要内脏器官发育受饲喂水平的影响程度不一致,其中肝脏受体重的影响最为显著。

关键词：多浪羊生产性能屠宰性能内脏器官发育

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新疆阿勒泰地区酸奶疙瘩中乳酸菌的分离和鉴定

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中国酿造 2017年第9期36卷 116-119页

作者：刘俊峰尹雪郭雪峰塔里木大学动物科学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

从新疆阿勒泰地区牧民制作的传统酸奶疙瘩中分离、筛选出菌株SA,通过过氧化氢酶试验阴性初步确定其为乳酸菌,对菌株SA进行菌落和细胞形态、生理生化特征及16S r DNA基因序列分析及系统进化树分析。结果表明,分离菌株SA与Weissella cibar... 详细信息

从新疆阿勒泰地区牧民制作的传统酸奶疙瘩中分离、筛选出菌株SA,通过过氧化氢酶试验阴性初步确定其为乳酸菌,对菌株SA进行菌落和细胞形态、生理生化特征及16S r DNA基因序列分析及系统进化树分析。结果表明,分离菌株SA与Weissella cibaria KACC 11862 AEKT01000037聚为一类,其同源性为99%,故将其鉴定为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。其最佳生长条件为40℃、p H 6.0,并且能够耐受3%的Na Cl。

关键词：乳酸菌分离鉴定

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