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新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌分离鉴定及其对金黄色葡萄球菌的抑制作用

畜牧与饲料科学 2024年第2期45卷 1-8页

作者：苏帆帆毛相清赵耀邢国锋吴自豪吴静塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300

[目的]分离、鉴定新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌,评价其对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]从呼图壁县某驼场采集健康驼乳样本45份,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用细菌16S rDNA序列PCR扩增及测序方法进行分子生物学鉴定。利用... 详细信息

[目的]分离、鉴定新疆维吾尔自治区呼图壁县驼乳源乳酸菌,评价其对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]从呼图壁县某驼场采集健康驼乳样本45份,使用MRS培养基分离乳酸菌,采用细菌16S rDNA序列PCR扩增及测序方法进行分子生物学鉴定。利用点种法、琼脂斑点法和牛津杯双层琼脂扩散法筛选对金黄色葡萄球菌ATCC 29213具有抑制作用的乳酸菌。将MRS培养基的pH值调节至1~10,测定乳酸菌的耐酸能力;在MRS培养基中添加0~0.30%的牛胆盐,测定乳酸菌的耐胆盐能力。应用微量肉汤倍比稀释法测定乳酸菌无细胞上清液(cell-free culture supernatant,CFCS)对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和亚抑菌浓度(subinhibitory concentration,SIC);考查CFCS在不同pH值条件下及经酶处理后对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑制作用变化,初步分析CFCS的抑菌活性物质;利用牛津杯双层琼脂扩散法测定CFCS对驼乳源和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌野生株的抑制作用。[结果]从45份驼乳中分离得到5种20株乳酸菌,分别为粪肠球菌(Enterococcus faecalis,n=13)、鼠李糖乳杆菌(Lacticaseibcillus rhamnsus,n=1)、发酵黏液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum,n=3)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei,n=1)和融合魏斯氏菌(Weissella confusa,n=2)。经3种方法筛选,鼠李糖乳杆菌KC4株对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的抑菌作用最强,且具有良好的耐酸和耐胆盐特性,在pH值为4~7和牛胆盐浓度为0~0.20%的条件下均可正常生长。KC4株的CFCS对金黄色葡萄球菌ATCC 29213的MIC和SIC分别为62.5 mg/mL和7.8125 mg/mL;在pH值为2~5时仍具有抑菌效果,经过胃蛋白酶、过氧化物酶、胰蛋白酶、肽酶、蛋白酶K、过氧化氢酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌效果极显著(P<0.01)降低;对驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生株均具有良好的抑菌效果。[结论]在呼图壁县驼乳中筛选出1株对金黄色葡萄球菌标准菌株以及驼源和牛源金黄色葡萄球菌野生菌株均具有较强抑制作用的鼠李糖乳杆菌,具有较强的耐酸和耐胆盐能力,其抑菌活性物质可能包括酸、过氧化物和蛋白类物质等。研究结果为驼乳源乳酸菌的开发利用提供了潜在菌种资源。

关键词：驼乳乳酸菌金黄色葡萄球菌抑菌活性

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新疆维吾尔自治区阿克苏地区某屠宰场羊源大肠杆菌MLST分型、耐药性分析和毒力基因检测

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畜牧与饲料科学 2024年第2期45卷 95-102页

作者：李广西韩婷婷吴自豪吴静塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300

[目的]了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区屠宰场羊源大肠杆菌的流行情况以及耐药性和毒力基因分布特征。[方法]从阿克苏地区某屠宰场采集健康羊的淋巴结、胴体拭子、粪便样本共30份,使用选择性培养基分离大肠杆菌,然后采用大肠杆菌特异性p... 详细信息

[目的]了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区屠宰场羊源大肠杆菌的流行情况以及耐药性和毒力基因分布特征。[方法]从阿克苏地区某屠宰场采集健康羊的淋巴结、胴体拭子、粪便样本共30份,使用选择性培养基分离大肠杆菌,然后采用大肠杆菌特异性phoA基因对其进行分子生物学鉴定;利用PCR扩增及测序技术对大肠杆菌分离株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);采用K-B纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;应用PCR技术检测分离菌株的耐药基因和毒力基因携带情况;使用96孔板微量肉汤法测定分离菌株的生物被膜形成能力。[结果]从30份样本中分离得到14株大肠杆菌,分离率为46.67%;14株分离株分属于10个MLST型别;对复方新诺明(100%)、青霉素(85.71%)和四环素(50.00%)耐药率较高,9株菌具有多重耐药表型(64.29%);在14株大肠杆菌中检测到blaTEM(85.71%)、aph(3′)(71.43%)、tetA(64.29%)、sul1(57.14%)和sul2(57.14%)等12种耐药基因,并且8株菌携带Ⅰ型整合子int-Ⅰ基因(57.14%);在14株大肠杆菌中检测到fimH(100%)、yijP(92.86%)、mat(92.86%)、sheA(92.86%)、stx1(35.71%)和ibeB(28.57%)等10种毒力基因;10株大肠杆菌具有生物被膜形成能力(71.43%)。[结论]该屠宰场羊源大肠杆菌种内分型丰富,具有较强的耐药性,还可形成生物被膜,并且携带多种耐药基因和毒力基因,对动物性食品安全可能存在潜在威胁。

关键词：大肠杆菌 MLST分型耐药性毒力基因生物被膜

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马乳源大肠杆菌的毒力基因检测和耐药性分析

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畜牧与饲料科学 2023年第1期44卷 24-31页

作者：王继学吴自豪王雪吕俊凡李园吴静塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

[目的]了解新疆伊犁地区某马场乳源大肠杆菌的毒力基因携带情况和药物敏感性。[方法]对采集到的85份马乳进行大肠杆菌的分离纯化、染色镜检、特异性基因phoA的扩增和16S rDNA测序;采用K-B纸片扩散法药敏试验分析马乳源大肠杆菌的耐药性... 详细信息

[目的]了解新疆伊犁地区某马场乳源大肠杆菌的毒力基因携带情况和药物敏感性。[方法]对采集到的85份马乳进行大肠杆菌的分离纯化、染色镜检、特异性基因phoA的扩增和16S rDNA测序;采用K-B纸片扩散法药敏试验分析马乳源大肠杆菌的耐药性;采用PCR技术检测马乳源大肠杆菌携带的毒力基因、耐药基因及鉴定其所属系统发育群,对大肠杆菌进行生物被膜形成能力检测。[结果]从85份马乳中分离得到6株大肠杆菌,其中3株为A群,3株为B1群;6株大肠杆菌均对青霉素和替米考星耐药;均携带ibeB、yijP、mat、sodA和csgA毒力基因;均未检测到耐药基因;有4株具有生物膜形成能力。[结论]对新疆伊犁地区某马场马乳源大肠杆菌进行初步的毒力基因检测和耐药性分析,发现其对青霉素和替米考星耐药严重,并携带多种毒力基因,具有一定的潜在致病风险。

关键词：马乳大肠杆菌毒力基因药物敏感性分析

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新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性、CTX-M基因携带情况与毒力基因检测

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畜牧与饲料科学 2024年第1期45卷 94-101页

作者：赵耀邢国锋苏帆帆高攀彭健吴自豪吴静塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团第九师农业科学研究所(畜牧科学研究所) 新疆额敏834601 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300

[目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大... 详细信息

[目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大肠杆菌分离株进行分子分型(系统发育群和脂多糖核心型)以及耐药基因、CTX-M基因亚型、毒力基因检测;分别使用K-B纸片法、CTX与TCL双纸片法进行药物敏感性试验和产ESBLs大肠杆菌鉴定;采用结晶紫染色法半定量检测菌株的生物被膜形成能力。[结果]根据菌落生长特征、革兰染色特性及16S rDNA测序结果,从16份牛腹泻粪样中分离鉴定出16株大肠杆菌,分离率为100%;系统发育群主要为B1群(14/16,87.50%),脂多糖核心型多为R1型(15/16,93.75%)。分离菌株对青霉素、利福平、复方新诺明表现出较强耐药性,耐药率分别为100%、68.75%、68.75%;对多黏菌素、替加环素、美罗培南敏感,耐药率均为0;有12株(75.00%)具有多重耐药表型;有11株(68.75%)产ESBLs;有15株(93.75%)可形成生物被膜。16株大肠杆菌中共检出17种耐药基因,CTX-M、ant(6′)、sul1等8种耐药基因的检出率为100%;有14株(87.50%)为CTX-M-1G基因亚型;共检出12种毒力基因,iroN、ompA、yijP等5种毒力基因的检出率为100%。[结论]新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌CTX-M基因检出率较高,携带多种耐药基因和毒力基因,耐药性较强,对该地区牛健康养殖存在潜在威胁,应加强该地区CTX-M型大肠杆菌的流行情况监控。

关键词：大肠杆菌 CTX-M基因分子分型耐药性毒力基因

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新疆阿克苏地区某规模化猪场猪链球菌分离鉴定及耐药性分析

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现代畜牧兽医 2023年第2期 9-13页

作者：胡亚辉张家浩李虎刘祥杰邢潇月杨睿智李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300

研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾... 详细信息

研究旨在确定新疆阿克苏地区某猪场仔猪发病死亡具体原因并分析其具体耐药情况。试验对该猪场病死仔猪脏器进行无菌采样及细菌分离培养,并对分离株进行形态学鉴定、生化鉴定及分析其部分生物学特性。结果显示:从病死仔猪心脏、肝脏、脾脏中分离出的1株细菌,在血平板上呈圆形、隆起、半透明、光滑且湿润、边缘比较整齐的菌落,且表现出明显的β溶血环,初步鉴定为链球菌。生化鉴定及测序结果表明,分离株为2型猪链球菌。药敏试验结果表明,分离菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠、多西环素、氧氟沙星及环丙沙星表现为敏感,对青霉素、阿米卡星、新霉素表现为中介,对阿莫西林、复方新诺明、氨苄西林、磺胺甲硝唑、四环素、米诺环素和庆大霉素等药物表现为不同程度的耐药。研究表明,新疆阿克苏地区某猪场仔猪死亡原因为2型猪链球菌感染,且该菌株对头孢哌酮、头孢曲松钠等药物敏感,建议临床可将其应用于2型猪链球菌的防治。

关键词： 2型猪链球菌分离与鉴定 16S rRNA 耐药性分析

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