检索结果-内蒙古大学图书馆

IL-21的免疫调节作用

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国际免疫学杂志 2006年第6期29卷 354-356页

作者：徐林熊思东（审校）复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因与疫苗研究中心200032 复旦大学上海医学院免疫学系

IL-21是近几年来被发现和关注的细胞因子,由活化的T细胞合成和分泌,主要通过激活NK细胞来发挥功能。已有的研究表明IL-21还可对T、B细胞和DC发挥重要的调节作用,并可能在促进天然免疫向获得性免疫转化中扮演了重要角色。

关键词： IL-21 天然免疫获得性免疫

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mB7AP-exCD40L融合蛋白的分子设计及其在Pichia pastoris中的表达和生物活性

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复旦学报（医学版） 2005年第4期32卷 401-406,F003页

作者：陈晋储以微邵先安任学芳张洪勇高海峰何球藻熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。W... 详细信息

目的小鼠B7反义肽与小鼠CD40L胞外区融合蛋白(mB7AP-exCD40L)的分子模拟设计及其酵母表达体系的建立,研究其酵母表达产物的生物活性。方法分子模拟设计mB7AP-exCD40L;构建pPIC9K-mB7AP-exCD40L质粒并用电击法转化PichiapastorisGS115。Westernblot鉴定融合蛋白的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)研究mB7AP-exCD40L对淋巴细胞增殖的影响。结果构建的重组Pichiapastoris实现了mB7AP-exCD40L的分泌表达,表达蛋白质的相对分子质量约2.6×103,对MLR具有抑制作用。结论分子模拟设计的mB7AP-exCD40L在Pichiapastoris表达体系成功表达,为进一步研究mB7AP-exCD40L在抗移植排斥反应中的作用奠定了基础。

关键词： pastoris 融合蛋白生物活性分子设计混合淋巴细胞反应重组Pichia Western 抗移植排斥反应酵母表达体系分子模拟淋巴细胞增殖相对分子质量 CD40L B7反义肽 GS115 表达产物 blot 分泌表达抑制作用胞外区电击法

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定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用

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复旦学报（医学版） 2005年第3期32卷 359-364页

作者：叶巍邵先安郑秀娟陈习武储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的建立检测趋化因子CC亚家族配体20(CCL20)表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法将人CCL20编码基因克隆到pbs-△ANK质粒中(PAL-2),将-42 bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL20中间,构建内参照质粒PAL-2-... 详细信息

目的建立检测趋化因子CC亚家族配体20(CCL20)表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法将人CCL20编码基因克隆到pbs-△ANK质粒中(PAL-2),将-42 bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL20中间,构建内参照质粒PAL-2-IS.在该定量系统中以PAL-2-IS和PAL-2为模板,用CCL20的特异性引物扩增,根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL20进行相对定量.结果将PAL-2与已知不同系列浓度的PAL-2-IS以内参照竞争定量RT-PCR共扩增定量PAL-2浓度,PAL-2计算浓度与实际浓度无差异(P＞0.05).在同一细胞数量水平(105数量级),内参照竞争定量RT-PCR检测表明:CCL20在L02、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2,而在HepG2.2.15中最低.结论建立了检测CCL20表达水平的内参照定量RT-PCR方法,该方法可用于细胞中CCL20不同表达水平的检测.

关键词：趋化因子CC亚家族配体20 内参照定量竞争逆转录聚合酶链反应

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C3d增强基因免疫诱导的小鼠抗乙型肝炎病毒特异性免疫应答

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中华医学杂志 2005年第2期85卷 101-105页

作者：关庆东王立新郭强张进平徐薇王缨熊思东 200032 复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心

目的探讨C3d对乙型肝炎病毒(HBV)基因免疫诱导的特异性免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径. 方法将HBV-preS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有三拷贝C3d编码基因的TR421-C3d3质粒,构建重组质粒TR421-pre... 详细信息

目的探讨C3d对乙型肝炎病毒(HBV)基因免疫诱导的特异性免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径. 方法将HBV-preS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有三拷贝C3d编码基因的TR421-C3d3质粒,构建重组质粒TR421-preS2/S和TR421-preS2/S-C3d3.采用肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,以空质粒TR421为对照,定期采集血清.ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗-HBs-IgG, 3H-TdR掺入法检测其特异性淋巴细胞增殖活性. 结果 TR421-preS2/S-C3d3重组质粒免疫组诱导的特异性抗-HBs-IgG水平明显高于TR421-preS2/S重组质粒免疫组(P<0.05),而且TR421-preS2/S-C3d3重组质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性也显著高于TR421-preS2/S重组质粒组(P<0.05).结论 C3d可增强基因免疫诱导的HBV特异性体液和细胞免疫应答,为提高HBV基因疫苗的免疫效果提供了新的途径.

关键词：基因疫苗补体乙型肝炎表面抗原

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含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究

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复旦学报（医学版） 2005年第2期32卷 130-133页

作者：汪晓华童德妍徐焕宾熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子... 详细信息

目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子优化的方法提高表位串联蛋白的真核表达效率 ,构建了含多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗。结果　多表位串联基因接入真核表达载体后 ,可在真核细胞内高效表达。多表位嵌合SARS -CoV基因疫苗免疫小鼠后 ,可诱导融合蛋白特异的体液免疫反应。结论　该基于多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗可以诱导抗体应答 ,为该疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词： SARS-CoV 多抗原表位基因疫苗免疫原性研究嵌合真核表达载体体液免疫反应网络数据库配伍选择减毒疫苗软件分析感染过程表达效率高效表达免疫小鼠融合蛋白抗体应答结构区抗原性密码子细胞内串联

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集聚蛋白在淋巴细胞活化中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 555-558页

作者：张进平苏丽萍乔宾徐焕宾张瑞华储以微王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细... 详细信息

目的研究在神经突触形成中发挥重要作用的集聚蛋白(agrin)是否在淋巴细胞中表达并影响淋巴细胞的活化和免疫突触的形成。方法应用RT-PCR检测集聚蛋白在静止和活化淋巴细胞中的表达,并应用实时定量PCR检测分析集聚蛋白的表达量与淋巴细胞活化之间的关系;用抗集聚蛋白抗体观察其对淋巴细胞增殖和免疫突触形成的影响;应用共聚焦显微镜观察集聚蛋白是否参与免疫突触的形成。结果RT-PCR结果显示集聚蛋白在静止和活化的淋巴细胞中均有表达,且经过实时定量PCR分析发现,集聚蛋白的表达和淋巴细胞的活化密切相关;当集聚蛋白被阻断后淋巴细胞的增殖被显著抑制;经共聚焦显微镜观察发现,集聚蛋白在活化的淋巴细胞中以帽化结构形式存在,且和CD3分子共定位,抗集聚蛋白抗体可以明显减少这种帽化结构的形成。结论在神经突触中发挥重要作用的集聚蛋白同样存在于淋巴细胞,可能通过影响淋巴细胞的免疫突触的形成参与淋巴细胞的活化。

关键词：集聚蛋白淋巴细胞活化免疫突触 RT-PCR检测实时定量PCR 神经突触形成淋巴细胞增殖活化淋巴细胞蛋白抗体微镜观察

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原核表达系统T7RNA聚合酶/启动子在真核细胞中表达目的基因的实验研究

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生物工程学报 2005年第2期21卷 182-186页

作者：袁志刚张进平储以微王缨徐薇熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达... 详细信息

将目前高表达水平强大的原核表达系统之一T7RNA聚合酶启动子表达系统通过一系列改进引入真核细胞。通过转染真核细胞实验表明 ,采用真核启动子CMV调控T7RNA聚合酶的表达和在T7启动子下游插入EMCVIRES序列两种解决方案能使该原核表达系统在真核细胞高效表达目的基因 ,且能适应不同的真核细胞环境 ,是一良好的细胞类型非依赖的表达体系。

关键词： T7 RNA聚合酶 T7启动子原核表达系统真核细胞

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SARS-Cov M蛋白的真核表达及其免疫原性研究

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复旦学报（医学版） 2005年第1期32卷 21-24页

作者：童德妍汪晓华郑秀娟关庆东熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。... 详细信息

目的初步研究SARS-Coy病毒M蛋白基因的真核表达效率和免疫原性为进一步的疫苗研究奠定基础。方法以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长M基因,分别克隆至pcDNA4-his／myc和pVAON33载体获得重组质粒pcDNA4-his／myc-M和pVAON33-M。以Western Blot方法利用融合分子羧基段的myc表位检测pcDNA4-his／myc-M转染的293T细胞中M蛋白的真核表达。以ELISA方法检测pVAON33-M质粒基因免疫小鼠诱导产生特异性抗血清。结果pcDNA4-his／myc-M转染后48 h可检测到SARS-Cov M蛋白表达。 pVAON33-M基因免疫能够诱导产生M特异的体液免疫应答。结论本研究的结果表明SARS-Cov M蛋白可以在真核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以作为SARS-Cov疫苗研制的候选抗原之一。

关键词： M蛋白 SARS-Cov 真核表达免疫原性研究转染诱导 DNA 真核细胞克隆文库

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ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用

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复旦学报（医学版） 2005年第5期32卷 505-508页

作者：乔滨徐薇陈刚张凤杨秀利熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因与疫苗研究中心上海200032

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细... 详细信息

目的体外观察ConA活化淋巴细胞来源的DNA(ALDDNA)对BALB/c小鼠巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用。方法将ALDDNA及未活化淋巴细胞来源的DNA(UnALDDNA)分别与BALB/c小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6(IL6)、白细胞介素12(IL12)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的分泌情况。结果ALDDNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)II类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL6、IL12和TNFα。结论ALDDNA对RAW264.7细胞具有免疫刺激作用。

关键词：活化淋巴细胞来源的DNA 巨噬细胞免疫刺激

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CXCR4在肺癌转移中的作用及其机制研究

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中华医学杂志 2005年第17期85卷 1190-1194页

作者：苏丽萍张进平徐焕宾陈晋王缨储以微熊思东 200032 复旦大学上海医学院免疫系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫和疫苗研究中心

目的探讨CXCR4在肺癌转移中的作用及其机制.方法将CXCR4不同表达水平的肺癌细胞(95C、95C-pC、95C-X4、95D、95D-pC、95D-ASX4)接种于裸鼠皮下并分析其转移能力.分别通过趋化侵袭实验、明胶酶谱法、黏附实验、RT-PCR法检测CXCR4/SDF-1... 详细信息

目的探讨CXCR4在肺癌转移中的作用及其机制.方法将CXCR4不同表达水平的肺癌细胞(95C、95C-pC、95C-X4、95D、95D-pC、95D-ASX4)接种于裸鼠皮下并分析其转移能力.分别通过趋化侵袭实验、明胶酶谱法、黏附实验、RT-PCR法检测CXCR4/SDF-1对肺癌细胞迁移、基质金属蛋白酶(MMP-2)活性、黏附能力、生长相关癌基因-α(GRO-α)表达的调控;通过流式细胞术和共聚焦显微镜观察肺癌细胞内纤维肌动蛋白的合成和聚合情况;Western印迹分析CXCR4/SDF-1对ERK1/2磷酸化的影响.结果 CXCR4不同表达水平的肺癌细胞在裸鼠体内具有不同的转移能力,95D-ASX4组有2/5的小鼠发生了转移,其肺转移结节的数目明显少于95D、95D-pC组(P=0.044).CXCR4特异配体SDF-1α可以诱导肺癌细胞的迁移和细胞骨架蛋白纤维肌动蛋白的合成和聚合;SDF-1α促进肺癌细胞MMP-2活性、黏附能力和GRO-α表达的增加;CXCR4中和抗体可以在一定程度上抑制这些作用.SDF-1α可以诱导ERK1/2的磷酸化.结论肺癌转移在一定程度上依赖于CXCR4/SDF-1的相互作用,他们通过调控肺癌细胞的运动性、MMP活性、黏附能力及GRO-α的表达参与肺癌的转移.

关键词：肺肿瘤肿瘤转移受体,CXCR4

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