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未经刺激的静止CD4~+ T细胞与克隆CD4~+ T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义(英文)

生理学报 2003年第6期55卷 633-640页

作者：刘全胜张瑞华储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海 200032 上海基因免疫与疫苗研究中心

在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本... 详细信息

在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本文利用HNT-TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4+T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4+T细胞和新提取未经刺激的CD4+T细胞对无能诱导的反应。结果表明,经化学交联剂1-ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4+T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4+T细胞则不能被诱导产生无能。结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件。这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义。

关键词： T细胞无能化学交联剂ECDI HNT-TCR转基因小鼠 CD4+T细胞克隆增殖反应

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糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义(英文)

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生理学报 2003年第5期55卷 525-529页

作者：刘全胜,Marit Nilsen-Hamilton,熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心 Biochemistry Biophysics and Molecular Biology Iowa State University Ames IA 5001 I USA 复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海 200032 上海 200032

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的35S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水... 详细信息

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的35S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24/24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的协同调控作用。结果显示:（1）在Balb/c 3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24/24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;（2）在Balb/c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24/24p3;（3）在Balb/c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24/24p3有协同诱导效应,而在 BNL细胞中 dexamethasone与 TNF-α对 SIP24/24p3的诱导表现为相加效应;（4）在 Balb/c 3T3和BNL细胞中 dexamethasone与IL-6/TNF-α对SIP24/24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24/24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24/24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24/24p3能同时被炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重

关键词：应急时相反应蛋白SIP24/24p3 35S代谢标记糖皮质激素白介素6 肿瘤坏死因子α

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不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

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免疫学杂志 2003年第4期19卷 250-253页

作者：徐薇沈燕张进平王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径.方法将chitosan-pcDNA3-VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA,评估其特异性体液免疫应答;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活... 详细信息

目的确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径.方法将chitosan-pcDNA3-VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA,评估其特异性体液免疫应答;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫;以5LD50致死剂量CVB3攻击免疫小鼠,评价不同免疫途径的免疫保护效果.结果①在诱导CVB3特异性体液免疫方面:chitosan-pcDNA3-VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG,但未能诱生黏膜IgA;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA,未能诱生特异性IgM和IgG;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA.②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面:仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答.③免疫保护作用:滴鼻组可保护33.3%小鼠长期存活;口服组仅达到16.7%的保护率;肌注组无保护作用.结论滴鼻免疫途径可能是chitosan-pcDNA3-VP1基因疫苗最合适的诱导全面免疫应答的免疫途径.

关键词： Chitosan-DNA疫苗 CVB3 免疫保护滴鼻

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血清淀粉样P成分的DNA结合特性

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免疫学杂志 2003年第5期19卷 336-338页

作者：吴瑾王立新郑秀娟熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义.方法用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴... 详细信息

目的检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义.方法用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴细胞等不同DNA,用DOT-EIA方法检测SAP与它们的结合活性,用巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响.结果人和小鼠SAP均与细菌DNA结合最强,其次为质粒、酵母DNA,与淋巴细胞DNA和小牛胸腺DNA的结合较弱,与单链λDNA结合最弱;与来源于活化状态小鼠淋巴细胞DNA的结合力高于非活化状态;SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可促进巨噬细胞对DNA的吞噬.结论SAP与不同DNA结合活性各异.

关键词：血清淀粉样P成分 DNA 系统性红斑狼疮

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Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

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中国免疫学杂志 2003年第12期19卷 813-817页

作者：徐薇沈燕王立新许从峰储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan... 详细信息

目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80～100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.

关键词： CVB3 VP1 Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫保护

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巨细胞病毒感染对动脉粥样硬化的影响

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免疫学杂志 2003年第6期19卷 451-453页

作者：许从峰陈瑞珍徐薇沈燕葛均波陈灏珠郑秀娟熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032 复旦大学附属中山医院心血管病研究所上海200032

目的　研究巨细胞病毒 (CMV)感染和动脉粥样硬化的关系 ,并探讨其可能机制。方法　通过一个大样本从血清流行病学 (ELISA检测患者血清中抗CMV的IgG抗体 )和分子生物学 (PCR检测动脉粥样硬化病变中CMV特异性基因 )方面探讨巨细胞病毒感... 详细信息

目的　研究巨细胞病毒 (CMV)感染和动脉粥样硬化的关系 ,并探讨其可能机制。方法　通过一个大样本从血清流行病学 (ELISA检测患者血清中抗CMV的IgG抗体 )和分子生物学 (PCR检测动脉粥样硬化病变中CMV特异性基因 )方面探讨巨细胞病毒感染和动脉粥样硬化的关系 ,并检测CMV感染对内皮细胞趋化因子表达的影响。结果　动脉粥样硬化组血清中CMV的阳性率显著高于非动脉粥样硬化组 (分别为 82 .2 %和 6 1.0 % ,P =0 .0 2 ) ;而且动脉粥样硬化斑块中HCMV基因出现率显著高于正常血管组织 (13 15和 2 7,P =0 .0 1) ;CMV感染还可上调内皮细胞ECV 30 4表达MCP 1。结论　CMV感染参与动脉粥样硬化的形成和发生。

关键词：巨细胞病毒感染动脉粥样硬化趋化因子内皮细胞

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DNA疫苗的研究进展

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中国处方药 2003年第2期2卷 22-26页

作者：熊思东徐薇复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心

DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗,其建立和发展极大程度上基于上世纪九十年代初新兴的一门新的免疫学理论和技术DNA免疫(DNA immunization)。由于DNA免疫免去了繁琐的蛋白纯化步骤和免疫性剂的辅助,更重要的是,基因在体内的表达及诱生免... 详细信息

DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗,其建立和发展极大程度上基于上世纪九十年代初新兴的一门新的免疫学理论和技术DNA免疫(DNA immunization)。由于DNA免疫免去了繁琐的蛋白纯化步骤和免疫性剂的辅助,更重要的是,基因在体内的表达及诱生免疫反应的过程,模拟了自然状态下机体感染外源病原生物表达抗原及诱导免疫的过程。因此,DNA免疫系统一经建立,便很快成为抗感染、抗肿瘤免疫等领域的研究热点。自1994年以来,美国FDA已陆续批准了HIV、流感病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、疟疾和肿瘤相关抗原等DNA疫苗进入临床试验。迄今,以DNA免疫技术为关键技术,已研制出不同预防性和治疗性DNA疫苗(DNA vaccines),发展为以DNA免疫为特征的第三代疫苗。

关键词： DNA疫苗研究进展作用机制核酸疫苗

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系统性红斑狼疮患者血清淀粉样P成分的测定及其意义

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中华风湿病学杂志 2003年第5期7卷 257-259页

作者：吴瑾熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心 200032

目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清淀粉样P成分 (SAP)含量并研究其与DNA及抗DNA抗体间的关系 ,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法　用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测SAP含量及抗dsDNA抗体 ,荧光分光光度法测定DNA水平... 详细信息

目的　检测系统性红斑狼疮 (SLE)患者血清淀粉样P成分 (SAP)含量并研究其与DNA及抗DNA抗体间的关系 ,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义。方法　用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测SAP含量及抗dsDNA抗体 ,荧光分光光度法测定DNA水平。结果　SLE患者血清SAP、DNA水平显著高于正常人 ,活动期患者明显高于缓解期 ;血清SAP含量与DNA浓度呈显著性正相关 ,但SLE患者血清SAP相对DNA水平下降 ;SAP/DNA比值与抗DNA抗体水平呈负相关。结论　SLE患者血清中SAP含量相对DNA不足 ,可能影响此类自身抗原物质的及时清除。

关键词：系统性红斑狼疮血清淀粉样P成分测定

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抗原识别中的危险模式

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生命的化学 2003年第1期23卷 3-5页

作者：张进平熊思东复旦大学上海医学院免疫学系、教育部分子医学重点实验室、上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

Matzinger提出的危险模式摆脱了自我与非我模式(SNS)和感染的非我模式(INS)的束缚,认为免疫应答的启动是由损伤的细胞发出的危险信号所决定的,且组织细胞决定了免疫应答效应的类型.并运用危险信号模式对肿瘤、移植、母胎耐受、自身免疫... 详细信息

Matzinger提出的危险模式摆脱了自我与非我模式(SNS)和感染的非我模式(INS)的束缚,认为免疫应答的启动是由损伤的细胞发出的危险信号所决定的,且组织细胞决定了免疫应答效应的类型.并运用危险信号模式对肿瘤、移植、母胎耐受、自身免疫性疾病、先天性淋巴细胞(NK 1T细胞、γδT细胞)的作用等作了新的解释.

关键词：危险模式抗原识别免疫耐受免疫调节

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趋化因子及其受体在连接天然免疫与获得性免疫中的作用

引用

生命的化学 2003年第3期23卷 215-217页

作者：徐焕宾王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系、教育部分子医学重点实验室、上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

病原侵入组织引起天然免疫中巨噬细胞(M)分泌趋化因子,趋化因子/趋化因子受体的表达与非成熟树突状细胞(DC)的迁移、成熟、归巢以及获得性免疫应答密切相关.整个过程涉及许多趋化因子和趋化因子受体的表达变化,正是这种表达变化的精... 详细信息

病原侵入组织引起天然免疫中巨噬细胞(M)分泌趋化因子,趋化因子/趋化因子受体的表达与非成熟树突状细胞(DC)的迁移、成熟、归巢以及获得性免疫应答密切相关.整个过程涉及许多趋化因子和趋化因子受体的表达变化,正是这种表达变化的精细调节启动了免疫细胞的定向迁移、归巢和游走,搭起天然免疫和获得性免疫的桥梁.本文综述了趋化因子和趋化因子受体在连接天然免疫和获得性免疫应答中的重要作用.

关键词：趋化因子和趋化因子受体树突状细胞迁移天然免疫获得性免疫

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