慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是肝纤维化、肝硬化及肝细胞癌的主要风险因素。尽管目前干扰素和核苷类似物等广泛应用于临床,但仍难以彻底清除乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),因此探究HBV感染的免疫机制,特别是宿主遗传...
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慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是肝纤维化、肝硬化及肝细胞癌的主要风险因素。尽管目前干扰素和核苷类似物等广泛应用于临床,但仍难以彻底清除乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),因此探究HBV感染的免疫机制,特别是宿主遗传背景的作用,对开发新治疗策略至关重要。本研究使用AAV8-rcccDNA小鼠模型,对比FVB/N×C57BL/6与DBA/2×C57BL/6两种遗传背景小鼠中HBV感染免疫反应的差异,探究了宿主遗传背景在HBV感染中的作用。结果显示,FVB/N×C57BL/6小鼠呈现免疫耐受状态,表现为持续的HBsAg表达和低HBsAb水平,而DBA/2×C57BL/6小鼠模拟了急性感染恢复状态,具体为HBsAg转阴、HBsAb阳性及病毒复制中低水平。本研究证实了在HBV感染治疗与研究中考虑宿主遗传背景差异的必要性,并指出适应性免疫系统调控在HBV治愈中的潜力,AAV8-rcccDNA小鼠模型的改进为模拟人类HBV感染免疫状态提供了有效的工具,有望助力HBV治疗策略的优化及研发。
RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比...
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RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比。但传统信号放大技术的背景难以消除,无法定量且分辨率低,是RNA-FISH技术应用的巨大障碍。本文基于第3代杂交链反应(hybridization chain reaction version 3.0,HCR v3.0),利用一对分裂式探针消除非特异杂交背景,并引发荧光信号放大反应,建立了针对肠道病毒A71(enterovirus-A71,EV-A71)RNA的敏感、特异的FISH检测方法,并将该技术与蛋白免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测结合,通过高分辨率激光共聚焦成像,成功地在单个细胞水平上检测了EV-A71感染细胞后病毒RNA与其聚合酶3D蛋白的分布变化和相互作用情况,并对细胞中病毒RNA和3D蛋白进行定量。发现相较于传统定量方法,如逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹,新一代RNA-FISH技术在单个细胞水平上病毒RNA和3D聚合酶的表达情况与群体细胞检测的结果在趋势上有明显差异。这说明,基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术,可以克服群体细胞数量增减掩盖病毒组分变化的缺点,从而真实反映病毒在单个细胞中的变化。
Ⅶ型分泌系统(type VII secretion system,T7SS)是唯一的仅存在于革兰氏阳性细菌中的分泌系统。T7SS在细菌与细菌、细菌与宿主、细菌与环境的相互作用中发挥着重要功能,与细菌的生长和致病性密切相关。T7SS的功能多样性与其所分泌的效...
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Ⅶ型分泌系统(type VII secretion system,T7SS)是唯一的仅存在于革兰氏阳性细菌中的分泌系统。T7SS在细菌与细菌、细菌与宿主、细菌与环境的相互作用中发挥着重要功能,与细菌的生长和致病性密切相关。T7SS的功能多样性与其所分泌的效应蛋白的多样性密切相关。因此,本文将围绕T7SS所分泌的效应蛋白展开讨论,对效应蛋白的结构和功能、分泌机制及其基因转录水平的调控方式等研究进行综述,以期为进一步研究细菌的T7SS提供新的思路。
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