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第18次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：袁正宏复旦大学上海医学院医学教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海市医学院路138号治道楼200032

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乙型肝炎病毒与宿主天然免疫系统相互作用的研究进展

乙型肝炎病毒与宿主天然免疫系统相互作用的研究进展

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：袁正宏复旦大学上海医学院医学教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海市医学院路138号治道楼200032

乙型肝炎病毒(HBV)感染可致慢性乙型肝炎,严重危害人民身体健康.天然免疫(Innate Immunity,又称为固有免疫)系统作为宿主防御、清除病原体的重要免疫机制,可通过模式识别受体识别病原体,进而通过信号转导促使一系列细胞因子的表达及相...

乙型肝炎病毒(HBV)感染可致慢性乙型肝炎,严重危害人民身体健康.天然免疫(Innate Immunity,又称为固有免疫)系统作为宿主防御、清除病原体的重要免疫机制,可通过模式识别受体识别病原体,进而通过信号转导促使一系列细胞因子的表达及相关防御机制的启动.近来研究表明,一方面宿主天然免疫反应可通过抑制HBV复制在清除和控制其感染方面发挥重要作用,而另一方面HBV进化出一些拮抗宿主天然免疫系统的策略以利于其建立及维持持续性感染.

关键词：

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疫苗犹豫及其引发的后果

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国际流行病学传染病学杂志 2019年第3期46卷 173-174页

作者：宋洁玉汪萱怡教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室暨生物医学研究院复旦大学上海医学院上海200032

疫苗犹豫与疫苗相伴而生。疫苗犹豫导致疫苗接种率下降,从而威胁疫苗所预防传染病的控制。虽然在我国尚未出现反疫苗运动,但存在不同程度的疫苗犹豫。因此,应进一步完善我国疫苗免疫体系,维系公众疫苗接种意愿,控制好我国疫苗可预防的... 详细信息

疫苗犹豫与疫苗相伴而生。疫苗犹豫导致疫苗接种率下降,从而威胁疫苗所预防传染病的控制。虽然在我国尚未出现反疫苗运动,但存在不同程度的疫苗犹豫。因此,应进一步完善我国疫苗免疫体系,维系公众疫苗接种意愿,控制好我国疫苗可预防的传染病。

关键词：疫苗反疫苗运动传染病控制

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诺如病毒:“完美的人类病原”

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微生物与感染 2015年第2期10卷 108-110页

作者：王丹甄珊珊汪萱怡复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院生物医学研究院上海200032 复旦大学上海医学院老年医学研究中心上海200032

诺如病毒是近来在我国北京、上海、浙江、广东等地导致病毒性胃肠炎暴发的病原体。本文对该病毒的生物学特征与流行病学进行简短综述,并对正在研发的疫苗作介绍。

关键词：诺如病毒病毒样颗粒疫苗

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基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术检测EV-A71 RNA及其与病毒3D聚合酶的相互作用

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微生物与感染 2023年第4期18卷 203-210页

作者：邢一凡傅美贤龙健儿复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比... 详细信息

RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比。但传统信号放大技术的背景难以消除,无法定量且分辨率低,是RNA-FISH技术应用的巨大障碍。本文基于第3代杂交链反应(hybridization chain reaction version 3.0,HCR v3.0),利用一对分裂式探针消除非特异杂交背景,并引发荧光信号放大反应,建立了针对肠道病毒A71(enterovirus-A71,EV-A71)RNA的敏感、特异的FISH检测方法,并将该技术与蛋白免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测结合,通过高分辨率激光共聚焦成像,成功地在单个细胞水平上检测了EV-A71感染细胞后病毒RNA与其聚合酶3D蛋白的分布变化和相互作用情况,并对细胞中病毒RNA和3D蛋白进行定量。发现相较于传统定量方法,如逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹,新一代RNA-FISH技术在单个细胞水平上病毒RNA和3D聚合酶的表达情况与群体细胞检测的结果在趋势上有明显差异。这说明,基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术,可以克服群体细胞数量增减掩盖病毒组分变化的缺点,从而真实反映病毒在单个细胞中的变化。

关键词：第3代杂交链反应 RNA原位杂交技术肠道病毒A71 3D聚合酶

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鼠肝炎病毒A59毒株感染性克隆的构建及应用

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微生物与感染 2022年第3期17卷 139-147页

作者：于尹冯飞马艳龙朱云凯叶荣张荣复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途... 详细信息

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途径。本研究通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)将MHV的原始毒株A59全长基因组分成6个片段进行扩增,分别克隆到质粒载体,经酶切、体外连接和转录获得全长基因组RNA,然后电转细胞并进行病毒扩增。结果显示,重组病毒rA59与原始毒株的复制特性相似,其为研究MHV的生物学特性提供了实验工具。为方便检测病毒的复制水平,在病毒基因组开放阅读框4(open reading frame 4,ORF4)内分别插入绿色荧光蛋白ZsGreen(Zoanthus *** fluorescent protein)和荧光素酶Nluc(NanoLuc luciferase)报告基因,获得rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒。结果显示,报告病毒所携带的报告基因并不影响病毒复制,可很好地反映病毒的复制特性。使用这两种病毒验证瑞德西韦(remdesivir)的抗病毒活性,分别检测药物处理后病毒的荧光亮度和荧光素酶活性。结果表明,rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒适用于高通量药物筛选,具有重要的应用前景。综上所述,本研究成功建立了MHV A59毒株六质粒反向遗传操作系统,为研究MHV的生物学特性和测试抗病毒药物等提供了有力的工具。

关键词：鼠肝炎病毒感染性克隆病毒拯救报告病毒

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城市生活饮用水中非结核分枝杆菌调查

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微生物与感染 2008年第4期3卷 215-218页

作者：陈超徐鹏李静武洁高谦梅建上海市疾病预防控制中心上海200336 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的调查上海市生活饮用水中非结核分枝杆菌的状况及主要菌种分布。方法应用过滤法收集细菌,并在改良罗氏培养基上培养;通过16SrRNA测序鉴定菌种。结果上海市生活饮用水中非结核分枝杆菌的检出率为16.7%,其中自来水厂原水、出厂水和居... 详细信息

目的调查上海市生活饮用水中非结核分枝杆菌的状况及主要菌种分布。方法应用过滤法收集细菌,并在改良罗氏培养基上培养;通过16SrRNA测序鉴定菌种。结果上海市生活饮用水中非结核分枝杆菌的检出率为16.7%,其中自来水厂原水、出厂水和居民生活饮用终端水的检出率分别为60%、25%和10.3%。分离鉴定的非结核分枝杆菌菌种为戈登分枝杆菌及偶发分枝杆菌,分别占90%及10%。结论在上海市居民生活饮用水系统中存在非结核分枝杆菌,因此,应当采取有效的控制方法以保护公众的健康。

关键词：生活饮用水供水系统非结核分枝杆菌分离

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类器官组织在感染性疾病研究中的应用

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微生物与感染 2021年第3期16卷 196-207页

作者：张舒心蔡启良朱彩霞复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委/医科院重点实验室上海200032

类器官(organoid)是体外3D培养组织干细胞所形成的多功能细胞团,具有自身增殖和多向分化的能力,在空间和结构上与来源器官组织的基因、结构和功能相似,可用于模拟体内组织细胞生长、分化及器官形成过程,在药物筛选与评价、生物医学材料... 详细信息

类器官(organoid)是体外3D培养组织干细胞所形成的多功能细胞团,具有自身增殖和多向分化的能力,在空间和结构上与来源器官组织的基因、结构和功能相似,可用于模拟体内组织细胞生长、分化及器官形成过程,在药物筛选与评价、生物医学材料及组织工程等方面具有重要的应用潜能。当前在感染性疾病研究方面,越来越多数据表明不同类器官组织可用于在体外模拟病原入侵和引发疾病过程。鉴于此,本文对类器官组织在病原感染相关疾病模型上的研究进展及其应用前景进行综述。

关键词：类器官感染性疾病疾病模型应用

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一种有效敲低原代B细胞中目的基因表达以快速鉴定基因功能方法的建立

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微生物与感染 2020年第4期15卷 220-227页

作者：刘佳万思敏白露李建华复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分... 详细信息

B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分化。本研究首先将Drosha酶特异性小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与反转录病毒包装质粒共转染至病毒包装细胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培养基中加入抗CD180抗体,构建了原代B细胞的体外培养体系,使B细胞在保持自身特性的同时具有较强的增殖能力;再次,增加离心感染(spin infection)次数,进一步提高了B细胞的转导效率;另外,通过小鼠预先感染,可收获更多增殖、分化的B细胞以供表型分析。通过上述改进措施,成功敲除了B细胞功能基因Bcl6的表达,验证了其抗凋亡功能。该方法的建立为研究病毒急、慢性感染中B细胞的增殖、分化与缺陷机制奠定了良好基础。

关键词： B细胞基因功能反转录病毒短发夹核糖核酸转导

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抗乙型肝炎病毒S抗原全人单克隆抗体的制备和表位探究

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中国免疫学杂志 2018年第7期34卷 1029-1033页

作者：佀传亚潘少坤凌志洋伊春艳邓志瑞谢幼华孙兵上海大学生命科学学院上海200444 复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 中国科学院上海巴斯德研究所上海200031 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

目的:针对乙型肝炎病毒S蛋白,制备全人单克隆抗体,对其亲和力、中和病毒活性及抗体所结合的抗原表位进行研究。所制备的全人抗体可应用于乙肝病毒的暴露后预防,为阻断母婴传播提供治疗手段。方法:通过流式分选和单细胞RT-PCR技术获得单... 详细信息

目的:针对乙型肝炎病毒S蛋白,制备全人单克隆抗体,对其亲和力、中和病毒活性及抗体所结合的抗原表位进行研究。所制备的全人抗体可应用于乙肝病毒的暴露后预防,为阻断母婴传播提供治疗手段。方法:通过流式分选和单细胞RT-PCR技术获得单克隆抗体;利用间接ELISA法检测抗体结合活性,进行表位分析;Hep G2-NTCP细胞用于病毒感染,KHB乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒检测细胞上清中HBe Ag的指标。结果:获得三株具有中和活性,可以结合三种乙肝病毒亚型S蛋白的抗体,其中1F2、2A1两株抗体的结合依赖于抗原蛋白的天然构象,2H2抗体的结合依赖于连续的氨基酸序列;1F2、2H2抗体结合的位置位于S蛋白胞外区第一个免疫环状区域。结论:利用单细胞RT-PCR技术成功制备了针对乙肝病毒S蛋白的抗体,其具有中和作用。抗原表位位于S蛋白胞外区的第一个免疫环状区域内。

关键词：乙型肝炎全人单克隆抗体单细胞RT-PCR 中和活性抗体表位

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