检索结果-内蒙古大学图书馆

中华传染病杂志 2014年第5期32卷 257-262页

作者：李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明上海市公共卫生临床中心肝病科 201508 复旦大学上海医学院教育部、卫生部医学分子病毒学重点实验室复旦大学附属华山医院感染科

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）... 详细信息

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

关键词：肝炎病毒,乙型 RNA指导的DNA聚合酶抗药性表型

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活细胞成像技术实时追踪荧光蛋白标记的分枝杆菌的胞内增殖

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复旦学报（医学版） 2014年第3期41卷 384-388页

作者：乔可王晴岚李紫煜牛辰复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032 北京东胜创新生物科技有限公司分子影像部北京100085

目的利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨... 详细信息

目的利用绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记和活细胞显微成像的方法,实时追踪分枝杆菌在巨噬细胞内的增殖过程。方法用经GFP标记的野生型海分枝杆菌（Mycobacterium marinum,Mm）分别侵染未激活和γ-干扰素激活的巨噬细胞,使用活细胞显微成像系统连续记录胞内分枝杆菌的增殖动态,同时优化不同细胞接种浓度和感染复数（multiplicity of infection,MOI）对胞内菌增殖动态的追踪效果。结果使用GFP标记和活细胞成像的方法可以实时追踪胞内分枝杆菌的增殖过程和形态学变化。γ干扰素对Mm在巨噬细胞中的增殖有抑制作用。当接种巨噬细胞浓度为1×105/孔,MOI为1时,可直观清晰地分析实时追踪图像中胞内菌的增殖过程。结论通过活细胞成像技术分析荧光蛋白标记的分枝杆菌,可实时追踪巨噬细胞内分枝杆菌增殖过程和形态学变化,是一种体外分析胞内分枝杆菌增殖的理想方法,可应用于其他相关病原菌和宿主相互作用及影响因素的研究。

关键词：海分枝杆菌(Mm) 巨噬细胞活细胞成像细菌增殖感染复数(MOI)

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异质性耐药对结核分枝杆菌表型和基因型耐药检测结果的影响

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中华结核和呼吸杂志 2014年第4期37卷 260-265页

作者：高旭李静柳清云沈鑫梅建高谦复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室 200032 上海市疾病预防控制中心结核病防治科

目的研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,... 详细信息

目的研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,分析经基因测序未检测到耐药突变的菌株中是否存在异质性耐药现象.结果基因测序报告显示,80株氧氟沙星耐药菌株中有15株未发现已知gyrA或gyrB耐药决定区的基因突变.测序图谱及分子克隆和探针熔解曲线法分析结果表明,其中14株菌株含有已知gyrA耐药突变,即存在异质性耐药现象.纳入异质性耐药的菌株后,基因型与表型耐药检测的符合率从81.3％（65/80）提高到98.8％（79/80）.结论异质性耐药是导致表型和基因型耐药检测结果不符的重要原因.为排除异质性耐药对耐药基因检测的影响,提高基因型与表型耐药检测结果的一致性,需要开发应用更敏感的基因型耐药检测技术,以提高耐药结核病快速检测水平.

关键词：分枝杆菌结核遗传异质性耐药快速检测

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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统（CRISPR／Cas）研究近况

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第10期34卷 798-802页

作者：王蕾马丽俐孙桂芹李蒙策力木格陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室 200032 浙江中医药大学附属第一医院杭州340006

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究... 详细信息

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质，如噬菌体和接合质粒，并推论CRISPR／Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA［3-5］。2007年，来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证；研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系，证明了CRISPR／Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统［6］。 Marraffini和Sontheimer［7］证实CRISPR／Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。最近基于CRISPR／Cas作用机制的研究，发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用［8］。

关键词： Cas系统回文序列蛋白系统成簇 DNA重复序列大肠杆菌K12 Ⅱ型细菌染色

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从DNA疫苗到耐受疫苗:全新的适应症和抑炎前景

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生命的化学 2014年第1期34卷 23-28页

作者：耿爽钟一维王宾复旦大学上海医学院教育部和卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

DNA疫苗技术从1990年代发现到至今,已经创造成功了4个临床兽用疫苗或产品,并仍然有数十个产品正在临床验证的不同阶段。通过不断提高DNA质粒进入体细胞的效率,DNA疫苗将具有更强的免疫应答效率,从而使得DNA疫苗走向更多和更广泛的临床... 详细信息

DNA疫苗技术从1990年代发现到至今,已经创造成功了4个临床兽用疫苗或产品,并仍然有数十个产品正在临床验证的不同阶段。通过不断提高DNA质粒进入体细胞的效率,DNA疫苗将具有更强的免疫应答效率,从而使得DNA疫苗走向更多和更广泛的临床应用。DNA疫苗不仅可以增强机体免疫系统的应答反应,利用其与蛋白质疫苗共免疫的方式也可以产生特异性的免疫耐受反应用于抑制免疫反应。基于DNA疫苗的诱导免疫耐受的疫苗技术开辟了全新的过敏性疾病和自主免疫疾病的干预领域,具有重要的临床潜力和应用前景。

关键词： DNA疫苗耐受疫苗共免疫佐剂过敏性疾病自主免疫疾病

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以HA2为基础的流感病毒候选疫苗同时与H5N1、H1N1和H3N2亚型毒株产生交叉反应

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中山大学学报（医学科学版） 2014年第3期35卷 321-328页

作者：魏美丽陈燕霞王宇徐俊熊为亮姜世勃潘春根中山大学中山医学院人类病毒学研究所//教育部热带病防治研究重点实验室广东广州510080 中山大学药学院药物分子设计研究中心广东广州510006 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答。【方法】我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004(H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30... 详细信息

【目的】探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答。【方法】我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004(H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30)和一个连在碳端的三聚体基序(foldon,Fd)组成。原核表达该蛋白,圆二色谱和Western Blot验证IR-30-Fd的室间结构之后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,并同时免疫IR30多肽为对照,制备血清抗体。然后应用ELISA和Western Blot方法检测抗体的滴度,应用细胞ELISA和Western Blot方法检测抗体与不同的IAV菌株HA2蛋白的交叉反应性。【结果】IR30-Fd能够形成具有α螺旋的三聚体空间结构。用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔后获得了高效价的抗IR30的特异性抗体。鼠抗IR30-Fd抗体能与H3N2和H1N1的HA蛋白反应而鼠抗IR30抗体不能。鼠抗IR30-Fd抗体稀释6 400倍、兔抗IR30-Fd抗体稀释8.2×105倍均可以与H5N1的HA蛋白反应。细胞ELISA表明兔抗IR30-Fd抗体与天然状态下的H5N1和H3N2的HA蛋白的结合亲和力高于兔抗IR30抗体。【结论】本研究结果表明IR30-Fd蛋白能够模拟H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚体结构,并且能够诱导产生针对H5N1 H1N1和H3N2亚型HA蛋白的广谱交叉反应抗体,为研制通用的流感病毒疫苗提供了结构基础。

关键词：甲型流感病毒通用疫苗 HA2 三聚体

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表皮葡萄球菌色氨酰-tRNA合成酶抑制剂W-23的抗菌活性研究

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中国科技论文在线精品论文 2014年第23期7卷 2362-2366页

作者：吴旸毛嘉琳瞿涤复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的:检测色氨酰-tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,WRS)抑制剂W-23对葡萄球菌的抗菌活性.方法:采用肉汤稀释法检测W-23对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并检... 详细信息

目的:检测色氨酰-tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,WRS)抑制剂W-23对葡萄球菌的抗菌活性.方法:采用肉汤稀释法检测W-23对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并检测其与氨苄青霉素或氯霉素联用对表皮葡萄球菌的联合抗菌效果.结果:化合物W-23对葡萄球菌属的MIC为2～4 mg/L,抗菌类型属于抑菌剂,与氨苄青霉素联用对耐甲氧西林表皮葡萄球菌具有协同抗菌作用.结论:W-23对葡萄球菌抗菌活性较强,具有潜在应用价值.

关键词：医学微生物葡萄球菌色氨酰-tRNA合成酶抑制剂W-23

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导读与评论

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微生物与感染 2015年第3期10卷 133-133页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿刊登了由廖万清院士团队撰写的人类免疫缺陷病毒患者真菌的机会感染。真菌机会感染也常见于其他终末期患者，文中介绍的多种真菌感染值得临床医师参阅。本期论著在病毒方面有3篇，均对RNA病毒的致病机制进行了研究。通过用... 详细信息

本期特约专稿刊登了由廖万清院士团队撰写的人类免疫缺陷病毒患者真菌的机会感染。真菌机会感染也常见于其他终末期患者，文中介绍的多种真菌感染值得临床医师参阅。本期论著在病毒方面有3篇，均对RNA病毒的致病机制进行了研究。通过用柯萨奇病毒A16感染猴体，发现病毒只在部分CDl4＋细胞中有增殖表现；利用树突细胞研究，发现感染后12～36h病毒在其中增殖。这一现象是否在患者中也出现？

关键词：人类免疫缺陷病毒真菌感染评论导读树突细胞 RNA病毒柯萨奇病毒致病机制

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导读与评议(2015年第4期)

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微生物与感染 2015年第4期10卷 199-199页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

根据本刊基础研究与临床医学、预防医学、实验诊断医学密切结合的特点，本期特别邀请了各路专家对中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome，MERS）病毒学、临床表现和治疗原则、

关键词：导读临床医学呼吸综合征基础研究预防医学实验诊断 East 治疗原则

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导读与评议(2015年第6期)

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微生物与感染 2015年第6期10卷 329-329页

作者：闻玉梅复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

本期特约专稿均为中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome,MERS）方面的内容。一篇是有关MERS的流行病学及防控;另一篇是针对MERS的全人源单克隆抗体的研究进展,介绍了有关人源单克隆抗体的制备与应用。虽然MERS似乎主要局... 详细信息

本期特约专稿均为中东呼吸综合征（Middle East respiratory syndrome,MERS）方面的内容。一篇是有关MERS的流行病学及防控;另一篇是针对MERS的全人源单克隆抗体的研究进展,介绍了有关人源单克隆抗体的制备与应用。虽然MERS似乎主要局限在中东地区,但鉴于反恐的需要、一带一路建设以及我国有不少人员在中东从事多项工作,对MERS的了解与警惕不可懈怠。

关键词：人源单克隆抗体中东地区路建设特约专稿乙型肝炎病毒 Middle 肠道病毒医学微生物学非溶血性链球菌感染病学

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