检索结果-内蒙古大学图书馆

中国现代医学杂志 2007年第3期17卷 261-263,268页

作者：龙慧马燕琳龙志高郭吉红王邵闯夏昆复旦大学上海医学院药理研究中心上海200032 中南大学湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室湖南长沙410078 卫生部肝胆肠外科研究中心湖南长沙410078

目的探讨脐血库脐血分离、保存方法及造血干祖细胞的体外培养条件。方法采用建立在密度梯度离心基础上的HES分离法对脐血进行有核细胞分离、冻存及粒巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)培养。结果离心管收集分离和四联袋采集分离的方法均可获... 详细信息

目的探讨脐血库脐血分离、保存方法及造血干祖细胞的体外培养条件。方法采用建立在密度梯度离心基础上的HES分离法对脐血进行有核细胞分离、冻存及粒巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)培养。结果离心管收集分离和四联袋采集分离的方法均可获得较高的单个核细胞量,但四联袋采集分离在回收率和浓缩程度上更为优越,且粒巨系造血祖细胞(CFU-GM)含量丰富,10%DMSO冻存液保存复苏后仍可获得较高活率和CFU-GM。结论我们建立的HES分离结合密度梯度离心分离脐血造血干祖细胞以及脐血长期冻存的方法为广泛、大规模地建立脐血库提供了基础。

关键词：脐血造血干祖细胞分离保存培养

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α-硫辛酸对缺氧应激肝癌细胞线粒体呼吸率和产能代谢的影响

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生物物理学报 2007年第6期23卷 436-442页

作者：黄勇超施冬云刘珊林刘志昕俞培忠沈新南中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室海口571101 复旦大学上海医学院自由基调控与应用研究中心上海200032

通过实验阐明抗氧化剂α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,α-LA)对肝癌细胞内活性氧具清除作用,并发现其对肝癌细胞和正常肝细胞增殖有不同作用影响。在缺氧条件下,研究使用抗氧化剂干预对肝癌细胞和正常肝细胞缺氧耐受性、线粒体活性和产能... 详细信息

通过实验阐明抗氧化剂α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,α-LA)对肝癌细胞内活性氧具清除作用,并发现其对肝癌细胞和正常肝细胞增殖有不同作用影响。在缺氧条件下,研究使用抗氧化剂干预对肝癌细胞和正常肝细胞缺氧耐受性、线粒体活性和产能代谢的影响及差异。以SMMC-7721人肝癌细胞和L02正常肝细胞作为研究对象,在α-硫辛酸干预条件下检测细胞生长曲线和细胞内ROS;分别在单纯缺氧及加α-硫辛酸缺氧条件下,检测细胞存活率、细胞内ROS、细胞耗氧率、细胞生成ATP和癌基因c-myc mRNA的表达。实验结果说明:缺氧情况下,肝癌细胞通过增加糖酵解途径的产能方式诱导ATP能量代偿能力提高。使用抗氧化剂α-硫辛酸干预清除细胞内过剩ROS,能降低肝癌细胞线粒体呼吸率,并能通过下调c-myc表达抑制肝癌细胞的增殖及降低其缺氧耐受性。

关键词： α-硫辛酸缺氧糖酵解肝癌活性氧

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帕金森病与内质网应激

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国际神经病学神经外科学杂志 2007年第1期34卷 86-90页

作者：王虎蔡定芳复旦大学中山医院复旦大学上海医学院中西医结合研究所神经病学研究室上海市200032

在帕金森病(PD)的病理生理机制中,内质网应激作为新的关注点已经进入人们的视野。内质网应激反应中的未叠蛋白反应可以将细胞内的未叠和错叠蛋白进行正确折叠,另一方面,过度的应激会导致细胞的凋亡,而帕金森病中标志性的α-synuclein这... 详细信息

在帕金森病(PD)的病理生理机制中,内质网应激作为新的关注点已经进入人们的视野。内质网应激反应中的未叠蛋白反应可以将细胞内的未叠和错叠蛋白进行正确折叠,另一方面,过度的应激会导致细胞的凋亡,而帕金森病中标志性的α-synuclein这一异常折叠蛋白的出现以及黑质多巴胺能神经元的减少也为内质网应激在帕金森病发病中的作用提供了可能的依据,目前的研究也表明在细胞和动物模型中,内质网应激确实参与了帕金森病的病理生理过程,因而针对内质网应激采取相应的治疗措施为帕金森病的治疗提供了一个新的方向。

关键词：帕金森病内质网应激病理生理机制细胞凋亡多巴胺

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人猿超科较旧大陆猴Fractalkine基因存在30bp缺失突变

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自然科学进展 2007年第3期17卷 401-404页

作者：洪晓武张亚平储以微邵先安蒋正刚熊思东复旦大学上海医学院免疫学系免疫生物学研究所上海200032 中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放实验室昆明650223

观察Fractalkine从旧大陆猴向人猿超科进化过程中基因的进化规律,为研究Fractalkine基因的进化和免疫学功能演变关系提供理论和实验基础,先用简并引物PCR(Degenerated PCR)法分别扩增Fractalkine的3个外显子,其产物经琼脂糖凝胶回收、... 详细信息

观察Fractalkine从旧大陆猴向人猿超科进化过程中基因的进化规律,为研究Fractalkine基因的进化和免疫学功能演变关系提供理论和实验基础,先用简并引物PCR(Degenerated PCR)法分别扩增Fractalkine的3个外显子,其产物经琼脂糖凝胶回收、纯化后测序,然后用BioEdit,Clustal及DNAStar软件拼接、分析各物种间基因序列的差异.发现人猿超科较旧大陆猴Fracta-lkine基因除了有散在的点突变外,在其粘蛋白样区还有一明显的30个核苷酸的缺失突变,并对突变的可能机制及其对Fractalkine可能的功能影响进行讨论.

关键词： Fractalkine 人猿超科旧大陆猴缺失突变

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钙整合素结合蛋白CIB真核表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

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第三军医大学学报 2007年第3期29卷 216-218页

作者：惠玲王晓辉袁碧波杨金开吕同德惠斌蔡文琴兰州军区兰州总医院医学实验中心兰州730050 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 复旦大学上海医学院药理研究中心上海200032

目的构建钙整合素结合蛋白(calcium-andintegrin-bindingprotein,CIB)的真核表达载体,了解它在真核细胞中的表达及定位。方法从人脑组织分离总RNA,采用RT-PCR获得CIB开放读框序列,克隆至真核表达载体pCMV-myc,构建表达带myc表达标签的... 详细信息

目的构建钙整合素结合蛋白(calcium-andintegrin-bindingprotein,CIB)的真核表达载体,了解它在真核细胞中的表达及定位。方法从人脑组织分离总RNA,采用RT-PCR获得CIB开放读框序列,克隆至真核表达载体pCMV-myc,构建表达带myc表达标签的真核表达载体pCMV-myc-CIB,将其转染至NIH3T3细胞中,免疫组化鉴定其在细胞中的表达及定位。结果序列分析表明克隆的CIB序列与GeneBank报道的序列一致,脂质体转染入NIH3T3细胞中,用myc抗体检测到目的蛋白myc-CIB的表达。结论pCMV-myc-CIB表达载体构建成功,并在真核细胞中得到了正确表达,CIB蛋白主要定位于细胞质中。

关键词： CIB 基因克隆真核表达

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MyD88抑制乙型肝炎病毒复制依赖活化NF-κB信号通路

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微生物与感染 2007年第2期2卷 73-77,106页

作者：林珊珊邬敏徐杨熊炜张小楠易志刚袁正宏复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市公共卫生中心科研中心复旦大学生物医学研究院

目的研究髓样细胞分化蛋白(MyD88)抗乙型肝炎病毒(HBV)效应的作用机制。方法构建MyD88的截短突变体,获得核因子kappa B(NF-κB)超抑制剂IkBa-SR或者NF-κB信号通路激活剂IKKα/IKKβ的表达质粒,分别与HBV复制型质粒瞬时转染Huh7细胞,检... 详细信息

目的研究髓样细胞分化蛋白(MyD88)抗乙型肝炎病毒(HBV)效应的作用机制。方法构建MyD88的截短突变体,获得核因子kappa B(NF-κB)超抑制剂IkBa-SR或者NF-κB信号通路激活剂IKKα/IKKβ的表达质粒,分别与HBV复制型质粒瞬时转染Huh7细胞,检测细胞上清液中HBeAg,HBsAg的表达以及胞质中HBV复制中间体DNA的含量,并以NF-κB依赖的荧光素酶报道系统检测它们活化NF-κB的程度。结果MyD88全长蛋白和2个截短突变体M(1-151)、M(151-296)活化NF-κB的程度与其抑制HBV蛋白以及复制中间体DNA合成的能力相一致。与空载相比,表达NF-κB信号通路激活剂IKKα/IKKβ的质粒共同瞬转细胞后,转染MyD88和HBV表达质粒的细胞中NF-κB的通路明显活化,同时HBV core蛋白的合成显著降低;而NF-κB的超抑制剂IκBα-SR共同瞬转的细胞中core蛋白的表达量显著增加,检测细胞培养上清液中HBeAg和HBsAg及胞质中HBV复制中间体DNA的合成,得到相似结果。结论NF-κB信号通路的活化在MyD88抑制HBV复制中发挥了关键作用。

关键词：乙型肝炎病毒髓样细胞分化蛋白抗病毒活性核因子kappa B

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分子佐剂C3d3通过促进脾脏B细胞高表达趋化因子受体CXCR4增强hCGβ基因疫苗体液免疫效应

分子佐剂C3d3通过促进脾脏B细胞高表达趋化因子受体CXCR4增强hCG...

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第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会

作者：贺晓菊李大金姚晓英袁敏敏复旦大学上海医学院附属妇产科医院暨妇产科研究所生殖免疫研究室

目的:探讨分子佐剂 C3d3与 hCGβ融合在基因免疫中增强抗 hCGβ体液免疫效应的机制。方法:分别用质粒 pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和 pCMV4免疫 BALB/c小鼠,间接 ELISA 法检测免疫小鼠外周血 IgG/IgA 类抗 hCG 抗体水平;ELISPOT 分... 详细信息

目的:探讨分子佐剂 C3d3与 hCGβ融合在基因免疫中增强抗 hCGβ体液免疫效应的机制。方法:分别用质粒 pCMV4-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ和 pCMV4免疫 BALB/c小鼠,间接 ELISA 法检测免疫小鼠外周血 IgG/IgA 类抗 hCG 抗体水平;ELISPOT 分析免疫鼠脾脏组织 ASCs IgG/IgA 抗体分泌水平;RT-PCR 筛查免疫鼠脾脏 B 细胞趋化因子受体表达,RT-PCR 和 FCM 分析 CXCR4 的表达水平;RT-PCR 和 ELISA 检测脾脏组织 CXCL12的表达水平。结果:pCMV4-hCGβ-C3d3免疫组外周血 IgG 类抗 hCG 抗体水平明显高于 pCMV4-hCGβ免疫组(P<0.05);而 IgA 类抗 hCG 抗体水平在两组间无明显差异。pCMV4-hCGβ-C3d3免疫组脾脏组织 ASCs 分泌 IgG 类抗体水平明显高于 pCMV4-hCGβ免疫组(P<0.05);两组间 ASCs 分泌 IgA 类抗体无明显差异.经 pCMV4-hCGβ、 pCMV4-hCGβ-C3d3免疫鼠脾脏 B 细胞 CXCR4表达明显高于对照组;且 pCMV4-hCGβ-C3d3免疫组明显高于 pCMV4-hCGβ免疫组(P<0.05).pCMV4-hCGβ-C3d3和 pCMV4-hCGβ组脾脏组织 CXCL12 表达均显著高于对照组。结论:分子佐剂 C3d3与 hCGβ基因融合,通过基因免疫小鼠后能够显著升调节脾脏 B 细胞 CXCR4表达水平,从而增强抗 hCGβ基因疫苗的体液免疫效应.

关键词： CXCR4/CXCL12 hCGβ基因免疫分子佐剂 C3d3

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汉坦病毒S片段标准品构建及在荧光定量PCR检测中的应用

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环境与职业医学 2007年第2期24卷 147-149页

作者：周欣李燕婷瞿涤复旦大学上海医学院生物医学研究院&病原微生物研究所医学分子病毒学教育部和卫生部重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心上海200336

[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,并建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR方法检测汉坦病毒核酸。[方法]对76-118株的S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后... 详细信息

[目的]构建汉坦病毒S片段标准品,并建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量PCR方法检测汉坦病毒核酸。[方法]对76-118株的S片段基因进行序列分析,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针,逆转录为cDNA,经PCR扩增,产物纯化后与PMD 18-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5a,筛选得到标准品的质粒,提取质粒并进行定量。在S片段的保守区设计引物和TaqMan探针,对real-time PCR条件进行优化,并提取急性期发病病人总RNA,逆转录为cDNA,与标准品同时检测。[结果]该方法制备的质粒标准品应用于汉坦病毒早期检测,能对检测样品进行质量控制;应用荧光定量PCR检测急性期病人病毒含量,具有高特异性和灵敏度,从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,重复性好,并能对病毒准确定量。[结论]汉坦病毒荧光定量标准品和TaqMan荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,适用于汉坦病毒的早期检测;汉坦病毒S片段编码的核衣壳蛋白(NP)是流行性出血热早期诊断的理想抗原。

关键词：荧光定量PcR 标准品 TaqMan针 S片段汉坦病毒

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人猿超科和旧大陆猴7种高等灵长类FKN全基因序列的测定及进化分析

人猿超科和旧大陆猴7种高等灵长类FKN全基因序列的测定及进化分析

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遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：洪晓武张亚平储以微高海峰蒋正刚熊思东复旦大学上海医学院免疫学系、免疫生物学研究所中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放实验室复旦大学上海医学院免疫学系、免疫生物学研究所复旦大学上海医学院免疫学系、免疫生物学研究所复旦大学上海医学院免疫学系、免疫生物学研究所复旦大学上海医学院免疫学系、免疫生物学研究所

测定人猿超科(人、黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩和长臂猿)和旧大陆猴(猕猴和叶猴)7种高等灵长类 FKN 全基因序列,探讨其系统进化分析。用简并引物 PCR(Degenerated PCR)法分别扩增 FKN 的3个外显子,其产物经琼脂糖凝胶回收、纯化后测序,然... 详细信息

测定人猿超科(人、黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩和长臂猿)和旧大陆猴(猕猴和叶猴)7种高等灵长类 FKN 全基因序列,探讨其系统进化分析。用简并引物 PCR(Degenerated PCR)法分别扩增 FKN 的3个外显子,其产物经琼脂糖凝胶回收、纯化后测序,然后用 BioEdit 软件剪切拼接 FKN 基因全序列,用 DNAStar 比对后比较基因和氮基酸序列同源性, Mega 软件分析 FKN 基因进化树,应用 Datamonkey 分析 FKN 的负选择位点。序列分析发现人猿超科较旧大陆猴FKN

关键词：人猿超科旧大陆猴灵长类全基因序列 FKN

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道亦道,非故道——试论固有免疫中的抗原和免疫原的定义

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现代免疫学 2007年第6期27卷 441-443页

作者：熊思东周光炎金伯泉龚非力于永利复旦大学上海医学院免疫学系上海200032 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海200025 中国人民解放军第四军医大学西安710032 华中科技大学同济医学院免疫学研究所武汉430030 吉林大学白求恩医学院免疫学教研室长春130021

抗原(antigen)是免疫应答的启动者和参与者,是免疫学教学中必须清晰定义和讲解的重要概念。传统抗原的定义较完整地反映了抗原的内在特性及其在免疫应答(主要是特异性免疫应答)中的作用和地位。但是,近年对固有免疫应答认识的加深,使得... 详细信息

抗原(antigen)是免疫应答的启动者和参与者,是免疫学教学中必须清晰定义和讲解的重要概念。传统抗原的定义较完整地反映了抗原的内在特性及其在免疫应答(主要是特异性免疫应答)中的作用和地位。但是,近年对固有免疫应答认识的加深,使得人们对抗原的内涵、适用性等产生了困惑。因此,有必要重新讨论和定义免疫应答中的抗原和免疫原。[第一段]

关键词：免疫原抗原固有免疫特异性免疫应答免疫学教学适用性

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