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中华结核和呼吸杂志 2006年第9期29卷 612-616页

作者：揭志军金美玲蔡映云袁正宏胡芸文徐扬任涛杨振华上海第二医科大学附属新华医院呼吸科复旦大学附属中山医院呼吸疾病研究所上海200032 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）... 详细信息

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）：分别于第1、14天小鼠腹腔注射1ml致敏液[卵蛋白（OVA，10μg）＋氢氧化铝凝胶（100μg）]；从第21天开始雾化吸入2．5％OVA溶液，每次30min，每周3次，连续8周。（2）CpG—ODN干预组（B组）：在OVA致敏的同时给予浓度为60μg／ml的CpG—ODN腹腔注射1ml共2次，以后每2周腹腔注射1次共4次。（3）GpC—ODN对照组（C组）：将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶（GpC，剂量及用法同CpG-ODN）作为对照。（4）生理盐水（NS）对照组（D组）：给予NS进行致敏（每次1ml腹腔注射）和激发（用NS雾化吸入）。在末次激发24h后所有小鼠取血测嗜酸粒细胞（EOS）数和血清IgE；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）做细胞分类计数，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测上清液中自细胞介素13（IL-13）和转化生长因子β1（TGF—β1）的浓度。取左肺组织行苏木精-伊红（HE）染色和Masson三色染色，用抗α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）抗体和抗TGF—β1抗体行免疫组化染色。结果 A组外周血EOS计数为（89±10）×10^4／ml、血清IgE为（279±53）ng／ml，BALF中EOS计数和分类分别为（6．30±1．30）×10^5／ml、0．181±0．030，A组IL-13浓度为（4015±361）pg／ml、TGF—β1浓度为（356±64）pg／ml，以上数值与D组比较差异有统计学意义（t值分别为24．0、15．7、14．7、18．4、12．0和18．9，P均〈0．01）；A组Masson三色染色、α-SMA、TGF-β1阳性染色面积百分比[分别为（29．7±4．2）％、（45±7）％、（34±4）％]与D组比较差异也有统计学意义（t值分别为18．0、15．6和17．9，P均〈0．01）。应用CpG-ODN干预后（B组）的Masson三色染色、α—SMA、TGF—β1阳性染色面积百分比[分别为（13．8±3．2）％、（25±3）％、（18±4）％]与A组比较差异也有统计学意义（t值分别为9．5、8．9、9．8，P均〈0．05）。结论应用CpG-ODN干预慢性哮喘模型，不仅能抑制Th2细胞反应和EOS肺浸润，还能抑制气道重塑的发生和发展，它可能是通过抑制TGF—β1、IL-13等因子而抑制气道重塑的。

关键词：哮喘气道重塑炎症小鼠 CpG-寡脱氧核苷酸

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ANGPTL4基因及缺失突变体对肝癌细胞生长的影响

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肿瘤 2006年第3期26卷 219-223页

作者：王春艳李锦军张锋锐葛超万大方顾健人复旦大学上海医学院上海200032 上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的:探讨ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响。方法:构建ANGPTL4基因全长及其功能结构域缺失突变体的融合表达载体,即ANGPTL4-GFP-N1、ANGPTL4-del1-GFP-N1、ANGPTL4-del2-GFP-N1、ANGPTL4-del3-GFP-N1,脂质体法将EGFP-N1空载体、ANGPTL4基因及其缺失突变体分别转染肝癌细胞SMMC-7721,G418筛选,建立稳定细胞系,用MTT试验法、细胞集落形成试验检测细胞体外生长活性和增殖能力;流式细胞仪检测ANGPTL4基因对细胞凋亡的影响;裸鼠移植瘤试验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果:ANGPTL4基因及其缺失突变体体外对肝癌细胞SMMC-7721的生长、集落形成具有明显的抑制作用(均为P<0.01);ANGPTL4全长基因及其缺失突变体ANGPTL4-del1-GFP-N1和ANGPTL4-del2-GFP-N1均对SMMC-7721细胞体内成瘤有明显抑制作用(均为P<0.01)。但转染ANGPTL4全长基因及其缺失突变体的SMMC-7721细胞的细胞凋亡发生率与转染空载体组相比没有明显差别(均为P>0.05)。结论:ANGPTL4基因及其缺失突变体对肝癌SMMC-7721细胞体内、外生长均具有明显抑制作用,但该抑制作用不是通过促进细胞凋亡实现的。

关键词：肝细胞癌 ANGPTL4 突变 SMMC-7721细胞

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成年国人大网膜多层螺旋CT应用解剖学研究

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解剖学报 2006年第6期37卷 694-697页

作者：金航闵鹏秋曾蒙苏王克强葛梅英陈楠复旦大学附属中山医院放射科上海市影像医学研究所上海200032 四川大学华西医院放射科成都610041 复旦大学上海医学院解剖学教研室上海200032 复旦大学附属上海市第五人民医院放射科上海200024

目的研究成人大网膜的多层螺旋CT解剖,探讨相关临床意义,为影像诊断和外科应用提供理论基础。方法利用成人腹部16层螺旋CT的横、冠、矢状断层及三维图像,观察大网膜的解剖分布、与周围脏器毗邻关系、血管的形态特点,探讨不同断面的显示... 详细信息

目的研究成人大网膜的多层螺旋CT解剖,探讨相关临床意义,为影像诊断和外科应用提供理论基础。方法利用成人腹部16层螺旋CT的横、冠、矢状断层及三维图像,观察大网膜的解剖分布、与周围脏器毗邻关系、血管的形态特点,探讨不同断面的显示优势以及临床应用。结果1.各种断面的优势:横断位在于观察大网膜的分布以及脂肪情况;冠状位在于观察血管情况;矢状位在于观察大网膜与邻近脏器的解剖毗邻关系。2.三维重建图像可满意地显示胃网膜静脉回流情况。3.胃结肠静脉(包括典型及非典型)出现率为67.2%;游离部具“游走性”:20.7%移位于上腹腔,17.2%偏右下腹腔分布;大网膜脂肪密度CT值为(-104.97±10.78)Hu,与皮下脂肪差别无统计学意义。结论胃网膜动静脉为寻找大网膜的标志,3种断面及三维图像相结合可充分显示大网膜的解剖学特征,并可为影像诊断、修复外科、胰腺及门静脉高压外科提供有价值的信息。

关键词：大网膜解剖多层螺旋CT 人

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Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析

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肿瘤 2006年第12期26卷 1109-1112页

作者：余艳军万晓桢于彬游海燕舒惠群姚根富覃文新复旦大学上海医学院上海200032 上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目曲：检测dickkopf（DKK1）在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果：肝癌组织检测RT—PCR... 详细信息

目曲：检测dickkopf（DKK1）在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果：肝癌组织检测RT—PCR，10／15肝癌中高表达；Real—time PCR方法检测，8／8肝癌中高表达；Western blot方法检测，5／8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达，蛋白质表达量波动于5～210ng／mL之间；10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论：DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系，提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。

关键词：癌,肝细胞基因,DKK1 肿瘤细胞,培养的

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抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

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肿瘤 2006年第11期26卷 979-983页

作者：蔡幸胡晶莹莫忠根朱明洁赵新泰复旦大学上海医学院上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学实验室上海200032 上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学实验室

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体（mAb），对其进行特性鉴定，为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，并用Ni—NTA树脂亲... 详细信息

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体（mAb），对其进行特性鉴定，为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，并用Ni—NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白I作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化，制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体，用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ImAb的杂交瘤细胞，分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3，所产抗体，均为IgGl亚型，轻链均为K链，亲和力为（2．3～3．03）×10^8L／mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs，为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。

关键词：钙磷脂结合蛋白类杂交瘤抗体,单克隆

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自杀性肿瘤疫苗对大鼠卵巢癌的治疗作用及其安全性研究

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中华肿瘤杂志 2006年第9期28卷 654-657页

作者：康玉徐丛剑刘惜时邵志敏欧周罗罗建明吴超群钟翠平顾健人复旦大学附属妇产科医院妇产科上海200011 复旦大学肿瘤医院乳腺癌研究所复旦大学遗传工程国家重点实验室复旦大学上海医学院组胚解剖系上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室

目的将自杀基因修饰的卵巢癌细胞与树突状细胞(DC)融合制备成自杀性肿瘤疫苗(FC／TK),观察FC／TK对大鼠卵巢癌的免疫治疗作用,并探讨对FC／TK进行体内灭活的可行性。方法以聚乙二醇法,用大鼠骨髓来源的DC与转导有自杀基因(HSV1-TK基因)... 详细信息

目的将自杀基因修饰的卵巢癌细胞与树突状细胞(DC)融合制备成自杀性肿瘤疫苗(FC／TK),观察FC／TK对大鼠卵巢癌的免疫治疗作用,并探讨对FC／TK进行体内灭活的可行性。方法以聚乙二醇法,用大鼠骨髓来源的DC与转导有自杀基因(HSV1-TK基因)的大鼠卵巢癌上皮细胞株NuTu-19细胞融合制备成FC／TK,在扫描电镜下观察FC／TK的形态;用3H-TdR渗入法,检测FC／TK刺激T细胞增殖的能力。在大鼠体内的免疫治疗实验中,以FC／TK治疗大鼠卵巢癌皮下瘤,观察肿瘤形成及肿瘤大小,分别设立经60Co照射的FC／TK组、未经自杀基因修饰的卵巢癌细胞与DC融合的疫苗(FC)组和PBS对照组。在体内灭活实验中,将FC／TK以荧光染料标记后进行大鼠体内示踪,腹腔注射羟甲基无环鸟苷(GCV)7 d后,采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d-UTP缺口末端标记技术,对大鼠淋巴组织的冰冻切片做原位细胞凋亡检测。结果FC／TK为多形性,扫描电镜下可见不规则的突起。与对照组相比,FC／TK能明显刺激T细胞增殖(P<0．01)。大鼠体内的免疫治疗实验结果显示,FC／TK组与FC组大鼠的成瘤时间晚于经60Co照射的FC／TK组(P<0．05),较PBS组明显延迟(P<0．01);接种NuTu-19细胞90 d后,FC／TK组大鼠的平均肿瘤体积较经60Co照射的FC／TK组和PBS组明显缩小(P<0．01),但FC／TK组与FC组之间,差异无统计学意义(P>0．01)。荧光显微镜下,经红色荧光标记的FC／TK出现在大鼠脾脏;进一步TUNEL染色显示,经GCV处理后,进入大鼠体内的FC／TK已发生凋亡。结论FC／TK对大鼠卵巢癌有免疫治疗作用,并可由自杀基因系统控制其在体内的存活。

关键词：树突状细胞自杀基因卵巢肿瘤肿瘤疫苗融合细胞

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丘脑底核电刺激对猴偏侧帕金森病纹状体神经递质的影响

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中华神经外科杂志 2006年第12期22卷 714-716页

作者：周晓平刘汉华顾靖曹依群李葆明胡小吾姜秀峰赵旭东第二军医大学长海医院神经外科上海200433 上海复旦大学上海医学院医学神经生物学国家重点实验室上海复旦大学神经生物学研究所

目的探讨应用微透析技术在慢性STN-DBS对纹状体细胞外液多巴胺及代谢产物的影响。方法选择已经成功安装脑深部刺激电极的偏侧PD猕猴模型2只,分别在打开脉冲发生器前、后的不同时间点取样(开机后8h、1周、1个月、2个月)。应用高效液相电... 详细信息

目的探讨应用微透析技术在慢性STN-DBS对纹状体细胞外液多巴胺及代谢产物的影响。方法选择已经成功安装脑深部刺激电极的偏侧PD猕猴模型2只,分别在打开脉冲发生器前、后的不同时间点取样(开机后8h、1周、1个月、2个月)。应用高效液相电化学方法检测开机前后的尾状核和壳核细胞外液的多巴胺(DA)及其代谢产物含量。结果电极侧壳核和尾状核的DA在开机后8h、1周、1个月、2个月相应地分别较各自开机前的DA含量增高了39%、91%、111%、114%和31%、91%、106%、102%(P＜0．05)。电极侧壳核和尾状核HVA/DA在开机后8h分别较各自开机前增高了186%和91%(P＜0．05),而开机后1周、1个月、2个月HVA/DA较开机前无明显变化(P＞0．05)。电极侧的多巴胺周转率在开机后的各时间点均显著低于非电极侧(P＜0．01)。结论STN- DBS可有效的改善猴偏侧PD模型的症状,应用微透析取样技术结合高效液相色谱测,定法发现在给予有效电刺激后可增加刺激侧纹状体细胞外液的多巴胺及其代谢产物含量。为STN-DBS治疗帕金森病提供理论依据。

关键词：丘脑底核脑深部电刺激帕金森病微透析多巴胺

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病理性近视的基因位点筛查

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眼科研究 2006年第4期24卷 429-432页

作者：于志强黄传新申宗侯黄薇胡诞宁褚仁远复旦大学附属眼耳鼻喉科医院上海200031 复旦大学上海医学院生化教研室上海200032 国家人类基因组南方研究中心上海201203 美国纽约医学院附属眼耳医院

目的通过基因组扫描和家系连锁分析,对已知病理性近视相关位点进行筛查。方法收集符合常染色体显性遗传的病理性近视家系,选取330对微卫星标记进行基因组扫描,在显性遗传模式、基因频率0·0133和外显率100%的条件下,进行二点连锁分... 详细信息

目的通过基因组扫描和家系连锁分析,对已知病理性近视相关位点进行筛查。方法收集符合常染色体显性遗传的病理性近视家系,选取330对微卫星标记进行基因组扫描,在显性遗传模式、基因频率0·0133和外显率100%的条件下,进行二点连锁分析和多点连锁分析。结果连锁分析在9个家系中均未发现连锁位点。第12号染色体上LODs最大0·773459,最小-8·121303,第18号染色体上LODs最大0·559933,最小-8·936928,排除了与已知病理性近视基因位点MYP2和MYP3连锁。结论我国病理性近视基因位点与国外报道不同,存在遗传异质性。病理性近视遗传模式可能不是单一的单基因常染色体显性遗传。

关键词：病理性近视连锁分析遗传异质性

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肝纤维化诱发过程中基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性动态观察

肝纤维化诱发过程中基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性动态观察

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：陈平圣翟为溶张锦生张月娥凌玉琴周筱梅东南大学基础医学院病理教研室复旦大学上海医学院病理教研室复旦大学上海医学院病理教研室复旦大学上海医学院病理教研室复旦大学上海医学院病理教研室上海市肿瘤研究所生化室

目的:研究MMP-2表达、活化在肝纤维化的演进过程中尤其是早期的变化规律。方法:Wistar雄性大鼠 20只,(150±10)g,SPF级;其中实验鼠15只,对照鼠5只。用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。于实验第1、 2、4、8、12周末,分别处死3只实验鼠和1... 详细信息

目的:研究MMP-2表达、活化在肝纤维化的演进过程中尤其是早期的变化规律。方法:Wistar雄性大鼠 20只,(150±10)g,SPF级;其中实验鼠15只,对照鼠5只。用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。于实验第1、 2、4、8、12周末,分别处死3只实验鼠和1只对照鼠。用免疫组化法测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 MMP-2、TIMP-2蛋白表达、原位杂交法测肝组织MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP mRNA、酶图法测鼠血清MMP-2酶活性。结果:MMP-2蛋白及核酸主要表达于α-SMA阳性细胞(活化的肝星状细胞),TIMP-2 蛋白、MT1-MMP mRNA主要表达于汇管区及纤维隔中间质细胞,TIMP-2 mRNA主要见于肝细胞。MMP-2

关键词：基质金属蛋白酶 MMP 肝纤维化动态观察

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IL-21的免疫调节作用

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国际免疫学杂志 2006年第6期29卷 354-356页

作者：徐林熊思东（审校）复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因与疫苗研究中心200032 复旦大学上海医学院免疫学系

IL-21是近几年来被发现和关注的细胞因子,由活化的T细胞合成和分泌,主要通过激活NK细胞来发挥功能。已有的研究表明IL-21还可对T、B细胞和DC发挥重要的调节作用,并可能在促进天然免疫向获得性免疫转化中扮演了重要角色。

关键词： IL-21 天然免疫获得性免疫

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