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CD100在B淋巴细胞发育中的作用

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生命的化学 2004年第3期24卷 188-190页

作者：关庆东熊思东复旦大学上海医学院免疫学系、教育部分子医学重点实验室、上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

CD100是第一个被确认的在免疫系统起重要作用的脑信号蛋白(semaphorin)家族成员.CD100在B淋巴细胞发育中起着重要作用,它通过封闭受体CD72的负调控信号而促进B细胞的活化,从而增强体液免疫应答.

关键词：脑信号蛋白(semaphorin) CD100 B淋巴细胞发育

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HeLa细胞中与组织型转谷氨酰胺酶相互作用蛋白质的筛选

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第5期35卷 478-482页

作者：李平张宇清王霞谭理朱运松上海200032 复旦大学上海医学院分子遗传研究室复旦大学上海医学院分子遗传研究室教育部分子医学重点实验室

组织型转谷氨酰胺酶 (tissuetransglutaminase ,tTG ,TGII)是转谷氨酰胺酶家族成员之一 ,多数细胞凋亡过程中均有tTG表达水平的升高。为研究tTG在细胞凋亡过程中发挥作用的机制 ,利用Gal 4酵母双杂交系统筛选了HeLa细胞中与tTG相互作用... 详细信息

组织型转谷氨酰胺酶 (tissuetransglutaminase ,tTG ,TGII)是转谷氨酰胺酶家族成员之一 ,多数细胞凋亡过程中均有tTG表达水平的升高。为研究tTG在细胞凋亡过程中发挥作用的机制 ,利用Gal 4酵母双杂交系统筛选了HeLa细胞中与tTG相互作用的蛋白质 ,获得了 17个阳性酵母克隆。序列测定显示其中 1个克隆所含cDNA序列编码TIA 1相关蛋白 (TIA 1 relatedprotein ,TIAR )C端 12 9个氨基酸残基序列 ,GST下拉 (pull down)实验也证实tTG与TIAR能相互作用 ,而且这种相互作用需要Ca2 + 参与作用。这些结果提示tTG可能通过其Ca2 + 依赖的转谷氨酰胺活性对TIAR进行修饰从而影响TIAR的功能 ,可能在细胞凋亡中发挥着一定的作用。

关键词：组织型转谷氨酰胺酶 TIA-1相关蛋白酵母双杂交

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Chitosan-DNA疫苗诱导Th1型特异性免疫应答

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复旦学报(医学版) 2003年第5期30卷 451-454页

作者：徐薇吴蓉沈燕储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系-教育部分子医学重点实验室-上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的在我们前期研究发现脱乙酰壳多糖(chitosan)包裹质粒DNA形成的chitosan-pcDNA3-VP1疫苗基因免疫诱生较高水平特异性免疫应答的基础上,探讨该疫苗诱导T辅助细胞(Th)应答的类型,为chitosan-DNA新型疫苗的分子设计奠定基础.方法以chito... 详细信息

目的在我们前期研究发现脱乙酰壳多糖(chitosan)包裹质粒DNA形成的chitosan-pcDNA3-VP1疫苗基因免疫诱生较高水平特异性免疫应答的基础上,探讨该疫苗诱导T辅助细胞(Th)应答的类型,为chitosan-DNA新型疫苗的分子设计奠定基础.方法以chitosan-pcDNA3-VP1、pcDNA3-VP1和pcDNA3分别滴鼻免疫BALB/c小鼠,以ELISA法检测VP1体外表达和IgG亚型;以3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应;并通过RT-PCR检测了小鼠心肌内细胞因子表达情况.结果 chitosan-pcDNA3-VP1体外转染后VP1的表达水平与pcDNA3-VP1转染组无显著差异(P＞0.05),表明chitosan的加入不改变pcDNA3-VP1质粒在体外细胞内的表达;chitosan-pcDNA3-VP1组脾淋巴细胞和肠系膜淋巴细胞增殖指数分别达3.0和2.74,均显著高于pcDNA3-VP1组和pcDNA3组(P＜0.01);chitosan-pcDNA3-VP1免疫可显著增强IgG2a的生成,第6周和第12周IgG2a/IgG1比值分别为2.26和44.2,而pdDNA3-VP1组IgG2a表达稍高于IgG1、IgG2b和IgG3表达,IgG2a/IgG1比值为1.63(P＜0.05);细胞因子检测表明chitosan-pcDNA3-VP1组IFN-γ表达显著高于IL-4,相对定量后IFN-γ/IL-4比值为2.1;而pcDNA3-VP1、pcDNA3组分别为1.25和0.78.结论chitosan-pcDNA3-VP1基因疫苗经滴鼻免疫可诱导Th1型免疫应答.

关键词：脱乙酰壳多糖 DNA疫苗 B组3型柯萨奇病毒

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hCGβ在乳酸杆菌中的分泌性表达

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生殖与避孕 2003年第3期23卷 129-134,T001页

作者：王红梅李大金姜红袁正宏复旦大学附属妇产科研究所生殖免疫研究室上海200011 复旦大学上海医学院分子病毒学教育部重点实验室上海200032

目的 :探索乳酸杆菌携带表达 h CGβ避孕疫苗的抗生育作用。方法 :用 PCR从短小乳酸杆菌染色体中扩增得到 S-层蛋白的信号肽序列 ,将其与 h CGβ基因连接后克隆到乳酸杆菌整合型表达载体 p Ilac的 lac启动子下游 ,得到质粒 p Ilac h CG... 详细信息

目的 :探索乳酸杆菌携带表达 h CGβ避孕疫苗的抗生育作用。方法 :用 PCR从短小乳酸杆菌染色体中扩增得到 S-层蛋白的信号肽序列 ,将其与 h CGβ基因连接后克隆到乳酸杆菌整合型表达载体 p Ilac的 lac启动子下游 ,得到质粒 p Ilac h CGβ,电穿孔转化干酪氏乳酸杆菌 Lb. caseiCECT5 2 76。挑选转化后的耐药菌落 ,在含红霉素培养基中培养 ,抽提其染色体 DNA,PCR及测序鉴定证实 h CGβ基因整合到 ***的基因组中。h CG放免检测上清及细胞裂解液中的 h CGβ。结果 :h CGβ基因已经整合到 ***的基因组中 ;细菌产生的目的蛋白约有 3/ 4分泌进入培养上清 ,而加入诱导剂乳糖 2 1 h后 ,上清中的蛋白浓度达到峰值 ,为 440 m IU/ m L。重组菌在无选择压力条件下培养 5 0代后仍可分泌 h CGβ。结论 :h CGβ在乳酸杆菌中得到了稳定的。

关键词：乳酸杆菌 hCGβ 电穿孔转化

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糖皮质激素与炎症因子对应急时相反应蛋白SIP24/24p3的协同调控作用及其意义(英文)

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生理学报 2003年第5期55卷 525-529页

作者：刘全胜,Marit Nilsen-Hamilton,熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心 Biochemistry Biophysics and Molecular Biology Iowa State University Ames IA 5001 I USA 复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海 200032 上海 200032

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的35S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水... 详细信息

小鼠应急时相反应蛋白SIP24/24p3有抗炎症和特异性诱导白细胞凋亡的功能,其在体内的表达是高度特异性的。为研究 SIP24/24p3的调控因子及机制,我们在小鼠 Balb/cT3和 BNL细胞培养中通过灵敏的35S代谢标记方法检测SIP24/24p3蛋白的表达水平,定量观测分析了糖皮质激素化合物dexamethasone对SIP24/24p3的诱导作用及其与炎症因子白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的协同调控作用。结果显示:（1）在Balb/c 3T3和BNL细胞中,dexamethasone对SIP24/24p3都有明显诱导作用,这种诱导作用在BNL细胞中尤其显著;（2）在Balb/c3T3和BNL细胞中dexamethasone与IL-6协同诱导SIP24/24p3;（3）在Balb/c 3T3细胞中dexamethasone与TNF-α对SIP24/24p3有协同诱导效应,而在 BNL细胞中 dexamethasone与 TNF-α对 SIP24/24p3的诱导表现为相加效应;（4）在 Balb/c 3T3和BNL细胞中 dexamethasone与IL-6/TNF-α对SIP24/24p3的诱导分别表现出协同和相加效应。多种因子对SIP24/24p3的协同诱导调控有助于阐明其在体内的高度特异表达及机制,SIP24/24p3在不同细胞中的不同表达格局也对体内应急时相反应蛋白在肝脏外和肝脏内的表达方式及诱导机制有提示作用。SIP24/24p3能同时被炎症因子和抗炎症因子诱导的事实显示了其在炎症全过程中的重

关键词：应急时相反应蛋白SIP24/24p3 35S代谢标记糖皮质激素白介素6 肿瘤坏死因子α

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脑内牛磺酸含量的降低可减弱针刺抗脑缺血作用

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中国神经科学杂志 2003年第1期19卷 32-35页

作者：夏艳郭景春赵鹏程介士复旦大学上海医学院针刺原理研究所医学神经生物学国家重点实验室上海200032

目的 :用 β 丙氨酸 (β Alanine ,β Ala)降低脑内牛磺酸 (Taurine ,Tau)含量后 ,在大鼠大脑中动脉栓塞再灌模型上观察了Tau含量的降低对脑缺血及针刺抗脑缺血作用的影响。方法 :脑组织匀浆内Tau含量应用高压毛细管电泳电化学检测... 详细信息

目的 :用 β 丙氨酸 (β Alanine ,β Ala)降低脑内牛磺酸 (Taurine ,Tau)含量后 ,在大鼠大脑中动脉栓塞再灌模型上观察了Tau含量的降低对脑缺血及针刺抗脑缺血作用的影响。方法 :脑组织匀浆内Tau含量应用高压毛细管电泳电化学检测法检测。结果 :(1) β Ala使大脑皮质、海马、纹状体Tau含量比正常组分别降低了5 5 .9% ,5 2 .0 5 %和 31.6 2 %。 (2 )Tau含量的降低未加重脑缺血损伤 :牛磺酸未消耗鼠与牛磺酸消耗鼠的缺血组相比 ,脑梗死面积及细胞残存率未见显著差别。 (3)电针对脑缺血损伤具明显的保护效应 :牛磺酸未消耗鼠中 ,缺血 +针刺组比单纯缺血组梗死面积减小 (P <0 .0 5 ) ,纹状体细胞残存率增大 (P <0 .0 5 )。 (4)牛磺酸消耗后 ,电针的抗脑缺血损伤作用显著减弱 ,与牛磺酸未消耗鼠缺血 +电针组相比 ,脑梗死面积增大 (P <0 .0 5 ) ,纹状体细胞残存率降低(P <0 .0 5 )。结论 :牛磺酸可能在针刺的抗脑缺血效应中发挥重要作用。

关键词：脑缺血电针牛磺酸 β-丙氨酸毛细管电泳-电化学检测

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不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

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免疫学杂志 2003年第4期19卷 250-253页

作者：徐薇沈燕张进平王缨熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径.方法将chitosan-pcDNA3-VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA,评估其特异性体液免疫应答;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活... 详细信息

目的确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径.方法将chitosan-pcDNA3-VP1疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠;以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgA,评估其特异性体液免疫应答;以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫;以5LD50致死剂量CVB3攻击免疫小鼠,评价不同免疫途径的免疫保护效果.结果①在诱导CVB3特异性体液免疫方面:chitosan-pcDNA3-VP1疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG,但未能诱生黏膜IgA;口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA,未能诱生特异性IgM和IgG;滴鼻组可诱生低水平的IgM及高水平的IgG和黏膜IgA.②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面:仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性;口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱;肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答.③免疫保护作用:滴鼻组可保护33.3%小鼠长期存活;口服组仅达到16.7%的保护率;肌注组无保护作用.结论滴鼻免疫途径可能是chitosan-pcDNA3-VP1基因疫苗最合适的诱导全面免疫应答的免疫途径.

关键词： Chitosan-DNA疫苗 CVB3 免疫保护滴鼻

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血清淀粉样P成分的DNA结合特性

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免疫学杂志 2003年第5期19卷 336-338页

作者：吴瑾王立新郑秀娟熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义.方法用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴... 详细信息

目的检测血清淀粉样P成分(SAP)与不同DNA的结合活性并研究SAP与DNA的结合是否有利于此类抗原的清除,探讨它在SLE发生发展中的作用及意义.方法用亲和层析和凝胶过滤方法自小鼠和人血清中纯化SAP,分别提取来自细菌、质粒、酵母、小鼠淋巴细胞等不同DNA,用DOT-EIA方法检测SAP与它们的结合活性,用巨噬细胞吞噬实验观察SAP与DNA结合后对DNA清除的影响.结果人和小鼠SAP均与细菌DNA结合最强,其次为质粒、酵母DNA,与淋巴细胞DNA和小牛胸腺DNA的结合较弱,与单链λDNA结合最弱;与来源于活化状态小鼠淋巴细胞DNA的结合力高于非活化状态;SAP与活化淋巴细胞DNA结合后可促进巨噬细胞对DNA的吞噬.结论SAP与不同DNA结合活性各异.

关键词：血清淀粉样P成分 DNA 系统性红斑狼疮

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Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用

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中国免疫学杂志 2003年第12期19卷 813-817页

作者：徐薇沈燕王立新许从峰储以微熊思东复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心上海200032

目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan... 详细信息

目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80～100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.

关键词： CVB3 VP1 Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫保护

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β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响

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解剖学报 2003年第3期34卷 323-326页

作者：沈爱国丁斐顾晓松强亮王汉洲顾建新南通医学院江苏省神经再生重点实验室南通226001 复旦大学上海医学院基因研究中心上海200032

目的　探讨周围神经施万细胞表达 β1,4 半乳糖基转移酶 Ⅰ (β 1,4 GalT Ⅰ )对其增殖的影响。　方法　将构建的正、反义 β 1,4 GalT Ⅰ表达质粒 ,转染到施万细胞中 ,分析转染细胞倍增时间、3H TdR掺入情况以及细胞周期变化。　... 详细信息

目的　探讨周围神经施万细胞表达 β1,4 半乳糖基转移酶 Ⅰ (β 1,4 GalT Ⅰ )对其增殖的影响。　方法　将构建的正、反义 β 1,4 GalT Ⅰ表达质粒 ,转染到施万细胞中 ,分析转染细胞倍增时间、3H TdR掺入情况以及细胞周期变化。　结果　转染正义β 1,4 GalT Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制 ,这种作用随转染浓度增大而增强 ;在G1 /G0 期的细胞数目增加 ,S期的数目减少。而转染反义 β 1,4 GalT Ⅰ有相反的作用。　结论　β 1,4 GalT Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用 ,可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用。

关键词： β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 施万细胞细胞增殖大鼠周围神经损伤流式细胞仪细胞周期

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