检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2022年第3期17卷 139-147页

作者：于尹冯飞马艳龙朱云凯叶荣张荣复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途... 详细信息

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途径。本研究通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)将MHV的原始毒株A59全长基因组分成6个片段进行扩增,分别克隆到质粒载体,经酶切、体外连接和转录获得全长基因组RNA,然后电转细胞并进行病毒扩增。结果显示,重组病毒rA59与原始毒株的复制特性相似,其为研究MHV的生物学特性提供了实验工具。为方便检测病毒的复制水平,在病毒基因组开放阅读框4(open reading frame 4,ORF4)内分别插入绿色荧光蛋白ZsGreen(Zoanthus *** fluorescent protein)和荧光素酶Nluc(NanoLuc luciferase)报告基因,获得rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒。结果显示,报告病毒所携带的报告基因并不影响病毒复制,可很好地反映病毒的复制特性。使用这两种病毒验证瑞德西韦(remdesivir)的抗病毒活性,分别检测药物处理后病毒的荧光亮度和荧光素酶活性。结果表明,rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒适用于高通量药物筛选,具有重要的应用前景。综上所述,本研究成功建立了MHV A59毒株六质粒反向遗传操作系统,为研究MHV的生物学特性和测试抗病毒药物等提供了有力的工具。

关键词：鼠肝炎病毒感染性克隆病毒拯救报告病毒

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基于微滴数字PCR技术建立单细胞水平研究HBV的方法

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微生物与感染 2023年第5期18卷 269-277页

作者：马华杰邬敏张占卿袁正宏易志刚张小楠复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508 复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室上海200032 堪培拉大学生物医学系理学部澳大利亚首都直辖区2617

在单细胞水平研究肝组织内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是十分重要的,但相关研究技术尚处于推进阶段,不能满足临床需要。基于微滴数字聚合酶链反应技术(digital droplet polymerase chain reaction,ddPCR),本研究建立了一套单... 详细信息

在单细胞水平研究肝组织内乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是十分重要的,但相关研究技术尚处于推进阶段,不能满足临床需要。基于微滴数字聚合酶链反应技术(digital droplet polymerase chain reaction,ddPCR),本研究建立了一套单细胞水平绝对定量HBV DNA和RNA的单细胞微滴数字PCR方法(single-cell ddPCR,sc-ddPCR)。通过混合不同比例的HBV阳性和阴性细胞来模拟HBV慢性感染状态下的肝脏,分析此方法检测HBV DNA的线性和检测下限。以cccDNA来源RNA(episome-derived RNA,eRNA)为例,进一步设计针对eRNA的sc-ddPCR检测方案。利用不同来源转录本在结构上的差异,设计针对eRNA的特异性引物探针体系,在HBV肝癌细胞系中验证此引物和探针体系的特异度,并利用梯度稀释的HBV细胞株分析此方法检测eRNA的线性和检测下限。结果显示,本研究建立了基于ddPCR的DNA和RNA的单细胞水平检测方法,该方法表现出良好的线性(HBV DNA:R^(2)=0.9987;eRNA:R^(2)=0.9425),梯度稀释的HBV细胞株均能准确检测出阳性信号,具有高灵敏度(检测下限:HBV DNA为0.16%,eRNA为0.2%)。本研究建立的sc-ddPCR方法可针对多种DNA和RNA进行检测,为进一步研究肝组织内HBV病毒学活动提供了良好的技术支撑,可以更深入地分析肝组织内HBV的病毒学特征,从而有利于HBV治疗策略的优化和研发,具有广阔的应用前景。

关键词： HBV DNA cccDNA来源RNA 微滴数字PCR 单细胞

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严重急性呼吸综合征冠状病毒2环境稳定性的研究进展

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微生物与感染 2022年第4期17卷 239-252页

作者：孙志平瞿涤复旦大学生物安全三级实验室上海200032 复旦大学上海医学院基础医学院医学分子病毒学教育部/卫健委/医科院重点实验室上海200032

2019冠状病毒病疫情席卷全球,其病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)主要通过呼吸道飞沫以及密切接触(直接或间接接触)传播。接触病毒污染物体导致感染的风险也受到了广泛... 详细信息

2019冠状病毒病疫情席卷全球,其病原体严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)主要通过呼吸道飞沫以及密切接触(直接或间接接触)传播。接触病毒污染物体导致感染的风险也受到了广泛关注。本文对SARS-CoV-2在环境中稳定性的相关研究进行了综述。对SARS-CoV-2不同变异毒株的环境稳定性研究发现,在室温和常规湿度条件下,不同毒株在环境中的存活时间均与病毒滴度有关,低滴度(<104.0TCID50)病毒可在不同材料表面存活1~3 d,高滴度(>105.0TCID50)病毒可存活3~7 d。各种毒株在低温条件下均更加稳定。此外,研究未发现不同毒株对消毒剂的敏感性存在差异,醇基消毒剂、含氯消毒剂、表面活性剂等均能有效灭活SARS-CoV-2的不同变异株。当面临可能被病毒污染的环境时,应注意做好个人防护和手卫生,及时对环境表面进行消毒灭菌,以降低感染的风险。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 病毒存活消毒 2019冠状病毒病疫情防控

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细菌鞭毛蛋白免疫调节作用及机制的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第5期41卷 395-399页

作者：肖振明赵超邬永琳徐俊复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫生健康委员会/医科院医学分子病毒学重点实验室 200032 复旦大学附属华山医院国家老年疾病临床医学研究中心上海200040 上海交通大学附属第六人民医院骨科 200233

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受... 详细信息

鞭毛是位于某些细菌菌体表面细长呈波状弯曲的具有运动功能的蛋白质附属丝状物,不仅在细菌的运动与致病能力中起到重要作用,而且参与宿主多种免疫调节。鞭毛蛋白(flagellin)是形成鞭毛细丝主要部分的结构蛋白,可以被宿主细胞的Toll样受体5(TLR5)等受体识别,诱导机体免疫应答。目前,鞭毛蛋白因其免疫激活作用被广泛应用于新型免疫佐剂的研究,而其炎症抑制作用也在对抗免疫病理损伤方面具有良好前景。本文将对鞭毛蛋白的基本结构功能、宿主识别机制及其对宿主免疫系统起到的调节作用的研究进展作一概述。

关键词：细菌鞭毛蛋白 TLR5 免疫调节炎性抑制

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HBV cccDNA转录代谢调控机制及沉默清除策略

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临床肝胆病杂志 2020年第5期36卷 983-988页

作者：宰文静陈捷亮袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、... 详细信息

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、转录和代谢调控机制及相关宿主因子的认知,重点分析了cccDNA沉默清除的可能途径和靶向调控策略。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA,环状代谢转录调控抗病毒策略

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脑膜炎败血伊丽莎白菌耐药性的研究进展

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微生物与感染 2022年第1期17卷 47-54页

作者：巫祺乐方子璇袁舒颖陈妍雯陈力孙桂芹浙江中医药大学医学技术与信息工程学院浙江杭州310053 复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica,EM)可引起肺部感染、新生儿脑膜炎、菌血症等疾病,医院重症监护病房检出率较高,是院内感染的重要病原体之一。随着抗菌药物的广泛使用,EM对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类... 详细信息

脑膜炎败血伊丽莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica,EM)可引起肺部感染、新生儿脑膜炎、菌血症等疾病,医院重症监护病房检出率较高,是院内感染的重要病原体之一。随着抗菌药物的广泛使用,EM对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等临床常用抗菌药物呈多重耐药,给临床治疗带来极大困难。目前EM的耐药机制研究主要集中于产生药物灭活酶、药物作用靶位改变、外排泵、形成生物膜等方面。EM可同时携带多个耐药基因,如GOB、BlaB、CME等,从而介导多重耐药。本文就国内外EM耐药现状、耐药机制进行综述,旨在为预防和控制EM的医院内感染提供参考。

关键词：脑膜炎败血伊丽莎白菌耐药耐药基因耐药机制

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广谱抗冠状病毒疫苗及抗冠状病毒多肽的研究进展

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微生物与感染 2021年第4期16卷 270-279页

作者：曹妙陆路姜世勃复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)暴发,给人类公共卫生安全和全球经济发展造成了严重威胁。疫苗和药物是防治疫情的重要手段,但目前研发的针对冠状病毒的疫苗和药物大多以SARS-CoV-2为靶点,该病毒若发生重大突变或出现新的高致病性冠状病毒,目前研发的有效疫苗或药物可能会无效,而且疫苗和新药的研发往往比较滞后,难以在疫情发生早期投入使用。因此,亟须研发高效、安全、广谱的冠状病毒疫苗和药物,以应对未来可能出现的冠状病毒疫情。本文对广谱冠状病毒疫苗和抗冠状病毒多肽的研究进展进行综述,期望为研发此类疫苗和药物提供参考。

关键词：广谱冠状病毒 2019冠状病毒病疫苗药物

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慢性乙型肝炎患者外周血循环免疫复合物的临床意义探索

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微生物与感染 2022年第6期17卷 347-359页

作者：唐怡洁邬敏陆伟冯艳玲袁正宏张小楠张占卿复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508 复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/中国医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 堪培拉大学澳大利亚首都直辖区2617

免疫复合物的形成是病毒在感染过程中造成机体损伤的重要原因之一。对病毒感染者进行免疫复合物的定量有助于监测疾病进展,了解病毒与宿主之间的相互作用。本研究对早期固相C1q结合荧光免疫法进行优化,并利用补体分子C1q特异性结合慢性... 详细信息

免疫复合物的形成是病毒在感染过程中造成机体损伤的重要原因之一。对病毒感染者进行免疫复合物的定量有助于监测疾病进展,了解病毒与宿主之间的相互作用。本研究对早期固相C1q结合荧光免疫法进行优化,并利用补体分子C1q特异性结合慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血液中的循环免疫复合物(circulating immune complex,CIC),通过荧光标记的羊抗人IgG对CIC进行检测。针对220例CHB患者、20例非乙型肝炎的肝炎患者、20例健康者、10例CHB功能性治愈者,分析了CHB患者中的CIC水平及其与CHB诊断所用病毒学指标、肝功能生化指标之间的关系。结果显示:约97%的CHB患者存在CIC水平升高,且与病毒学指标乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)(r=0.1973,P=0.0058)、HBV DNA(r=0.2178,P=0.0023)显著正相关;与肝脏损伤相关生化指标丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)(r=0.1580,P=0.0200)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)(r=0.1513,P=0.0353)呈正相关,而与补体C4(r=-0.21,P=0.003)呈负相关。不同程度的炎症和纤维化患者之间CIC和补体水平有显著性差异,且随临床分期产生相应波动。在免疫耐受期和低复制期,患者CIC水平较低而补体水平升高;在免疫激活期和HBV e抗原(HBV e antigen,HBeAg)阴性肝炎患者中的结果则相反。结果提示,CHB患者血液循环中存在CIC生成所造成的肝脏损伤及补体大量消耗,对CIC进行监测能在一定程度上反映CHB患者潜在的肝损伤。

关键词：乙型肝炎病毒免疫复合物补体肝脏炎症

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两种抽提乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的效果比较

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微生物与感染 2021年第5期16卷 313-321页

作者：胡孔颖金宇焘叶建宇宰文静王洋李雨檬陈捷亮复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心,也是此研究领域内的重点。从细胞样品中稳定抽提获取cccDNA对于保证cccDNA检测的准确性至关重要。Hirt法是一种抽提真核细胞染色体外DNA的方法,被用于HBV cccDNA的抽提,但存在操作复杂和耗时长等问题。为简化操作,有研究对Hirt法进行改良,结合硅胶膜离心柱来抽提染色体外DNA,但尚不清楚该法用于HBV cccDNA抽提与传统Hirt法的效果差异。本研究基于HBV cccDNA细胞转染系统、HBV复制细胞系及感染系统,以DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)作为检测评价手段,平行比较了传统Hirt-酚/氯仿法与改良Hirt-过柱法抽提HBV cccDNA的效果。结果表明,两种方法具有相当的抽提效率和抽提特异性,而改良Hirt-过柱法耗时更短,提示在进行细胞HBV cccDNA抽提时可选择改良Hirt-过柱法以提高实验效率。

关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA 抽提方法 Hirt法硅胶膜离心柱

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CD137^(+)T细胞效应功能研究进展

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生命的化学 2023年第6期43卷 915-921页

作者：姬雪娇沈洪波王菲菲郑碧英广东医科大学检验医学研究所临床免疫学研究室东莞523808 同济大学附属上海市肺科医院结核病临床研究中心上海200433 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系、教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

CD137^(+)(又称4-1BB、TNFRSF9)T细胞亚群是一类抗原特异性活化的效应细胞。CD137^(+)T细胞产生细胞毒效应因子以及在抗原刺激后进行增殖的能力较强,使其在多种疾病中发挥免疫调节作用,其中CD137^(+)调节性T细胞分泌的分泌型CD137具有... 详细信息

CD137^(+)(又称4-1BB、TNFRSF9)T细胞亚群是一类抗原特异性活化的效应细胞。CD137^(+)T细胞产生细胞毒效应因子以及在抗原刺激后进行增殖的能力较强,使其在多种疾病中发挥免疫调节作用,其中CD137^(+)调节性T细胞分泌的分泌型CD137具有重要的免疫抑制作用。因此,全面了解CD137^(+)T细胞在疾病中的作用,对开发有效的疾病免疫防治策略至关重要。本文通过介绍CD137相关信号对T细胞尤其是CD8^(+)T细胞功能的调控机制、CD137^(+)T细胞的特征和效应功能、CD137^(+)T细胞在多种疾病进展中的免疫调控作用,为靶向CD137^(+)T细胞的免疫治疗提供参考。

关键词： CD137^(+)T细胞抗原特异性T细胞免疫微环境免疫治疗

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