检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2014年第3期54卷 285-291页

作者：王歆玮任道元高谦牛辰复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】构建耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)glpX基因敲除株,研究其在生理代谢中的功能。【方法】利用分枝杆菌噬菌体Che9c重组系统构建耻垢分枝杆菌glpX基因敲除株;比较野生株及突变株在不同碳源培养条件下的生长差异;通过荧... 详细信息

【目的】构建耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)glpX基因敲除株,研究其在生理代谢中的功能。【方法】利用分枝杆菌噬菌体Che9c重组系统构建耻垢分枝杆菌glpX基因敲除株;比较野生株及突变株在不同碳源培养条件下的生长差异;通过荧光实时定量PCR,比较野生株在以葡萄糖或油酸为唯一碳源培养下,glpX基因的表达水平。【结果】glpX突变株在以甘油或油酸为唯一碳源的培养基中无法生长;野生株在以油酸为唯一碳源培养下,glpX基因表达上调。【结论】glpX基因编码了分枝杆菌糖异生途径必需的和非冗余的果糖1,6-二磷酸酶(fructose 1,6-bisphosphatase,FBPase)。

关键词：分枝杆菌基因glpX 果糖1 6-二磷酸酶碳源代谢糖异生

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异质性耐药对结核分枝杆菌表型和基因型耐药检测结果的影响

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中华结核和呼吸杂志 2014年第4期37卷 260-265页

作者：高旭李静柳清云沈鑫梅建高谦复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室 200032 上海市疾病预防控制中心结核病防治科

目的研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,... 详细信息

目的研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,分析经基因测序未检测到耐药突变的菌株中是否存在异质性耐药现象.结果基因测序报告显示,80株氧氟沙星耐药菌株中有15株未发现已知gyrA或gyrB耐药决定区的基因突变.测序图谱及分子克隆和探针熔解曲线法分析结果表明,其中14株菌株含有已知gyrA耐药突变,即存在异质性耐药现象.纳入异质性耐药的菌株后,基因型与表型耐药检测的符合率从81.3％（65/80）提高到98.8％（79/80）.结论异质性耐药是导致表型和基因型耐药检测结果不符的重要原因.为排除异质性耐药对耐药基因检测的影响,提高基因型与表型耐药检测结果的一致性,需要开发应用更敏感的基因型耐药检测技术,以提高耐药结核病快速检测水平.

关键词：分枝杆菌结核遗传异质性耐药快速检测

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肝细胞癌免疫治疗离临床应用还有多远

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中华肝脏病杂志 2014年第5期22卷 393-396页

作者：丁佳王虹吴健上海市静安区中心医院复旦大学附属华山医院静安分院消化科 200040 复旦大学上海医学院分子病毒学教育部重点实验室

随着对T淋巴细胞和B淋巴细胞亚群的认识以及肿瘤疫苗的研究逐渐深入，临床试验显示单克隆抗体联合吉西他滨治疗，可使19％（4／21）的晚期胰腺癌患者获得部分应答，52．3％（11／21）的患者获得疾病稳定。

关键词：癌肝细胞免疫治疗肿瘤相关抗原

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一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立

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中华传染病杂志 2014年第5期32卷 257-262页

作者：李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明上海市公共卫生临床中心肝病科 201508 复旦大学上海医学院教育部、卫生部医学分子病毒学重点实验室复旦大学附属华山医院感染科

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）... 详细信息

目的建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

关键词：肝炎病毒,乙型 RNA指导的DNA聚合酶抗药性表型

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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统（CRISPR／Cas）研究近况

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第10期34卷 798-802页

作者：王蕾马丽俐孙桂芹李蒙策力木格陈力复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室 200032 浙江中医药大学附属第一医院杭州340006

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究... 详细信息

1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶（ iap）基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列［1］。2002年，这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列（CRISPR），CRISPR关联蛋白也同时得以命名［2］。2005年，3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质，如噬菌体和接合质粒，并推论CRISPR／Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA［3-5］。2007年，来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证；研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系，证明了CRISPR／Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统［6］。 Marraffini和Sontheimer［7］证实CRISPR／Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。最近基于CRISPR／Cas作用机制的研究，发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用［8］。

关键词： Cas系统回文序列蛋白系统成簇 DNA重复序列大肠杆菌K12 Ⅱ型细菌染色

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以HA2为基础的流感病毒候选疫苗同时与H5N1、H1N1和H3N2亚型毒株产生交叉反应

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中山大学学报（医学科学版） 2014年第3期35卷 321-328页

作者：魏美丽陈燕霞王宇徐俊熊为亮姜世勃潘春根中山大学中山医学院人类病毒学研究所//教育部热带病防治研究重点实验室广东广州510080 中山大学药学院药物分子设计研究中心广东广州510006 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答。【方法】我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004(H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30... 详细信息

【目的】探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答。【方法】我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004(H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30)和一个连在碳端的三聚体基序(foldon,Fd)组成。原核表达该蛋白,圆二色谱和Western Blot验证IR-30-Fd的室间结构之后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,并同时免疫IR30多肽为对照,制备血清抗体。然后应用ELISA和Western Blot方法检测抗体的滴度,应用细胞ELISA和Western Blot方法检测抗体与不同的IAV菌株HA2蛋白的交叉反应性。【结果】IR30-Fd能够形成具有α螺旋的三聚体空间结构。用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔后获得了高效价的抗IR30的特异性抗体。鼠抗IR30-Fd抗体能与H3N2和H1N1的HA蛋白反应而鼠抗IR30抗体不能。鼠抗IR30-Fd抗体稀释6 400倍、兔抗IR30-Fd抗体稀释8.2×105倍均可以与H5N1的HA蛋白反应。细胞ELISA表明兔抗IR30-Fd抗体与天然状态下的H5N1和H3N2的HA蛋白的结合亲和力高于兔抗IR30抗体。【结论】本研究结果表明IR30-Fd蛋白能够模拟H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚体结构,并且能够诱导产生针对H5N1 H1N1和H3N2亚型HA蛋白的广谱交叉反应抗体,为研制通用的流感病毒疫苗提供了结构基础。

关键词：甲型流感病毒通用疫苗 HA2 三聚体

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从DNA疫苗到耐受疫苗:全新的适应症和抑炎前景

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生命的化学 2014年第1期34卷 23-28页

作者：耿爽钟一维王宾复旦大学上海医学院教育部和卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

DNA疫苗技术从1990年代发现到至今,已经创造成功了4个临床兽用疫苗或产品,并仍然有数十个产品正在临床验证的不同阶段。通过不断提高DNA质粒进入体细胞的效率,DNA疫苗将具有更强的免疫应答效率,从而使得DNA疫苗走向更多和更广泛的临床... 详细信息

DNA疫苗技术从1990年代发现到至今,已经创造成功了4个临床兽用疫苗或产品,并仍然有数十个产品正在临床验证的不同阶段。通过不断提高DNA质粒进入体细胞的效率,DNA疫苗将具有更强的免疫应答效率,从而使得DNA疫苗走向更多和更广泛的临床应用。DNA疫苗不仅可以增强机体免疫系统的应答反应,利用其与蛋白质疫苗共免疫的方式也可以产生特异性的免疫耐受反应用于抑制免疫反应。基于DNA疫苗的诱导免疫耐受的疫苗技术开辟了全新的过敏性疾病和自主免疫疾病的干预领域,具有重要的临床潜力和应用前景。

关键词： DNA疫苗耐受疫苗共免疫佐剂过敏性疾病自主免疫疾病

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表皮葡萄球菌色氨酰-tRNA合成酶抑制剂W-23的抗菌活性研究

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中国科技论文在线精品论文 2014年第23期7卷 2362-2366页

作者：吴旸毛嘉琳瞿涤复旦大学上海医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的:检测色氨酰-tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,WRS)抑制剂W-23对葡萄球菌的抗菌活性.方法:采用肉汤稀释法检测W-23对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并检... 详细信息

目的:检测色氨酰-tRNA合成酶(tryptophanyl-tRNA synthetase,WRS)抑制剂W-23对葡萄球菌的抗菌活性.方法:采用肉汤稀释法检测W-23对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并检测其与氨苄青霉素或氯霉素联用对表皮葡萄球菌的联合抗菌效果.结果:化合物W-23对葡萄球菌属的MIC为2～4 mg/L,抗菌类型属于抑菌剂,与氨苄青霉素联用对耐甲氧西林表皮葡萄球菌具有协同抗菌作用.结论:W-23对葡萄球菌抗菌活性较强,具有潜在应用价值.

关键词：医学微生物葡萄球菌色氨酰-tRNA合成酶抑制剂W-23

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抗玛斯冠状病毒(MERS-Cov)疫苗和药物的研究

抗玛斯冠状病毒(MERS-Cov)疫苗和药物的研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：姜世勃复旦大学上海医学院分子病毒学教育部/卫生部重点实验室

2012年在中东地区发现的中东呼吸综合征(MERS,简称"玛斯")冠状病毒(MERS-CoV)已在五大洲二十多个国家造成八百多人感染,三百多人死亡(死亡率:>36%)。其远高于萨斯10%的死亡率己导致了全球恐慌。因此,研发抗MERS-CoV的药物... 详细信息

2012年在中东地区发现的中东呼吸综合征(MERS,简称"玛斯")冠状病毒(MERS-CoV)已在五大洲二十多个国家造成八百多人感染,三百多人死亡(死亡率:>36%)。其远高于萨斯10%的死亡率己导致了全球恐慌。因此,研发抗MERS-CoV的药物和疫苗是阻止玛斯进一步蔓延的当务之急。基于我们以前研发抗艾滋病病毒(HIV)多肽药物(Nature,365:113,1993)和萨斯冠状病毒(SARS-CoV)融合抑制多肽(Lancet,363:938-47,2004)的经验,我们设计和合成了多条衍生于

关键词： MERS-Cov 冠状病毒

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上海松江2006-2011年新登记肺结核时空分布规律及影响因素

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中华疾病控制杂志 2014年第8期18卷 709-714页

作者：路丽苹洪建军高谦王伟炳上海市松江区疾病预防控制中心结核病防制科上海201620 复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032 复旦大学上海医学院教育部卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的了解上海市松江区2006-2011年新登记肺结核(tuberculosis,TB)的时空分布规律及其影响因素。方法收集2006-2011年TB相关信息,应用时空扫描统计量探测TB的时空聚集区,应用Logistic回归模型分析影响TB聚集区形成的危险因素。结果松江区... 详细信息

目的了解上海市松江区2006-2011年新登记肺结核(tuberculosis,TB)的时空分布规律及其影响因素。方法收集2006-2011年TB相关信息,应用时空扫描统计量探测TB的时空聚集区,应用Logistic回归模型分析影响TB聚集区形成的危险因素。结果松江区2006-2011年新登记2 916例TB,单纯空间扫描统计显示全部TB及全部菌阳TB均在车墩镇聚集,本地TB及本地菌阳TB的空间聚集区为西南部的五个镇(新浜、石湖荡、小昆山、泖港和永丰),流动TB的聚集区为车墩镇,流动菌阳TB的聚集区为车墩镇、叶榭镇和泖港镇。时空扫描统计量显示松江区肺结核病例在2007-2008年出现聚集现象,聚集区域为工业区所在地的车墩镇和新桥镇。对于本地患者,农民职业者及就诊延误与空间聚集区呈独立相关;流动患者中,职业为蓝领工人、年龄小于60岁及来源于中国中西部地区是形成空间聚集区的危险因素。结论松江区TB的分布具有一定的时空聚集性。东部工业区是流动TB的聚集区域,西南五镇是本地TB的聚集区域,TB防控的工作重点应聚焦于这些区域;流动人口是TB聚集的重要因素,应重点关注。

关键词：结核,肺危险因素流行病学

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