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中华肝脏病杂志 2017年第10期25卷 789-793页

作者：马明剑吴健复旦大学上海医学院临床医学系 200082 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

近年来，随着生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病率逐渐上升，普通人群发病率为15％-30％，肥胖患者发病率达50％～90％。关于NAFLD的致病机制，“二次打击”学说已得到广泛认可。随着研究深入，人们发现肠道菌群失调可... 详细信息

近年来，随着生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病率逐渐上升，普通人群发病率为15％-30％，肥胖患者发病率达50％～90％。关于NAFLD的致病机制，“二次打击”学说已得到广泛认可。随着研究深入，人们发现肠道菌群失调可通过增加机体能量吸收、破坏肠黏膜屏障、产生大量毒性代谢产物等方式促进NAFLD的进展。这为揭示NAFLD的发病机制、探索有效治疗方法提供了新切入点。据此，就肠道菌群失调在NAFLD发生、发展过程中的作用做一简要概述。

关键词：脂肪肝肠道菌群失调能量代谢肠黏膜通透性

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LC-MS/MS测定兔血浆中B07浓度

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中国药学杂志 2017年第12期52卷 1056-1060页

作者：孙涛尹林田芳陆路董铭心李卫华张丽军上海市公共卫生临床中心上海201508 上海计划生育研究所上海200032 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定兔血浆中B07的浓度。方法血浆样品经碱化沉淀蛋白后,用甲基叔丁基醚液-液萃取,以乙腈(含0.2%乙酸)-40 mmol·L^(-1)乙酸铵(含0.2%乙酸)水溶液(80∶20)为流动相,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×150 mm,5μm)柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对B07为529.3→335.4,内标卡马西平为237.1→194.1。结果测定血浆中B07线性范围为0.31~310 ng·mL^(-1),r>0.99。日内和日间精密度小于15%,提取回收率均大于75%。结论该法选择性强、灵敏度高、重现性好,能够快速、准确测定兔血浆中B07浓度。

关键词： B07 液相色谱-串联质谱法液-液萃取血药浓度

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耐药结核分枝杆菌的适应性代价与补偿性进化

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微生物与感染 2017年第6期12卷 362-368页

作者：皮锐柳清云高谦复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

结核病耐药率的攀升是目前全球结核病防控面临的重大挑战。结核分枝杆菌主要通过其基因组中耐药相关基因发生点突变而获得耐药性。由于耐药相关基因通常具有重要的生理功能,其突变往往会导致结核分枝杆菌自身适应性下降,即产生"适... 详细信息

结核病耐药率的攀升是目前全球结核病防控面临的重大挑战。结核分枝杆菌主要通过其基因组中耐药相关基因发生点突变而获得耐药性。由于耐药相关基因通常具有重要的生理功能,其突变往往会导致结核分枝杆菌自身适应性下降,即产生"适应性代价"。然而,耐药结核分枝杆菌可通过进一步积累其他特定突变来回复其适应性,这种能使其适应性上升的突变称为"补偿性突变"。耐药结核分枝杆菌的补偿性进化被认为是耐药结核病广泛传播与流行的生物学基础。近年来,在结核病分子流行病学和基础研究领域,针对耐药结核分枝杆菌的补偿性进化开展了大量研究。本文从结核分枝杆菌的耐药分子机制、耐药突变的适应性代价与补偿性进化,以及补偿性进化如何影响耐药结核病传播等方面,综述耐药结核分枝杆菌补偿性进化的研究进展。

关键词：结核分枝杆菌耐药突变适应性代价补偿性进化异位显性

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表皮葡萄球菌磷酸盐转运调控蛋白PhoU的生物学功能的研究

表皮葡萄球菌磷酸盐转运调控蛋白PhoU的生物学功能的研究

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第四届临床微生物学与感染病学国际论坛暨首届微生物耐药防控高峰论坛

作者：王小飞韩海燕吴旸瞿涤复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海 200032

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抑制葡萄球菌组氨酸激酶YycG的噻唑烷酮类衍生物抗菌活性的研究

抑制葡萄球菌组氨酸激酶YycG的噻唑烷酮类衍生物抗菌活性的研究

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第四届临床微生物学与感染病学国际论坛暨首届微生物耐药防控高峰论坛

作者：吕智慧刘华勇吴旸瞿涤复旦大学上海医学院医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海 200030

背景：表皮葡萄球菌是引起医院感染的一种重要机会致病菌。它的主要致病力是在植入性医疗材料上形成生物膜，生物膜一旦形成就很难再被清除，从而给临床治疗带来极大困难。目的：葡萄球菌组氨酸激酶YycG抑制剂噻唑烷酮类衍生物抗菌和抗... 详细信息

背景：表皮葡萄球菌是引起医院感染的一种重要机会致病菌。它的主要致病力是在植入性医疗材料上形成生物膜，生物膜一旦形成就很难再被清除，从而给临床治疗带来极大困难。目的：葡萄球菌组氨酸激酶YycG抑制剂噻唑烷酮类衍生物抗菌和抗生物膜活性的研究。

关键词：表皮葡萄球菌 YycG抑制剂最低抑菌浓度杀生物膜活性

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雌二醇与重症手足口病患者细胞因子的相关性研究

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微生物与感染 2018年第6期13卷 330-334页

作者：俞慧菊张慧英付卓敏张晓玲宋志刚易志刚上海交通大学医学院附属新华医院上海200092 上海市公共卫生临床中心病原体检测和生物安全部上海201508 复旦大学基础医学院病原生物系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032 上海师范大学第二附属中学上海200540

本研究旨在分析重症手足口病患者体内雌二醇与细胞因子的相关性,为手足口病诊断和救治提供重要依据。收集临床诊断手足口病患儿的标本,用荧光定量反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)进行肠道... 详细信息

本研究旨在分析重症手足口病患者体内雌二醇与细胞因子的相关性,为手足口病诊断和救治提供重要依据。收集临床诊断手足口病患儿的标本,用荧光定量反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)进行肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和其他肠道病毒的检测,同时采用化学发光免疫和Milliplex多因子检测技术分析血清中的雌二醇和细胞因子。结果显示,手足口病重症组、轻症组、健康对照组的雌二醇水平分别为(6.12±6.08)pg/mL、(30.2±10.16)pg/mL、(20.62±7.43)pg/mL,差异有统计学意义;重症组与轻症组之间γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、白细胞介素8(interleukin8,IL-8)和IL-6水平差异有统计学意义,血清中IL-8和IL-6水平与雌二醇水平呈负相关。结果证实,手足口病患儿血清中雌二醇水平与IFN-γ、IL-8和IL-6水平密切相关,可作为重症手足口病临床判断的生物标记,有助于临床判断疾病严重程度,提早干预治疗,为防治重症并发症提供依据。

关键词：手足口病雌二醇细胞因子肠道病毒71型

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丙型肝炎病毒感染过程中其NS3/4A蛋白酶切割线粒体抗病毒信号蛋白的动态过程

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微生物与感染 2017年第5期12卷 270-278页

作者：许军杜晓婷张扬袁正宏易志刚复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

已知丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)可通过其蛋白酶NS3/4A切割线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)来逃逸天然免疫识别,但尚不清楚其切割动力学及切割在抑制干扰素中的作用。本研究旨在细胞模... 详细信息

已知丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)可通过其蛋白酶NS3/4A切割线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)来逃逸天然免疫识别,但尚不清楚其切割动力学及切割在抑制干扰素中的作用。本研究旨在细胞模型中探讨HCV感染过程中病毒复制建立及病毒NS3/4A切割MAVS的动态过程,探究NS3/4A切割MAVS对病毒逃逸宿主天然免疫建立感染的贡献。首先构建基于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的MAVS切割报告系统(GFP-NLS-MAVS-TM462),用HCV Jc1-Gluc感染Huh7.5/GFP-NLS-MAVS-TM462细胞。结果显示,病毒复制早期MAVS切割效率较低;NS3/4A高效切割MAVS发生于HCV复制晚期,且其切割效率与NS3蛋白水平相关。利用带有GFP ypet的HCV报告病毒Jc1-378-1感染Huh7.5/RFP-NLS-MAVS-TM462细胞,在单细胞水平观察HCV感染阳性细胞中MAVS被切割情况,发现HCV复制细胞中仅部分细胞MAVS被切割。进一步研究发现,不同基因型NS3/4A切割MAVS的效率仅与NS3表达水平相关。以上结果提示,HCV蛋白酶NS3/4A切割MAVS依赖NS3/4A蛋白在病毒复制过程中的累积,对在病毒复制早期逃逸宿主天然免疫建立感染可能无显著贡献。

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3/4A 线粒体抗病毒信号蛋白干扰素

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实验准备及技术人员在提高医学微生物学教学质量中的作用

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微生物与感染 2017年第6期12卷 355-361页

作者：李雪萍潘婷婷钱利生袁正宏瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

实验课是现代医学微生物学课程中不可或缺的部分。然而,在考虑医学微生物学实验教学改革时,我们往往忽略了实验课教学准备工作及实验技术人员在高质量完成教学任务中的重要性。本文结合复旦大学2000年前、2000—2010年及现阶段医学微生... 详细信息

实验课是现代医学微生物学课程中不可或缺的部分。然而,在考虑医学微生物学实验教学改革时,我们往往忽略了实验课教学准备工作及实验技术人员在高质量完成教学任务中的重要性。本文结合复旦大学2000年前、2000—2010年及现阶段医学微生物学实验教学改革情况,分析并讨论实验课教学准备工作必须考虑的问题及所需实验条件,提出实验技术人员素质及实验课教学准备在保证医学微生物学实验教学质量中的重要性,为医学微生物学实验教学改革提供借鉴。

关键词：医学微生物学医学微生物学实验课实验准备实验室生物安全实验技术人员

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葡萄球菌CRISPR/Cas系统

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微生物与感染 2017年第4期12卷 254-262页

作者：叶立娜陈力瞿涤复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白[clustered regularly interspaced short palindromic repeat(CRISPR)/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas]是原核生物在进化过程中形成的获得性免疫系统,能抵抗噬菌体、质粒及可移动遗传因子等外源性DNA或RNA的入侵。目前,在多种葡萄球菌基因组中均发现CRISPR序列存在,其间隔序列通常与葡萄球菌的噬菌体或接合性质粒具有同源性,可能对葡萄球菌的毒力、耐药性传递和生物膜形成等生理学特性有影响。本文在简单介绍细菌CRISPR/Cas系统的基础上,对葡萄球菌CRISPR/Cas系统的构成、防御机制等进行综述。

关键词：成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白葡萄球菌外源性核酸噬菌体

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应用iTRAQ定量蛋白质组学研究海分枝杆菌mkl的基因功能

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微生物学报 2016年第9期56卷 1496-1503页

作者：施旭骏赵超牛辰高谦复旦大学基础医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴... 详细信息

【目的】通过分离海分枝杆菌野生株和mkl突变株的全菌蛋白,并进行差异蛋白质组分析,以期为探索分枝杆菌重要毒力基因mkl的功能提供新思路。【方法】以海分枝杆菌野生株和mkl突变株为研究材料,提取全菌蛋白,i TRAQ试剂标记后进行质谱鉴定和定量分析,并利用Uni Prot数据库对差异蛋白进行生物信息学分析。【结果】共鉴定出在野生株和mkl突变株中差异表达蛋白566个,其中在突变株中上调表达蛋白232个(比值≥1.4),下调表达蛋白334个(比值≤0.7)。生物信息学预测这些蛋白主要参与细菌脂质代谢、细胞壁和细胞进程、中间代谢、呼吸作用等生物学功能。其中Des A3下调最显著,其功能为脂肪酸去饱和酶,与油酸合成相关,进一步验证发现mkl突变株在不含油酸的固体培养基中生长受限,提示mkl可能在油酸的生物合成通路中发挥功能。【结论】通过i TRAQ分析了海分枝杆菌mkl突变株和野生株的差异表达蛋白谱,发现可能影响分枝杆菌油酸、脂质等合成代谢通路,为进一步研究mkl基因在分枝杆菌致病中发挥作用的相关机制奠定了基础。

关键词：分枝杆菌定量蛋白质组学 iTRAQ mkl基因

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