检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2021年第2期16卷 79-87页

作者：田青右朱园飞常豪于琳邓强复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介... 详细信息

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGFP)作为外显肽,建立EGFP^(N1-8)/EGFP^(C9-11)和sfGFP^(N1-10)/sfGFP^(C11)蛋白分裂系统。基于ΔHBc113载体,分别构建EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子;应用DNA印迹法(Southern blotting)验证两种rHBV载体的细胞内复制能力。结果显示,构建的HBV1.1-ΔHBc113复制子载体能够在HBc反式互补条件下在转染细胞中形成病毒复制。构建的EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子能够支持HBc互补条件下的细胞内病毒复制,并产生子代病毒颗粒;HBV重组复制子表达的EGFP^(C9-11)或sfGFP^(C11)蛋白在共表达氮端蛋白EGFP^(N)/sfGFP^(N)细胞中,通过intein介导的蛋白质高效拼接,能够形成完整的、有功能的GFP。结果表明,构建的荧光蛋白重组HBV复制子系统能够为HBV高通量药物筛选和HBV易感性研究提供实验工具,具有重要的病毒学意义和应用前景。

关键词：乙型肝炎病毒复制子内含肽绿色荧光蛋白分裂肽

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影像导航技术在鼻内镜手术中的应用

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河南大学学报（医学版） 2022年第1期41卷 1-7页

作者：胡贤洋田腾飞张雪琰复旦大学上海医学院基础医学院医学微生物与寄生虫学教研室暨医学分子病毒学教育部/国家卫生健康委/中国医学科学院重点实验室上海200030 复旦大学附属华东医院耳鼻咽喉头颈外科上海200040 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科头颈外科上海200030

随着鼻内镜手术的使用范围不断扩大,手术的适应证不断增加,所牵涉的重要结构越来越多,随之而来的是并发症的风险越来越高。影像导航系统作为一种手术辅助系统,能够帮助术者在术中追踪和判断重要结构,节省手术时间,降低手术风险,已经在... 详细信息

随着鼻内镜手术的使用范围不断扩大,手术的适应证不断增加,所牵涉的重要结构越来越多,随之而来的是并发症的风险越来越高。影像导航系统作为一种手术辅助系统,能够帮助术者在术中追踪和判断重要结构,节省手术时间,降低手术风险,已经在鼻窦和颅底的鼻内镜手术中得到广发的应用。同时,当前影像导航系统仍存在许多亟待解决的问题。希望在各方的共同努力下,影像导航系统会变得越来越成熟,在鼻内镜手术中发挥越来越重要的作用。

关键词：影像导航系统(IGS) 鼻内镜外科手术

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肠球菌属生物膜表型和基因型相关性分析

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中国感染与化疗杂志 2020年第2期20卷 157-162页

作者：丁丽吴旸李培林东昉复旦大学附属华山医院抗生素研究所国家卫健委抗生素临床药理重点实验室上海200040 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室

目的了解肠球菌属生物膜形成能力及其毒力基因携带率,分析生物膜的形成能力与毒力基因间的相关性。方法收集复旦大学附属华山医院2015-2017年临床分离自无菌体液的肠球菌属细菌,使用结晶紫染色法测定肠球菌的生物膜形成能力并进行形成... 详细信息

目的了解肠球菌属生物膜形成能力及其毒力基因携带率,分析生物膜的形成能力与毒力基因间的相关性。方法收集复旦大学附属华山医院2015-2017年临床分离自无菌体液的肠球菌属细菌,使用结晶紫染色法测定肠球菌的生物膜形成能力并进行形成能力的强弱分级,采用PCR方法筛查7种常见的肠球菌毒力基因以及Fsr群体感应系统基因(fsrA、fsrB、fsrC)。结果共收集了112株肠球菌菌株,其中粪肠球菌52株,屎肠球菌60株;两者生物膜形成的阳性率分别为63.46%和13.33%,差异具有统计学意义(P<0.001)。52株粪肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 40.38%、gelE 69.23%、sprE 73.08%、asa157.69%、cylA 46.15%、cylB 48.08%、cylM 50.00%、fsrA 40.38%、fsrB 42.31%、fsrC 80.77%,携带esp、asa1、cylA、cylB、cylM和fsrB基因的菌株更易形成生物膜。60株屎肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 65.00%、gelE 10.00%。结论粪肠球菌比屎肠球菌更容易形成生物膜;多种毒力基因与生物膜形成相关,提示生物膜的形成并不是由单一基因调控,而是由多个基因多系统调控。

关键词：肠球菌生物膜毒力基因

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人类诺如病毒反向遗传体系的构建与验证

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微生物与感染 2021年第2期16卷 71-78页

作者：陈水叶宋武慧易志刚复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构... 详细信息

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构建质粒pU201和pEF-1α-U201及对应的病毒RNA聚合酶失活的突变质粒。在COS 7细胞和Huh 7细胞中分别共转染T7聚合酶与pU201以及单独转染pEF-1α-U201,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后不同时间点细胞内病毒RNA水平。结果显示,与对照组相比,pU201和pEF-1α-U201的病毒RNA水平升高约2倍和3倍。为便于检测HuNoV复制,在pU201和pEF-1α-U201质粒中分别插入NanoLuc TM荧光素酶报告基因,并命名为pU201-Nluc和pEF-1α-U201-Nluc。将质粒分别转染COS 7细胞和Huh 7细胞,检测转染后不同时间点Nluc荧光素酶活性。结果显示,pEF-1α-U201-Nluc的Nluc荧光素酶活性相较于对照组增高近2倍,而pU201-Nluc无明显升高,提示EF-1α启动子起始病毒复制优于T7启动子。为寻找优于HuNoV GⅡ.3 U201的HuNoV序列,合成HuNoV GⅡ.4临床病毒株全长序列,将其插入EF-1α启动子载体中并转染细胞,于不同时间点检测上清及细胞中病毒RNA水平。结果显示,上清及细胞中病毒RNA水平与对照组相比无显著差异。以上结果提示,已报道可复制的HuNoV GⅡ.3 U201反向遗传体系复制效率有限,且HuNoV反向遗传体系复制能力可能与不同序列的病毒相关。

关键词：人类诺如病毒 T7启动子 EF-1α启动子感染性克隆亚基因组克隆临床病毒株

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我国学校结核病预防与控制的思考

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中国防痨杂志 2020年第3期42卷 195-199页

作者：高谦梅建复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 200032 澳门特别行政区卫生局结核病防治中心

学校结核病防控一直是我国结核病防治工作的重点,学校结核病控制涉及千家万户,政策性强,稍有不当,会造成很大的社会影响。作者对学校结核病防控的重点人群、暴发公共卫生事件的定义,以及学生结核病休复学问题提出了一些不同见解.希望引... 详细信息

学校结核病防控一直是我国结核病防治工作的重点,学校结核病控制涉及千家万户,政策性强,稍有不当,会造成很大的社会影响。作者对学校结核病防控的重点人群、暴发公共卫生事件的定义,以及学生结核病休复学问题提出了一些不同见解.希望引起业界同道的关注、思考和讨论.更好地为政府制定切实可行和有效的学校结核病控制策略提供科学依据。

关键词：结核院校综合预防传染病控制

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结核免疫应答相关白细胞介素的作用机制研究进展

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微生物与感染 2022年第1期17卷 41-46页

作者：刘曦沈洪波王菲菲徐军发广东医科大学检验医学研究所临床免疫学研究室广东东莞523808 同济大学附属上海市肺科医院结核病临床研究中心上海200433 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

白细胞介素(简称白介素)能够调控免疫细胞的分化、增殖及效应功能。结核抗原特异性诱导的白介素的表达水平能够表征结核杆菌感染后的机体状态。在机体的抗结核免疫应答中,白介素可以直接调控吞噬细胞对胞内感染结核杆菌的杀菌活性;也能... 详细信息

白细胞介素(简称白介素)能够调控免疫细胞的分化、增殖及效应功能。结核抗原特异性诱导的白介素的表达水平能够表征结核杆菌感染后的机体状态。在机体的抗结核免疫应答中,白介素可以直接调控吞噬细胞对胞内感染结核杆菌的杀菌活性;也能够调控效应性T细胞的增殖,并进一步激活吞噬细胞的杀菌功能。目前,部分白介素已被证明有望用于结核病的免疫辅助治疗,正在进行相关临床实验。本文对白介素调控免疫细胞抗结核免疫应答的研究进展进行综述,以期为制定结核病的白介素免疫辅助治疗方案提供指导。

关键词：白细胞介素抗结核免疫结核病辅助治疗

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干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈

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临床肝胆病杂志 2019年第6期35卷 1181-1187页

作者：陈捷亮袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室

目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈... 详细信息

目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈的关键核心。鉴于cccDNA很难被彻底清除,近年来以cccDNA持续沉默为基础的慢性乙型肝炎功能性治愈已成为临床和基础研究的主要目标。从现有治疗手段对cccDNA的影响切入,介绍当前对cccDNA含量和活性受控因素的认知,探讨cccDNA池难以清除的关键特性环节,在此基础上展望功能性治愈慢性乙型肝炎目标下研究cccDNA的重点。

关键词：乙型肝炎病毒抗病毒药共价闭合环状DNA

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深圳市耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变特征分析

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中国防痨杂志 2020年第6期42卷 583-589页

作者：洪创跃杨婷婷李金莉李霜君吴利凯杨争谭卫国深圳市慢性病防治中心实验室研究所和结核病防治科 518020 复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫生健康委员会、医科院医学分子病毒学重点实验室

目的利用全基因组序列分析方法研究深圳市耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)的耐药基因突变类型特点,为耐药结核病的快速分子检测提供依据。方法对2013—2017年深圳市慢性病防治中心及各区慢性病防治院门诊收集的所有449株MDR-MTB临床分离株... 详细信息

目的利用全基因组序列分析方法研究深圳市耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)的耐药基因突变类型特点,为耐药结核病的快速分子检测提供依据。方法对2013—2017年深圳市慢性病防治中心及各区慢性病防治院门诊收集的所有449株MDR-MTB临床分离株进行全基因组测序,经与结核分枝杆菌标准菌株(H37Rv)基因组模板序列比对后获得447株满足分析要求的全基因组测序菌株。每株菌株经单核苷酸多态性(SNP)鉴定后与H37Rv各基因型和亚型的特异性突变和对11种抗结核药品已知的耐药基因突变进行比对,获得各菌株独属的基因型或亚型和耐药基因突变,并分析不同药品耐药基因中的主要耐药突变类型不同基因型或亚型间的相关性。结果447株MDR-MTB中全基因组测序结果显示,432株(96.6%)发生基因突变,MTB对11种药品主要的耐药突变类型分别为katG-315-S/T[INH,81.7%(353/432)]、rpoB-450-S/L[RFP,59.7%(258/432)]、rpsL-43-K/R[Sm,66.0%(198/300)]、embB-306-M/V[EMB,35.5%(94/265)]、pncA启动子-11-T/C[PZA,8.9%(11/123)]、gyrA-90-A/V[Ofx,31.5%(39/124)]、rrs-1401-A/G[Am,48.1%(25/52)]、rrs-1401-A/G[Cm,100.0%(27/27)]、rrs-1401-A/G[Km,84.4%(27/32)]、inhA-15-C/T[Eto,84.2%(48/57)]、thyA-75-H/N[PAS,31.3%(10/32)],且发现存在2种及2种以上联合突变者有对INH、RFP、EMB和Sm耐药的菌株。深圳市MDR-MTB菌株的3个基因型为L1[0.4%(2/447)]、L2[84.6%(378/447)]和L4[15.0%(67/447)]型,其中L2型又分为3个亚型[L2.1型:1.9%(7/378)、L2.2型:37.0%(140/378)、L2.3型:61.1%(231/378)]。突变类型为katG-315-S/T、rpsL-43-K/R和embB-306-M/V在L2型菌株中的突变率[分别为79.6%(301/378)、50.5%(191/378)、23.0%(87/378)]明显高于L4型菌株[分别为61.2%(41/67)、10.4%(7/67)、10.4%(7/67)](χ~2值分别为10.874、37.021、5.396,P值分别为0.001、0.000、0.020),且PAS耐药突变类型folC43-I/T和thyA-75-H/N仅出现在L2型菌株中;其中katG-315-S/T在L2.2型菌株中突变频率[88.6%(124/140)]高于L2.3型[74.5%(172/231)](χ~2=10.764,P=0.000),而inhA-15-C/T(INH)、rpoB-450-S/L、rpsL-43-K/R和inhA-15-C/T(Eto)在L2.3型菌株中的突变频率[分别为8.2%(19/231)、61.9%(143/231)、59.3%(137/231)、15.6%(36/231)]明显高于L2.2型[分别为2.9%(4/140)、49.3%(69/140)、37.9%(53/140)、3.6%(5/140);χ~2值分别为4.319、5.668、16.053、12.797,P值分别为0.038、0.017、0.000、0.000)]。结论深圳市MDR-MTB菌株中11种药品耐药基因主要突变类型分别为katG-315-S/T、rpoB-450-S/L、rpsL-43-K/R、embB-306-M/V、pncA启动子-11-T/C、gyrA-90-A/V、rrs-1401-A/G、inhA-15-C/T、thyA-75-H/N;基因型为L1、L2和L4型,以L2.2型、L2.3型和L4型为主。

关键词：结核,抗多种药物性基因组,细菌高通量核苷酸测序基因型寡核苷酸序列分析深圳

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基于gp41近膜端外部区域中和表位天然构象的人类免疫缺陷病毒1型疫苗的设计

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微生物与感染 2021年第3期16卷 145-163页

作者：曹妙苏珊叶玲陆路杨庆来姜世勃复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 埃默里大学医学院微生物与免疫学系埃默里疫苗中心美国亚特兰大GA30322

疫苗一直被视为终结人类免疫缺陷病毒1型和2型(human immunodeficiency virus type 1/2,HIV-1/2)最有力的武器。位于HIV-1gp41胞外域C末端的近膜端外部区域(membrane-proximal external region,MPER)是一个重要的抗原位点,但糖蛋白41(glycoprotein 41,gp41)在野生型HIV-1的包膜蛋白中并未充分暴露,单独的gp41或MPER多肽无法模拟gp120/gp41包膜蛋白在病毒包膜上的天然状态。本研究以HIV-1gp41MPER为抗原进行疫苗设计,以期能诱导产生具有强效中和作用的MPER特异性抗体。通过在gp41的N末端七肽重复域(N-terminal heptad repeat,NHR)和C末端七肽重复域(C-terminal heptad repeat,CHR)引入突变,阻断二者相互作用形成6螺旋(6-helix bundle,6-HB)构象;使用不同来源的流感病毒HA1亚基替代gp120,以防止机体产生大量针对HA1的抗体,并构建一系列包含不同HA1亚基的HA/gp41-1605嵌合DNA。结果发现,在细胞上表达的嵌合疫苗抗原能更好地展示MPER上的中和表位,但不显示gp41上免疫优势抗原表位。使用构建的HA/gp41嵌合DNA疫苗对新西兰大耳兔进行肌肉内序贯免疫,提示该疫苗策略的确不可诱生高滴度的HA抗体或gp41的loop及6-HB特异性抗体,而能诱生MPER特异性抗体。然而,该抗体对HIV-1不具有中和作用,说明该疫苗策略还有待进一步优化。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型疫苗糖蛋白41 近膜端外部区域天然构象

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免疫治疗的展望与思考

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世界科学 2020年第2期 39-40页

作者：闻玉梅中国工程院复旦大学上海医学院、教育部/卫健委医学分子病毒学实验室

免疫治疗的发展几起几落。从19世纪末法国著名微生物学家巴斯德(Pasteur)研制出狂犬疫苗治疗狂犬病,到医学科学家科赫(Koch)的结核菌素(OT)治疗,再到赖特(Wright)的细菌治疗慢性细菌感染,免疫治疗经历了蓬勃发展。然而,1948年抗生素及... 详细信息

免疫治疗的发展几起几落。从19世纪末法国著名微生物学家巴斯德(Pasteur)研制出狂犬疫苗治疗狂犬病,到医学科学家科赫(Koch)的结核菌素(OT)治疗,再到赖特(Wright)的细菌治疗慢性细菌感染,免疫治疗经历了蓬勃发展。然而,1948年抗生素及药物出现后,免疫治疗进入了下降期。但随着耐药性问题的出现,并由于慢性感染、肿瘤及自身免疫病治疗的需求,免

关键词：免疫治疗治疗性疫苗免疫学家

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