检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2004年第1期20卷 112-118页

作者：雷霆雯梁玉龙查锡良贵阳医学院生物化学教研室贵阳550004 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

为了进一步阐明整合蛋白α5 β1过表达诱导非粘着状态的人肝癌细胞SMMC 772 1失巢凋亡的机理 ,利用poly HEME阻断细胞贴壁 ,诱导失巢凋亡 ,在poly HEME包被的 96孔板中检测细胞生存率 .利用Western印迹法检测了与细胞信号转导密切相关... 详细信息

为了进一步阐明整合蛋白α5 β1过表达诱导非粘着状态的人肝癌细胞SMMC 772 1失巢凋亡的机理 ,利用poly HEME阻断细胞贴壁 ,诱导失巢凋亡 ,在poly HEME包被的 96孔板中检测细胞生存率 .利用Western印迹法检测了与细胞信号转导密切相关的粘着斑激酶 (FAK)、蛋白激酶B(PKB)及生存蛋白survivin的表达水平 .α5 β1过表达细胞株在去粘附状态下的生存率明显低于对照细胞 .在生长 8d时 ,以整合蛋白不同亚单位转染的α5 β1 772 1、β1 772 1和α5 772 1细胞 ,活细胞数分别降至对照组的 4 0 %、4 5 %和 83% .这说明整合蛋白α5 β1过表达细胞株 ,特别是α5 β1 772 1和 β1 772 1细胞的失巢凋亡明显加快 .细胞悬浮生长 2 4h后 ,α5 β1过表达细胞株都有不同程度的凋亡发生 ;同时粘着斑激酶 (FAK)和蛋白激酶B(PKB)表达量及其磷酸化水平均低于对照细胞 ,而survivin表达水平在α5 β1 772 1中最高 ,在 β1 772 1中最低 .在给予天然细胞外基质纤粘连蛋白的条件下 ,α5 β1 772 1和 β1 772 1细胞的FAK和PKB的磷酸化水平却呈升高趋势 .结果说明 ,FAK和PKB的变化与细胞的粘附状态密切相关 ,并且参与整合蛋白α5 β1过表达细胞在去粘附状态下失巢凋亡的发生 .

关键词：整合蛋白失巢凋亡粘着斑激酶蛋白激酶B 肝癌细胞

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单次静脉注射嘌呤霉素氨基核苷所致大鼠肾病模型的优化及评价

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复旦学报（医学版） 2005年第4期32卷 488-492页

作者：刘丽华朱春芳欧周罗绍兴文理学院医学院生物化学教研室绍兴312000 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

目的明确大鼠嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型的适宜条件和病程演变,为该模型更好地用于肾病综合征、肾硬化发病机制及治疗的研究奠定基础.方法用6周龄雄性Wistar大鼠,一次性颈静脉注射PAN,分别以2、3、4、5、... 详细信息

目的明确大鼠嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)肾病模型的适宜条件和病程演变,为该模型更好地用于肾病综合征、肾硬化发病机制及治疗的研究奠定基础.方法用6周龄雄性Wistar大鼠,一次性颈静脉注射PAN,分别以2、3、4、5、7、9 mg/100 g体重的剂量给药,以等量生理盐水作对照,测定2周内不同时间点的尿蛋白排泄量;另以9 mg/100 g体重的剂量给药,观察28周内尿蛋白、血清胆固醇和三酰甘油的变化及肾组织的病理改变.结果各个剂量的PAN均可引起不同程度的蛋白尿,约在10～14 d达到高峰,最高达(592.0±61.0)mg/24 h.28周连续观察的结果显示,PAN组动物的尿蛋白呈现典型的双相曲线,即第2周达到高峰,伴有血清胆固醇及三酰甘油的升高,此后逐渐降至接近正常,但自第12周起尿蛋白再度逐渐上升,第28周可达急性期峰值的一半.结论6周龄雄性Wistar大鼠,一次性颈静脉注射适量PAN可建立不同程度的肾病模型,成功率极高,方法简单,用药量省,动物价廉易得,且急性期发病快而周期短,不失为研究人类相应疾病的良好模型.

关键词：肾病模型嘌呤霉素氨基核苷单次静脉注射 Wistar大鼠血清胆固醇优化尿蛋白排泄量三酰甘油不同程度肾病综合征 PAN 病程演变发病机制生理盐水不同时间病理改变连续观察一次性急性期肾硬化剂量肾组织蛋白尿

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弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1重组复性后体外免疫反应性研究

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中国人兽共患病学报 2007年第6期23卷 572-575页

作者：李文姝钟晓芝陈俊张丽芳闵太善黄伟达温州医学院微生物学免疫学教研室温州325032 复旦大学生化与分子生物学实验室上海200433

目的分析基因工程生产的弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)的体外免疫反应性,并对表达产物进行复性处理以获得表达产物的天然构象,为体内免疫学活性的研究作准备。方法重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3... 详细信息

目的分析基因工程生产的弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)的体外免疫反应性,并对表达产物进行复性处理以获得表达产物的天然构象,为体内免疫学活性的研究作准备。方法重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL菌株,经IPTG诱导的表达产物超声破壁后,SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,对产生的重组蛋白ROP2-P30过Sephadex G-25交联葡聚糖柱,经尿素梯度洗脱进行目的蛋白的复性,通过免疫共沉淀反应及免疫印迹实验检测其复性后的重组蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28b/ROP2-P30在大肠杆菌中以融合形式表达,融合表达的产物主要以包涵体形式存在,该重组蛋白复性后具有明显的免疫反应性。结论利用SephadexG-25交联葡聚糖柱尿素梯度可以复性重组的弓形虫复合蛋白ROP2-P30,该蛋白复性后体外具有免疫反应性,可用于进一步开展弓形虫病复合型疫苗的研制工作。

关键词：弓形虫重组蛋白ROP2-P30 免疫活性

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用同源重组法构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库的探索

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复旦学报（医学版） 2007年第4期34卷 599-602页

作者：沈煜申宗候左嘉客同济大学基础医学院组织与胚胎学教研室上海200092 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200092 上海市计划生育科学研究所上海200032

目的探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白。方法利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。采用Strat... 详细信息

目的探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白。方法利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。采用Stratagene RNA prepkit抽提500枚卵母细胞总RNA,应用线性化载体pGADT7-Rec在体构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。结果文库的滴度为3.7×106,重组片段大小主要集中在0.6-0.9kb,重组率为60%。结论所构建的小鼠卵母细胞cDNA文库可用于酵母双杂交筛选。

关键词：酵母双杂交 cDNA文库同源重组小鼠卵母细胞

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透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用

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中国病理生理杂志 2009年第12期25卷 2463-2465页

作者：李文姝孟锐锋张丽芳朱珊丽闵太善温州医学院微生物学免疫学教研室浙江温州325032 复旦大学生化与分子生物学实验室上海200433

目的:研究透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用,初步探讨透明质酸酶在提高质粒DNA分子免疫效应中的应用潜能。方法:弓形虫重组质粒pcROP2-P30联合透明质酸酶以及单独的重组质粒pcROP2-P30肌肉注射免疫BALB/... 详细信息

目的:研究透明质酸酶在弓形虫重组融合抗原ROP2-P30基因免疫中的免疫增强作用,初步探讨透明质酸酶在提高质粒DNA分子免疫效应中的应用潜能。方法:弓形虫重组质粒pcROP2-P30联合透明质酸酶以及单独的重组质粒pcROP2-P30肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,生理盐水和空质粒载体pcDNA3.1作阴性对照免疫,免疫3次,间隔3周。免疫结束后,以纯化的弓形虫重组蛋白ROP2-P30(rROP2-P30)为检测抗原,检测各免疫组小鼠血清中特异性抗体的形成;cell counting kit-8(CCK-8)检测免疫鼠脾细胞的增殖活性;硝酸还原酶法检测免疫鼠脾细胞培养上清中NO的含量。结果:pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组特异性抗体生成水平显著高于其它免疫组(均P<0.01);pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组小鼠脾细胞受特异性抗原rROP2-P30刺激后,其淋巴细胞的增殖明显高于单独的质粒pcROP2-P30免疫组(P<0.01);pcROP2-P30+透明质酸酶免疫组脾细胞培养上清中免疫活性分子NO的含量也显著升高(均P<0.01)。结论:透明质酸酶在提高弓形虫DNA免疫效应方面显示了免疫增强作用,具有发展成为基因免疫的免疫佐剂的潜能。

关键词：透明质酸酶弓形虫免疫增强

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叶黄素对D-半乳糖致氧化损伤小鼠HO-1、TLR4表达的影响

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卫生研究 2010年第4期39卷 430-432页

作者：麦嘉仪沈新南施冬云魏延沈慧吴岷复旦大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室公共卫生安全教育部重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系

目的研究叶黄素缓解D-半乳糖诱导小鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 48只昆明种小鼠随机分为D-半乳糖模型对照组、叶黄素低剂量组(10mg/kg·d)、叶黄素高剂量组(40mg/kg·d)和正常对照组。6周后观察小鼠肝组织活性氧(ROS)、一... 详细信息

目的研究叶黄素缓解D-半乳糖诱导小鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 48只昆明种小鼠随机分为D-半乳糖模型对照组、叶黄素低剂量组(10mg/kg·d)、叶黄素高剂量组(40mg/kg·d)和正常对照组。6周后观察小鼠肝组织活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)含量,总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和线粒体ATP酶(ATPase)活性,RT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平。结果叶黄素低、高剂量组小鼠肝组织ROS含量低于模型对照组(P<0.01);低、高剂量组线粒体Na+-K+-ATP酶及高剂量组线粒体Ca2+-ATP酶活性高于模型对照组(P<0.05);高剂量组TNOS、iNOS活性及NO含量低于模型对照组(P<0.05);高剂量组小鼠肝HO-1mRNA表达高于模型对照组(P<0.05),叶黄素低、高剂量组TLR4mRNA表达均低于模型对照组(P<0.01)。结论叶黄素降低D-半乳糖小鼠氧化应激效应可能与其提高HO-1表达和下调TLR4mRNA表达有关。

关键词：叶黄素氧化应激诱导型一氧化氮合酶血红素氧合酶 toll样受体4 D-半乳糖

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Erufosine对胃癌细胞及骨髓细胞增殖抑制的影响

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中国癌症杂志 2011年第9期21卷 675-680页

作者：贺建宇张利能上海市第六人民医院奉贤分院肿瘤科上海201400 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学教研室上海200032

背景与目的:PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤转化、进展及放化疗抵抗密切相关。因此,此通路是一个潜在的肿瘤靶点。小分子化合物Erufosine为Akt抑制剂,能抑制多种肿瘤细胞生长。本研究观察小分子化合物Erufosine对胃癌细胞和正常骨髓细胞的... 详细信息

背景与目的:PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤转化、进展及放化疗抵抗密切相关。因此,此通路是一个潜在的肿瘤靶点。小分子化合物Erufosine为Akt抑制剂,能抑制多种肿瘤细胞生长。本研究观察小分子化合物Erufosine对胃癌细胞和正常骨髓细胞的增殖及对信号传导分子Akt表达的影响,并探讨其对癌细胞的作用机制。方法:使用MTS方法观察胃癌AGS细胞在Erufosine作用下的增殖抑制,计算其IC50及IC90值;在种植胃癌AGS瘤鼠尾静脉内注射Erufosine,定量计数胃癌AGS细胞、人及鼠骨髓细胞的骨髓克隆形成实验(colony forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM)数,用Western blot法检测Erufosine对AGS瘤细胞Akt表达的影响。结果:Erufosine对胃癌AGS细胞的增殖有明显抑制作用,AGS细胞的IC50和IC90分别为(5.8±2.6)μmol/L和(13.5±4.6)μmol/L;人骨髓细胞的IC50和IC90分别为(96.5±32.6)μmol/L和(232.8±42.8)μmol/L,鼠骨髓细胞的IC50和IC90分别为(65.5±28.6)μmol/L和(228.8±54.8)μmol/L,与对肿瘤细胞的抑制相比,Erufosine对人和鼠骨髓细胞的毒性较低,两组IC50及IC90的差异均有统计学意义(P<0.01)。人和鼠骨髓细胞的CFU-GM抑制较低,人骨髓细胞的CFU-GM IC50和IC90分别为(86.5±18.6)μmol/L和(250.8±48.8)μmol/L,胃癌AGS细胞的CFU-GM IC50和IC90分别为(7.8±2.5)μmol/L和(13.6±3.6)μmol/L,抑制明显,两者的IC90相差约25倍,两组IC50及IC90的差异均有统计学意义(P<0.01);Erufosine抑制胃癌AGS细胞的Akt表达。结论:Erufosine是对胃癌细胞具有明显抑制,且对骨髓有保护作用的新化合物。

关键词： Erufosine 胃癌增殖抑制

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PTEN下调FAK磷酸化来抑制EGFR受体突变体引起的胶质瘤细胞侵袭

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中国癌症杂志 2008年第1期18卷 30-34页

作者：蔡秀梅王丽影查锡良复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学教研室上海200032

背景与目的:抑癌基因PTEN在胶质瘤中突变率达20%～40%,且PTEN缺失和表皮生长因子受体突变体EGFRvⅢ同时存在EGFR表达的胶质瘤组织中。PTEN通过直接与FAK作用从而降低其酪氨酸磷酸化来抑制肿瘤细胞侵袭。EGFRvⅢ表达,PTEN缺失都是肿瘤细... 详细信息

背景与目的:抑癌基因PTEN在胶质瘤中突变率达20%～40%,且PTEN缺失和表皮生长因子受体突变体EGFRvⅢ同时存在EGFR表达的胶质瘤组织中。PTEN通过直接与FAK作用从而降低其酪氨酸磷酸化来抑制肿瘤细胞侵袭。EGFRvⅢ表达,PTEN缺失都是肿瘤细胞侵袭性增加的原因之一。PTEN功能的丧失可能是EGFRvⅢ表达的肿瘤进一步发展成恶性侵袭性肿瘤的原因之一。本文将探讨在EGFRvⅢ表达和PTEN缺失的肿瘤细胞中转入PTEN以观察其是否能抑制EGFRvⅢ所引起的肿瘤细胞的侵袭。方法:将野生型PTEN及其突变体分别导入人胶质瘤细胞U87ΔEGFR中,利用Transwell-细胞侵袭实验观察细胞侵袭运动变化;免疫印迹实验检查FAK磷酸化变化;FAK表达载体来转染FAK磷酸化程度低的U87ΔEGFR-wtPTEN细胞,观察细胞侵袭运动变化。结果:PTEN和PTEN(G129E)能够抑制U87ΔEGFR细胞侵袭,并且下调FAK397位点磷酸化水平。U87ΔEGFR-wtPTEN细胞中FAK397位点磷酸化水平增加伴随着细胞侵袭能力的提高。结论:PTEN可能通过下调FAK397位点磷酸化水平来抑制EGFRvⅢ引起的胶质瘤细胞侵袭。

关键词： PTEN EGFRvm FAK 磷酸化细胞侵袭胶质瘤

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2型糖尿病患者血清番茄红素与体内氧化应激反应的关系

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复旦学报（医学版） 2007年第5期34卷 749-752页

作者：黄玥沈新南李永烶刘珊林复旦大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室上海200032 上海市第八人民医院检验科上海200235 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

目的研究糖尿病(DM)患者血清番茄红素(lycopene,LP)含量与氧化应激反应的关系。方法检测55例2型糖尿病患者和62例对照组血清LP、β-胡萝卜素(β-carotene,β-CAR)和维生素E(Vit.E)含量及血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)... 详细信息

目的研究糖尿病(DM)患者血清番茄红素(lycopene,LP)含量与氧化应激反应的关系。方法检测55例2型糖尿病患者和62例对照组血清LP、β-胡萝卜素(β-carotene,β-CAR)和维生素E(Vit.E)含量及血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量等指标,采用t检验、相关分析和多元回归分析等进行医学统计分析。结果DM组血清LP[(0.27±0.15)vs(0.33±0.14),μg/mL],SOD[(89.32±12.23)vs(106.43±14.19),U/mL],GSH-Px[(148.06±8.94)vs(195.23±8.85),U/mL],T-AOC[(10.14±1.14)vs(14.29±1.51),U/mL]水平均明显低于对照组(P<0.05),血清MDA含量高于对照组[(5.91±1.34)vs(4.86±1.30),nmol/mL](P<0.01)。血清LP含量与MDA的相关系数为负值,与血清SOD、GSH和T-AOC等的相关系数为正值(P<0.01)。进一步的多因素分析发现,控制BMI、年龄等因素后,血清LP与血清MDA含量呈负相关,与血清GSH-Px和T-AOC呈正相关。结论血清LP可能是影响2型DM患者体内氧化应激反应的因素,随着血清LP水平增高,2型DM患者血清MDA含量降低,GSH-Px活力及T-AOC水平提高。

关键词：糖尿病血清番茄红素氧化应激

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P13K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

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生物化学与生物物理进展 2008年第11期35卷 1263-1269页

作者：傅奕方征宇王丽影李增霞杨勇查锡良复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系扬州大学医学院生化教研室

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断P13K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY29400... 详细信息

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断P13K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断P13K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的rnRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染P13K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,P13K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

关键词： P13K 信号通路 p27 Skp2 Akt 蛋白质降解

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