检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 2005年第12期28卷 845-848页

作者：郝方裴秀英张雪莲张顺宝赖煦卉王洪海复旦大学遗传所上海现在200433 宁夏医学院生物化学和分子生物学教研室

目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂... 详细信息

目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白,并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶。酶学性质测定分析表明,重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102μ***-1.m in-1,反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-C l缓冲液、pH值7.8、25℃条件下,重组ICL的二级结构中相对有43.8%的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9%无规则卷曲。结论本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白,为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。

关键词：分枝杆菌,结核异柠檬酸裂解酶基因表达

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DAPK基因CpG岛的异常甲基化在人膀胱癌组织中的意义

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中华实验外科杂志 2008年第5期25卷 622-624,F0003页

作者：胡礼炳王国民张利能复旦大学附属中山医院泌尿外科上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学教研室

目的探讨DAPK基因CpG岛的异常甲基化在膀胱癌组织中的意义。方法选择临床膀胱癌组织标本24例和癌旁组织标本22例进行研究。用免疫组织化学和Western blot方法分别检测DAPK基因和DNMTl基因在不同组织中的表达情况。采用甲基化特异PCR（MS... 详细信息

目的探讨DAPK基因CpG岛的异常甲基化在膀胱癌组织中的意义。方法选择临床膀胱癌组织标本24例和癌旁组织标本22例进行研究。用免疫组织化学和Western blot方法分别检测DAPK基因和DNMTl基因在不同组织中的表达情况。采用甲基化特异PCR（MSP）方法检测不同组织标本中DAPK基因的甲基化状态。结合上述结果分析DAPK基因甲基化及其表达状态与肿瘤之间的关系。结果DAPK基因表达于细胞质及胞膜，在正常膀胱黏膜中强表达，在膀胱癌组织中弱表达或不表达。在膀胱癌组织中有14例（14／24，58．3％）检测到DAPK基因的甲基化改变，而正常组织中未检测到其甲基化。甲基化改变与肿瘤病理分级无显著相关性，但是与肿瘤肌层浸润（P〈0．05）及复发（P〈0．05）明显相关。结论DAPK基因的甲基化改变可能是肿瘤复发的一个重要预测指标。肿瘤组织中DNMTl的高表达提示其在调节肿瘤组织抑癌基因甲基化中发挥重要作用。

关键词：膀胱癌甲基化蛋白激酶

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VEGF siRNA降低人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性

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分子细胞生物学报 2007年第5期40卷 277-285页

作者：黄建王海波葛盛芳贾仁兵黄青山郑新民上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 复旦大学遗传学研究所上海200433

本研究应用RNA干扰(RNAi)技术高效抑制VEGF的表达,明显降低了人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性。化学合成针对人VEGF基因的siRNA,体外瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721,RT-PCR和Elisa法检测表明VEGF siRNA实验组与对照组相比,细胞内VEGF mRNA... 详细信息

本研究应用RNA干扰(RNAi)技术高效抑制VEGF的表达,明显降低了人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性。化学合成针对人VEGF基因的siRNA,体外瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721,RT-PCR和Elisa法检测表明VEGF siRNA实验组与对照组相比,细胞内VEGF mRNA表达下降了76.16%,VEGF分泌蛋白表达则下降了96.28%,而MTT法结果显示VEGF siRNA对SMMC7721细胞增殖没有明显作用。体内实验中,不同时间对荷SMMC7721细胞瘤裸小鼠进行siRNA直接瘤内注射,同时测量瘤体积,最后取瘤块进行组织切片观察并进行分子生物学分析,结果显示,与对照组相比,VEGF siRNA实验组肿瘤体积明显缩小,瘤内出现细胞坏死,同时肿瘤组织中VEGF mRNA和蛋白表达水平均明显降低。

关键词：小干扰RNA VEGF SMMC7721细胞

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可溶性CD40配体的表达及其对树突状细胞和恶性B细胞的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第6期32卷 562-568页

作者：时宏珍黄伟达王月丹鲁严江阳张学光复旦大学生命科学院生物化学和分子生物学实验室!上海200433 苏州医学院免疫教研室!苏州215007

CD4 0配体 (CD4 0L)是TNF超家族成员 ,表达于人活化的CD4 + T细胞表面 ,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相应受体CD4 0分子相互作用 ,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD4 0L全长cDNA质粒中扩增CD4 0L胞外段编码cD... 详细信息

CD4 0配体 (CD4 0L)是TNF超家族成员 ,表达于人活化的CD4 + T细胞表面 ,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相应受体CD4 0分子相互作用 ,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD4 0L全长cDNA质粒中扩增CD4 0L胞外段编码cDNA ,即可溶性CD4 0L(sCD4 0L)编码cDNA ,并克隆入 pSK质粒 ;cDNA序列经测序证实后与 pPICZαA质粒重组构建成 pPICZαA sCD4 0L分泌型表达载体并在GS1 1 5毕氏酵母菌株中成功地表达出人可溶性CD4 0配体(rhsCD4 0L) ,最高表达量为 35mg/L(培养上清 )。结果显示 :在无TNFα存在时 ,重组人可溶性CD4 0L(rhsCD4 0L)可有效地诱导人外周单核细胞向树突状细胞 (DC)的分化 ,具有典型的DC形态特征和特殊表面标志 (CD1a、CD80、CD83等 ) ,为DC在体外的大量扩增提供新手段 ;进一步研究发现 ,rhsCD4 0L能直接并显著地抑制恶性淋巴瘤细胞株Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG 2的体外增殖 ;并证实rhsCD4 0L与CD4 0L基因转染细胞 (L/CD4 0L TC)一样 ,在体外均诱导XG2细胞的凋亡 ;rhsCD4 0L有希望成为一种重要的免疫调节剂和新的抗肿瘤药物

关键词： CD40配体毕氏酵母树突状细胞恶性B细胞

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新型抗肿瘤转移多肽-三聚β肽(β3)在大肠杆菌中的表达及其抗粘附作用

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生物工程学报 2005年第4期21卷 558-562页

作者：王松梅朱珺李岩潘銮凤查锡良刘银坤复旦大学上海医学院分子生物学实验室上海200032 上海市第六人民医院药剂科上海200032 复旦大学中山医院肝癌研究所上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

自行设计了抗肿瘤转移多肽-三聚β肽(β3),人工合成了β3的基因片段,构建了β3的表达质粒pET_His_β3,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。在用IPTG诱导1·5h后可见明显的His_β3融合蛋白的表达,表达产物约占细胞总蛋白的4%,占细胞总... 详细信息

自行设计了抗肿瘤转移多肽-三聚β肽(β3),人工合成了β3的基因片段,构建了β3的表达质粒pET_His_β3,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。在用IPTG诱导1·5h后可见明显的His_β3融合蛋白的表达,表达产物约占细胞总蛋白的4%,占细胞总不溶性蛋白的10%。每升pET_His_β3/BL21(DE3)plysS细菌培养液用金属螯合琼脂糖凝胶6BFF分离后可回收纯度为92·2%的β3产物约20mg。所表达出的β3肽对人肝癌细胞株SMMC_7721细胞及人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)粘附具有特异的抑制作用,呈现剂量效应相关关系和时间效应相关关系,抑制作用强于β肽(β1)、3倍浓度的β1(3×β1)和GRGDS。研究结果表明:pET_His_β3/BL21(DE3)plysS是β3适合的表达系统;表达的β3肽具有特异的抗肿瘤细胞粘附作用。

关键词：基因工程抗粘附多肽表达肝癌

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葡萄糖对表皮葡萄球菌生物被膜形成的影响及调节机制的研究

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微生物学报 2005年第3期45卷 431-436页

作者：靳嘉巍张力查锡良李华林瞿涤复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系卫生部糖复合物重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系卫生部糖复合物重点实验室室上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA合成,合成PIA的糖基转移酶由icaADBC基因编码。以生物被膜形成能力不同的菌株为对象,通过研究不同环境对生物被膜形成... 详细信息

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA合成,合成PIA的糖基转移酶由icaADBC基因编码。以生物被膜形成能力不同的菌株为对象,通过研究不同环境对生物被膜形成、细菌总糖量及相关基因表达的变化,探索外界环境对生物被膜形成的影响及葡萄糖对生物被膜诱导的分子机制。有利于生物被膜形成培养条件促进生物被膜形成及多糖的表达,葡萄糖能诱导ica基因的表达和生物被膜形成,ica基因的反义寡核苷酸(ODN)能对抗葡萄糖的作用;葡萄糖作用下不同生长周期生物被膜形成相关基因ica、icaR、AtlE表达不同。表皮葡萄球菌生物被膜的形成与细菌糖代谢有关,葡萄糖通过上调ica表达诱导生物膜形成,但不需要ica基因的持续表达;

关键词：表皮葡萄球菌生物被膜多聚β-1 6-2脱氧-2-氨基-D-吡喃葡萄糖(PLA) 反义寡核苷酸(ODN) ica AtlE

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葡萄糖类似物甲基葡萄糖对表皮葡萄球菌生物被膜形成的影响及调节机制的研究

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微生物学报 2005年第6期45卷 930-936页

作者：靳嘉巍查锡良李华林瞿涤复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系卫生部糖复合物重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA的合成,PIA合成与细菌糖代谢相关。通过研究葡萄糖类似物甲基葡萄糖(MethylDglucoside,MG)对生物被膜的形成及相关基... 详细信息

生物被膜(Biofilm)是条件致病菌表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的主要致病因素,生物被膜的形成依赖多糖PIA的合成,PIA合成与细菌糖代谢相关。通过研究葡萄糖类似物甲基葡萄糖(MethylDglucoside,MG)对生物被膜的形成及相关基因表达的影响,考察生物被膜形成的调控机制并寻找抑制生物被膜形成的方法。甲基葡萄糖能抑制97337株生物被膜的形成,而且不同浓度的甲基葡萄糖对生物膜作用不同。甲基葡萄糖对97337株生物被膜形成的早期的粘附有较强的抑制作用;不同浓度的甲基葡萄糖处理后对ica和AtlE基因的mRNA表达水平影响不大,但能诱导agr基因的表达,这与甲基葡萄糖处理不同时间后的结果一致;而且甲基葡萄糖处理后97337的表面相关蛋白的组成明显改变。甲基葡萄糖对生物膜的抑制并不直接由于它对生长的抑制,它对细菌生长和生物被膜形成的抑制与其在细菌糖代谢中的竞争性相关;甲基葡萄糖能通过调控agr基因的表达改变细菌表面从而抑制97337的早期粘附和生物被膜的形成,但没有通过调控icaADBC、icaR的表达抑制生物膜的形成,可能与其对合成PIA相关糖基转移酶的竞争性抑制相关。

关键词：表皮葡萄球菌生物被膜多聚β-1 6-2脱氧-2-氨基-D-吡喃葡萄糖(PIA) 2-脱氧葡萄糖甲基葡萄糖 ica AtlE

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弓形虫棒状体蛋白2和膜表面蛋白1融合基因的克隆与表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第6期23卷 415-418页

作者：李文姝陆惠民闵太善黄伟达温州医学院微生物免疫学教研室温州325032 苏州大学医学院苏州215006 复旦大学生物化学与分子生物学实验室上海200433

目的进行弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合基因的克隆与表达,为弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的制备做准备。方法半套式PCR扩增编码弓形虫P30的基因片段,克隆至已构建成功的重组质粒pUC119/ROP2中,经PCR和酶切鉴定正确... 详细信息

目的进行弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合基因的克隆与表达,为弓形虫ROP2-P30基因工程复合抗原的制备做准备。方法半套式PCR扩增编码弓形虫P30的基因片段,克隆至已构建成功的重组质粒pUC119/ROP2中,经PCR和酶切鉴定正确的重组质粒pUC119/ROP2-P30再以SacⅠ/HindⅢ双酶切克隆至表达载体pET28b上,鉴定正确的重组质粒pET28b/ROP2-P30转化大肠埃希菌表达菌株BL21-Codon Plus(DE3)-RIL,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出700 bp P30基因片段,成功构建重组质粒pET28b/ROP2-P30,该质粒经PCR和酶切鉴定,与预期结果一致,并在大肠埃希菌中高效表达,产生相对分子质量(Mr)约为69 000的重组目的蛋白。结论弓形虫ROP2和P301融合基因克隆成功,并表达出预期的复合重组蛋白ROP2-P30。

关键词：弓形虫棒状体蛋白膜表面蛋白1 克隆表达

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用同源重组法构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库的探索

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复旦学报（医学版） 2007年第4期34卷 599-602页

作者：沈煜申宗候左嘉客同济大学基础医学院组织与胚胎学教研室上海200092 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200092 上海市计划生育科学研究所上海200032

目的探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白。方法利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。采用Strat... 详细信息

目的探索卵巢成熟及明确早胚发育过程中,构建小鼠卵母细胞cDNA文库筛选所涉及的相互作用蛋白。方法利用SMART技术,构建酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互作用的靶分子成分为目的,构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。采用Stratagene RNA prepkit抽提500枚卵母细胞总RNA,应用线性化载体pGADT7-Rec在体构建小鼠卵母细胞cDNA酵母双杂交文库。结果文库的滴度为3.7×106,重组片段大小主要集中在0.6-0.9kb,重组率为60%。结论所构建的小鼠卵母细胞cDNA文库可用于酵母双杂交筛选。

关键词：酵母双杂交 cDNA文库同源重组小鼠卵母细胞

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叶黄素对D-半乳糖致氧化损伤小鼠HO-1、TLR4表达的影响

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卫生研究 2010年第4期39卷 430-432页

作者：麦嘉仪沈新南施冬云魏延沈慧吴岷复旦大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室公共卫生安全教育部重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系

目的研究叶黄素缓解D-半乳糖诱导小鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 48只昆明种小鼠随机分为D-半乳糖模型对照组、叶黄素低剂量组(10mg/kg·d)、叶黄素高剂量组(40mg/kg·d)和正常对照组。6周后观察小鼠肝组织活性氧(ROS)、一... 详细信息

目的研究叶黄素缓解D-半乳糖诱导小鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 48只昆明种小鼠随机分为D-半乳糖模型对照组、叶黄素低剂量组(10mg/kg·d)、叶黄素高剂量组(40mg/kg·d)和正常对照组。6周后观察小鼠肝组织活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)含量,总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和线粒体ATP酶(ATPase)活性,RT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平。结果叶黄素低、高剂量组小鼠肝组织ROS含量低于模型对照组(P<0.01);低、高剂量组线粒体Na+-K+-ATP酶及高剂量组线粒体Ca2+-ATP酶活性高于模型对照组(P<0.05);高剂量组TNOS、iNOS活性及NO含量低于模型对照组(P<0.05);高剂量组小鼠肝HO-1mRNA表达高于模型对照组(P<0.05),叶黄素低、高剂量组TLR4mRNA表达均低于模型对照组(P<0.01)。结论叶黄素降低D-半乳糖小鼠氧化应激效应可能与其提高HO-1表达和下调TLR4mRNA表达有关。

关键词：叶黄素氧化应激诱导型一氧化氮合酶血红素氧合酶 toll样受体4 D-半乳糖

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