检索结果-内蒙古大学图书馆

生命的化学 2025年第2期45卷 191-198页

作者：徐巍周珈羽杨敏巫媛李一秋程训佳王菲菲复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/中国医学科学院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市重大传染病和生物安全研究院上海200032

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)作为膜包被的特殊颗粒,广泛存在于多种体液中,具有多重效应功能。呼吸系统发生感染性疾病时,感染部位产生的EVs既包含了宿主细胞的成分,如蛋白质、核酸、脂质等,也包含了病原体的组分,因此在组... 详细信息

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)作为膜包被的特殊颗粒,广泛存在于多种体液中,具有多重效应功能。呼吸系统发生感染性疾病时,感染部位产生的EVs既包含了宿主细胞的成分,如蛋白质、核酸、脂质等,也包含了病原体的组分,因此在组成和功能上具有明显的异质性。同时,EVs具有较好的结构稳定性、良好的生物相容性以及自然的转运能力,作为呼吸系统感染性疾病的新型免疫辅助治疗载体,也备受关注。本文主要综述了EVs在呼吸系统细菌性感染和病毒性感染中的作用机制,以期为利用EVs诊断、治疗呼吸系统感染性疾病提供思路。

关键词：细胞外囊泡呼吸系统感染肺炎结核分枝杆菌 COVID-19

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HBV cccDNA转录代谢调控机制及沉默清除策略

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临床肝胆病杂志 2020年第5期36卷 983-988页

作者：宰文静陈捷亮袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、... 详细信息

已知HBV cccDNA在感染肝细胞的细胞核内以微染色体的形式持续稳定存在,难以被靶向调控和清除。围绕HBV cccDNA持续沉默或降解清除机制及策略的研究是当前慢性乙型肝炎“功能性治愈”目标下的重点。介绍了目前对cccDNA基本生物学特性、转录和代谢调控机制及相关宿主因子的认知,重点分析了cccDNA沉默清除的可能途径和靶向调控策略。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA,环状代谢转录调控抗病毒策略

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肠道菌群失衡与非酒精性脂肪性肝病之间的关系

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中华肝脏病杂志 2017年第10期25卷 789-793页

作者：马明剑吴健复旦大学上海医学院临床医学系 200082 复旦大学基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

近年来，随着生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病率逐渐上升，普通人群发病率为15％-30％，肥胖患者发病率达50％～90％。关于NAFLD的致病机制，“二次打击”学说已得到广泛认可。随着研究深入，人们发现肠道菌群失调可... 详细信息

近年来，随着生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发病率逐渐上升，普通人群发病率为15％-30％，肥胖患者发病率达50％～90％。关于NAFLD的致病机制，“二次打击”学说已得到广泛认可。随着研究深入，人们发现肠道菌群失调可通过增加机体能量吸收、破坏肠黏膜屏障、产生大量毒性代谢产物等方式促进NAFLD的进展。这为揭示NAFLD的发病机制、探索有效治疗方法提供了新切入点。据此，就肠道菌群失调在NAFLD发生、发展过程中的作用做一简要概述。

关键词：脂肪肝肠道菌群失调能量代谢肠黏膜通透性

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应对非酒精性脂肪性肝炎癌变的来袭

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中华肝脏病杂志 2019年第3期27卷 227-231页

作者：刘雪静吴健复旦大学基础医学院病原生物学系教育部卫计委医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学上海市肝病研究所上海200032 复旦大学附属中山医院消化内科上海200032

非酒精性脂肪性肝炎可进展为终末期肝病。部分非酒精性脂肪性肝炎在进展至肝硬化前即可发生肝细胞癌。非酒精性脂肪性肝炎如何发生肝癌的分子基础目前知之甚少,逐渐得到肝病领域的重视。现概述非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌临床及基... 详细信息

非酒精性脂肪性肝炎可进展为终末期肝病。部分非酒精性脂肪性肝炎在进展至肝硬化前即可发生肝细胞癌。非酒精性脂肪性肝炎如何发生肝癌的分子基础目前知之甚少,逐渐得到肝病领域的重视。现概述非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌临床及基础研究,介绍对非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌现有的认识、遇到的困境、常用的方法及急需的对策。

关键词：脂肪肝,非酒精性癌,肝细胞非酒精性脂肪性肝炎

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乙型肝炎病毒核心颗粒展示新型冠状病毒刺突蛋白B细胞线性表位及其免疫原性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 234-240页

作者：陈小美袁雯婕王世杰王建荣杭小锋万延民王勇翔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 海军军医大学长征医院感染科上海200003 复旦大学附属华山医院感染科上海市传染病与生物安全应急响应重点实验室国家传染病医学中心上海200040

目的获得展示新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)刺突蛋白B细胞线性表位的乙型肝炎病毒衣壳样颗粒(capsid-like particles,CLPs)并评价其免疫原性。方法将SARS-CoV-2的4条B细胞线性表位(M1、S1-57、S14P5和S21P2)置换乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)第80位丙氨酸。在大肠埃希菌BL21 Star(DE3)中诱导表达这4种线性表位和HBc的重组融合蛋白(M1-HBc、S1-57-HBc、S14P5-HBc和S21P2-HBc)。SDS-PAGE、Western blot和非变性琼脂糖凝胶电泳(native agarose gel electrophoresis,NAGE)鉴定表达产物。蔗糖密度梯度超速离心纯化CLPs并经Western blot验证其抗原性。用纯化的CLPs免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清中的抗体滴度。结果重组融合蛋白M1-HBc和S1-57-HBc自组装成M1-CLP和S1-57-CLP,S1-57-CLP免疫小鼠后靶向S1-57多肽的抗体滴度高达1∶1000000。结论在原核系统中成功表达了展示SARS-CoV-2 M1或S1-57线性表位的乙型肝炎病毒CLPs,S1-57-CLP具有良好的免疫原性,为研制SARS-CoV-2新型诊断试剂和疫苗提供了新思路。

关键词：免疫原性新型冠状病毒 B细胞线性表位衣壳样颗粒抗体

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两种抽提乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA方法的效果比较

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微生物与感染 2021年第5期16卷 313-321页

作者：胡孔颖金宇焘叶建宇宰文静王洋李雨檬陈捷亮复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系医学分子病毒学教育部/卫健委重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作为一种嗜肝DNA病毒,在感染肝细胞后会在细胞核中形成病毒转录复制的模板和基因储存库——共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),其持续存在是乙型肝炎慢性化和难以治愈的核心,也是此研究领域内的重点。从细胞样品中稳定抽提获取cccDNA对于保证cccDNA检测的准确性至关重要。Hirt法是一种抽提真核细胞染色体外DNA的方法,被用于HBV cccDNA的抽提,但存在操作复杂和耗时长等问题。为简化操作,有研究对Hirt法进行改良,结合硅胶膜离心柱来抽提染色体外DNA,但尚不清楚该法用于HBV cccDNA抽提与传统Hirt法的效果差异。本研究基于HBV cccDNA细胞转染系统、HBV复制细胞系及感染系统,以DNA印迹(Southern blot)和定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)作为检测评价手段,平行比较了传统Hirt-酚/氯仿法与改良Hirt-过柱法抽提HBV cccDNA的效果。结果表明,两种方法具有相当的抽提效率和抽提特异性,而改良Hirt-过柱法耗时更短,提示在进行细胞HBV cccDNA抽提时可选择改良Hirt-过柱法以提高实验效率。

关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA 抽提方法 Hirt法硅胶膜离心柱

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细菌脂多糖对肠道病毒71型感染影响的初步研究

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微生物与感染 2019年第3期14卷 146-152页

作者：周昕龙健儿复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部卫健委医科院医学分子病毒学重点实验室

肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)感染常导致婴幼儿手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD),细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)在多种肠道病毒感染过程中起重要作用。本研究旨在探讨细菌LPS对EV71感染的影响。将EV71与LPS共孵育,测定病毒被热处理后残留病毒的活力,以及病毒感染过程中病毒基因拷贝数的变化。结果显示,热处理后病毒活力逐渐丧失,而经LPS处理的病毒活力丧失的速度减缓,且残留病毒活力与LPS浓度呈正相关;LPS处理后的病毒在黏附、侵入、胞内复制及释放过程中基因拷贝数较对照组均降低;免疫印迹分析表明LPS与抗VP1单克隆抗体可竞争性结合EV71,且粪便中的EV71可被抗大肠埃希菌抗体识别。上述结果提示,LPS可增强EV71热稳定性,抑制EV71感染过程,且LPS可能与EV71结合。

关键词：肠道病毒71型脂多糖热稳定性病毒感染

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鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性

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微生物与感染 2019年第5期14卷 267-276页

作者：文荣王玉燕叶荣复旦大学上海医学院基础医学院教育部卫健委医科院医学分子病毒学重点实验室病原生物学系

核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现... 详细信息

核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的PKCαS657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。

关键词：鼠冠状病毒核衣壳蛋白电负性 PKCα 磷酸化

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基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术检测EV-A71 RNA及其与病毒3D聚合酶的相互作用

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微生物与感染 2023年第4期18卷 203-210页

作者：邢一凡傅美贤龙健儿复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比... 详细信息

RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比。但传统信号放大技术的背景难以消除,无法定量且分辨率低,是RNA-FISH技术应用的巨大障碍。本文基于第3代杂交链反应(hybridization chain reaction version 3.0,HCR v3.0),利用一对分裂式探针消除非特异杂交背景,并引发荧光信号放大反应,建立了针对肠道病毒A71(enterovirus-A71,EV-A71)RNA的敏感、特异的FISH检测方法,并将该技术与蛋白免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测结合,通过高分辨率激光共聚焦成像,成功地在单个细胞水平上检测了EV-A71感染细胞后病毒RNA与其聚合酶3D蛋白的分布变化和相互作用情况,并对细胞中病毒RNA和3D蛋白进行定量。发现相较于传统定量方法,如逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹,新一代RNA-FISH技术在单个细胞水平上病毒RNA和3D聚合酶的表达情况与群体细胞检测的结果在趋势上有明显差异。这说明,基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术,可以克服群体细胞数量增减掩盖病毒组分变化的缺点,从而真实反映病毒在单个细胞中的变化。

关键词：第3代杂交链反应 RNA原位杂交技术肠道病毒A71 3D聚合酶

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鼠肝炎病毒A59毒株感染性克隆的构建及应用

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微生物与感染 2022年第3期17卷 139-147页

作者：于尹冯飞马艳龙朱云凯叶荣张荣复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途... 详细信息

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途径。本研究通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)将MHV的原始毒株A59全长基因组分成6个片段进行扩增,分别克隆到质粒载体,经酶切、体外连接和转录获得全长基因组RNA,然后电转细胞并进行病毒扩增。结果显示,重组病毒rA59与原始毒株的复制特性相似,其为研究MHV的生物学特性提供了实验工具。为方便检测病毒的复制水平,在病毒基因组开放阅读框4(open reading frame 4,ORF4)内分别插入绿色荧光蛋白ZsGreen(Zoanthus *** fluorescent protein)和荧光素酶Nluc(NanoLuc luciferase)报告基因,获得rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒。结果显示,报告病毒所携带的报告基因并不影响病毒复制,可很好地反映病毒的复制特性。使用这两种病毒验证瑞德西韦(remdesivir)的抗病毒活性,分别检测药物处理后病毒的荧光亮度和荧光素酶活性。结果表明,rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒适用于高通量药物筛选,具有重要的应用前景。综上所述,本研究成功建立了MHV A59毒株六质粒反向遗传操作系统,为研究MHV的生物学特性和测试抗病毒药物等提供了有力的工具。

关键词：鼠肝炎病毒感染性克隆病毒拯救报告病毒

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