检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物与感染 2021年第2期16卷 79-87页

作者：田青右朱园飞常豪于琳邓强复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介... 详细信息

为构建一种重组乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制子模型,使其能够在病毒感染的细胞中表达可视化报告基因蛋白,本研究删除HBV基因组核心蛋白(HBV core,HBc)编码区部分序列,构建HBV1.1-ΔHBc113复制子载体。利用内含肽(intein)介导蛋白拼接的特性,选取加强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和超级折叠绿色荧光蛋白(super folder green fluorescent protein,sfGFP)作为外显肽,建立EGFP^(N1-8)/EGFP^(C9-11)和sfGFP^(N1-10)/sfGFP^(C11)蛋白分裂系统。基于ΔHBc113载体,分别构建EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子;应用DNA印迹法(Southern blotting)验证两种rHBV载体的细胞内复制能力。结果显示,构建的HBV1.1-ΔHBc113复制子载体能够在HBc反式互补条件下在转染细胞中形成病毒复制。构建的EGFP^(C9-11)和sfGFP^(C11)重组HBV复制子能够支持HBc互补条件下的细胞内病毒复制,并产生子代病毒颗粒;HBV重组复制子表达的EGFP^(C9-11)或sfGFP^(C11)蛋白在共表达氮端蛋白EGFP^(N)/sfGFP^(N)细胞中,通过intein介导的蛋白质高效拼接,能够形成完整的、有功能的GFP。结果表明,构建的荧光蛋白重组HBV复制子系统能够为HBV高通量药物筛选和HBV易感性研究提供实验工具,具有重要的病毒学意义和应用前景。

关键词：乙型肝炎病毒复制子内含肽绿色荧光蛋白分裂肽

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人类诺如病毒反向遗传体系的构建与验证

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微生物与感染 2021年第2期16卷 71-78页

作者：陈水叶宋武慧易志刚复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学附属上海市公共卫生临床中心上海201508

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构... 详细信息

为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构建质粒pU201和pEF-1α-U201及对应的病毒RNA聚合酶失活的突变质粒。在COS 7细胞和Huh 7细胞中分别共转染T7聚合酶与pU201以及单独转染pEF-1α-U201,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后不同时间点细胞内病毒RNA水平。结果显示,与对照组相比,pU201和pEF-1α-U201的病毒RNA水平升高约2倍和3倍。为便于检测HuNoV复制,在pU201和pEF-1α-U201质粒中分别插入NanoLuc TM荧光素酶报告基因,并命名为pU201-Nluc和pEF-1α-U201-Nluc。将质粒分别转染COS 7细胞和Huh 7细胞,检测转染后不同时间点Nluc荧光素酶活性。结果显示,pEF-1α-U201-Nluc的Nluc荧光素酶活性相较于对照组增高近2倍,而pU201-Nluc无明显升高,提示EF-1α启动子起始病毒复制优于T7启动子。为寻找优于HuNoV GⅡ.3 U201的HuNoV序列,合成HuNoV GⅡ.4临床病毒株全长序列,将其插入EF-1α启动子载体中并转染细胞,于不同时间点检测上清及细胞中病毒RNA水平。结果显示,上清及细胞中病毒RNA水平与对照组相比无显著差异。以上结果提示,已报道可复制的HuNoV GⅡ.3 U201反向遗传体系复制效率有限,且HuNoV反向遗传体系复制能力可能与不同序列的病毒相关。

关键词：人类诺如病毒 T7启动子 EF-1α启动子感染性克隆亚基因组克隆临床病毒株

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结核免疫应答相关白细胞介素的作用机制研究进展

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微生物与感染 2022年第1期17卷 41-46页

作者：刘曦沈洪波王菲菲徐军发广东医科大学检验医学研究所临床免疫学研究室广东东莞523808 同济大学附属上海市肺科医院结核病临床研究中心上海200433 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

白细胞介素(简称白介素)能够调控免疫细胞的分化、增殖及效应功能。结核抗原特异性诱导的白介素的表达水平能够表征结核杆菌感染后的机体状态。在机体的抗结核免疫应答中,白介素可以直接调控吞噬细胞对胞内感染结核杆菌的杀菌活性;也能... 详细信息

白细胞介素(简称白介素)能够调控免疫细胞的分化、增殖及效应功能。结核抗原特异性诱导的白介素的表达水平能够表征结核杆菌感染后的机体状态。在机体的抗结核免疫应答中,白介素可以直接调控吞噬细胞对胞内感染结核杆菌的杀菌活性;也能够调控效应性T细胞的增殖,并进一步激活吞噬细胞的杀菌功能。目前,部分白介素已被证明有望用于结核病的免疫辅助治疗,正在进行相关临床实验。本文对白介素调控免疫细胞抗结核免疫应答的研究进展进行综述,以期为制定结核病的白介素免疫辅助治疗方案提供指导。

关键词：白细胞介素抗结核免疫结核病辅助治疗

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一种有效敲低原代B细胞中目的基因表达以快速鉴定基因功能方法的建立

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微生物与感染 2020年第4期15卷 220-227页

作者：刘佳万思敏白露李建华复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分... 详细信息

B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分化。本研究首先将Drosha酶特异性小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与反转录病毒包装质粒共转染至病毒包装细胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培养基中加入抗CD180抗体,构建了原代B细胞的体外培养体系,使B细胞在保持自身特性的同时具有较强的增殖能力;再次,增加离心感染(spin infection)次数,进一步提高了B细胞的转导效率;另外,通过小鼠预先感染,可收获更多增殖、分化的B细胞以供表型分析。通过上述改进措施,成功敲除了B细胞功能基因Bcl6的表达,验证了其抗凋亡功能。该方法的建立为研究病毒急、慢性感染中B细胞的增殖、分化与缺陷机制奠定了良好基础。

关键词： B细胞基因功能反转录病毒短发夹核糖核酸转导

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结构域B在鼠冠状病毒S蛋白的抗原性及膜融合中的作用

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微生物与感染 2020年第1期15卷 22-30页

作者：徐娅佳王玉燕叶荣复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032

棘突(spike,S)蛋白是冠状病毒表面必不可少的跨膜糖蛋白,在病毒进入宿主细胞时具有结合受体和诱导膜融合的双重作用。大部分冠状病毒S蛋白的受体结合域位于S1-CTD(即相对应的结构域B),而经典的乙型冠状病毒模型鼠肝炎病毒(mouse hepatit... 详细信息

棘突(spike,S)蛋白是冠状病毒表面必不可少的跨膜糖蛋白,在病毒进入宿主细胞时具有结合受体和诱导膜融合的双重作用。大部分冠状病毒S蛋白的受体结合域位于S1-CTD(即相对应的结构域B),而经典的乙型冠状病毒模型鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)的受体mCEACAM1a与S1-NTD(即相对应的结构域A)结合,其结构域B的作用仍未完全清楚。本研究通过构建结构域B和S2膜融合元件的缺失突变体,并使其在鼠神经母细胞瘤细胞系Neuro-2a内成功表达,证实了结构域B对病毒S蛋白导致的细胞-细胞间膜融合是必需的。用不同方法处理的病毒颗粒作为抗原免疫小鼠,所获得的多克隆抗体进一步显示,结构域B不但是S蛋白的主要抗原决定簇,而且能诱导中和抗体明显抑制病毒感染和S蛋白介导的膜融合作用。此结果为阐述不同冠状病毒的致病性与感染性差异提供了新思路。

关键词：鼠冠状病毒棘突蛋白结构域B 优势抗原膜融合

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血流感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药分析及同源性研究

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微生物与感染 2020年第6期15卷 354-359页

作者：杨思宇徐水宝陈重张文宏金嘉琳陈澍复旦大学附属华山医院感染科上海200040 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200030

本研究旨在探讨血流感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CRKP)的耐药特点、分子分型特征和菌株同源性,为CRKP感染的临床诊治和预防控制提供理论参考。收集2015年4月至2018年3月期间就诊于上海... 详细信息

本研究旨在探讨血流感染碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CRKP)的耐药特点、分子分型特征和菌株同源性,为CRKP感染的临床诊治和预防控制提供理论参考。收集2015年4月至2018年3月期间就诊于上海市某三甲医院患者血标本分离的肺炎克雷伯菌(KP)非重复菌株,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定仪鉴定细菌并进行药物敏感性试验,共获得51株CRKP。对CRKP菌株使用纸片扩散法或琼脂稀释法进行15种抗菌药物的敏感性试验;采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测碳青霉烯酶基因型;通过脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型(MLST)技术分析菌株同源性。结果显示,51株CRKP对检测的15种临床常用抗菌药物呈广泛耐药,对其中的哌拉西林、头孢唑啉、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢呋辛、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和环丙沙星耐药率为100%;对阿米卡星、庆大霉素和复方新诺明的耐药率较高,分别为76.5%、90.2%和62.8%;对替加环素耐药率较低,为3.9%。51株CRKP均检测出bla KPC基因,经测序鉴定为bla KPC-2基因,提示产KPC-2是CRKP对碳青霉烯类耐药的主要机制。MLST检测到4种ST型别,以ST11型为主,共43株(84.3%),另有ST15型6株(11.8%),ST4845型1株及1株新分型。51株CRKP的PFGE图谱相似性系数在62.9%~100%,可分为19个簇(A-S簇),每簇分别包含1~12个菌株。其中A簇(13.7%)和G簇(23.5%)包含的菌株相对较多,且MLST分型均为ST11型,为优势簇。G簇包含7个型别,G4型为主要克隆菌株。ST11型为CRKP的主要型别,PFGE分析表明该院存在菌株的克隆传播,应规范抗菌药物使用,同时加强细菌耐药性监测和医院内感染的防控工作。

关键词：抗生素碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌血流感染脉冲场凝胶电泳多位点序列分型同源性

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应对非酒精性脂肪性肝炎癌变的来袭

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中华肝脏病杂志 2019年第3期27卷 227-231页

作者：刘雪静吴健复旦大学基础医学院病原生物学系教育部卫计委医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学上海市肝病研究所上海200032 复旦大学附属中山医院消化内科上海200032

非酒精性脂肪性肝炎可进展为终末期肝病。部分非酒精性脂肪性肝炎在进展至肝硬化前即可发生肝细胞癌。非酒精性脂肪性肝炎如何发生肝癌的分子基础目前知之甚少,逐渐得到肝病领域的重视。现概述非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌临床及基... 详细信息

非酒精性脂肪性肝炎可进展为终末期肝病。部分非酒精性脂肪性肝炎在进展至肝硬化前即可发生肝细胞癌。非酒精性脂肪性肝炎如何发生肝癌的分子基础目前知之甚少,逐渐得到肝病领域的重视。现概述非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌临床及基础研究,介绍对非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌现有的认识、遇到的困境、常用的方法及急需的对策。

关键词：脂肪肝,非酒精性癌,肝细胞非酒精性脂肪性肝炎

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新型冠状病毒上海株(nCoV-SH01)的分离和鉴定

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微生物与感染 2020年第1期15卷 16-21页

作者：张荣易志刚王玉燕滕峥徐巍宋武慧蔡霞孙志平谷陈建周艳秋陈洪友叶荣韩文东朱云凯冯飞房方皓李崇山张曦瞿涤付晨谢幼华袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 上海市疾病预防控制中心上海200336

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情对人类生命健康构成极大威胁。病毒的分离是构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)细胞感染模型和动物感染模型的基础。本研究利用冠状病毒易感的Vero E6细胞,从... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情对人类生命健康构成极大威胁。病毒的分离是构建新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)细胞感染模型和动物感染模型的基础。本研究利用冠状病毒易感的Vero E6细胞,从1例上海感染者的咽拭子中分离到一株2019-nCoV,命名为nCoV-SH01。对该毒株全基因组采用一代Sanger和二代Illumina法测序,发现该毒株与GenBank MN908947的同源性>99.99%。免疫荧光检测显示,该毒株与COVID-19康复者的血清呈阳性反应。当nCoV-SH01感染Vero E6细胞后,导致典型的合胞体病变,细胞病变效应明显且进展迅速,提示nCoV-SH01可用于进一步建立2019-nCoV的细胞感染和动物感染模型,为开展致病性研究以及抗病毒药物和疫苗研发奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒合胞体 Vero E6细胞鼻/咽拭子细胞模型

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免疫系统:严重急性呼吸综合征冠状病毒2型感染后的一把双刃剑

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微生物与感染 2020年第5期15卷 309-315页

作者：周韵娇江庆玲王乔复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院四川成都610041

免疫系统是人体内的一把双刃剑,它一方面能清除侵染的各类病原体,但另一方面其异常调控又能在人体中引发各类免疫性疾病,甚至导致死亡。本文将简要讨论人体免疫系统与新的冠状病毒﹝即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respi... 详细信息

免疫系统是人体内的一把双刃剑,它一方面能清除侵染的各类病原体,但另一方面其异常调控又能在人体中引发各类免疫性疾病,甚至导致死亡。本文将简要讨论人体免疫系统与新的冠状病毒﹝即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)〕感染的相互关系。一方面免疫系统能全方位地预防病毒感染,进化出一整套从分子到细胞、从短期到长期的病毒清除机制;另一方面,免疫系统又可能引发“细胞因子风暴”,给SARS-CoV-2的感染患者带来负面作用。本文还将讨论受到广泛关注的免疫相关的治疗策略,着重探讨抗体依赖的增强效应(antibody-dependent enhancement,ADE)可能给疫苗研发带来的困难与挑战。

关键词：免疫系统严重急性呼吸综合征冠状病毒2型细胞因子风暴抗体疫苗抗体依赖性增强效应

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新型冠状病毒肺炎疫情中医护人员个人防护装备的选择与使用

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微生物与感染 2020年第1期15卷 44-51页

作者：饶琳韩文东李红陈力上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院上海200030 上海市胚胎源性疾病重点实验室上海200030 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 复旦大学三级生物安全实验室上海200032

个人防护设备(personal protective equipment,PPE)是控制院内感染的必要装备,可有效降低医护人员职业暴露的风险。目前,新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情引起国际高度关注,国内已确诊7万多例患者,死亡人数超过... 详细信息

个人防护设备(personal protective equipment,PPE)是控制院内感染的必要装备,可有效降低医护人员职业暴露的风险。目前,新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫情引起国际高度关注,国内已确诊7万多例患者,死亡人数超过2700人。此外,医护人员的感染超过3000多例,这给医护人员(尤其是为COVID-19患者提供近距离诊疗和护理的医务人员),带来了新的风险和挑战。本文从PPE的应用标准,正确穿、脱方法及预防防护后暴露的注意事项进行汇总和讨论。

关键词：医护人员个人防护装备风险评估防护后暴露

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